本文選題：喉腫瘤　切入點：免疫球蛋白M　出處：《瀘州醫(yī)學院》2011年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的：免疫球蛋白(immunoglobulin, Ig)是機體免疫系統(tǒng)中非常重要的免疫分子,其功能主要是介導體液免疫,傳統(tǒng)的免疫學理論認為,Ig是B淋巴細胞特有產(chǎn)物,機體其它細胞不產(chǎn)生Ig。然而,近年來人們發(fā)現(xiàn)Ig異位表達于多種上皮源性的惡性腫瘤組織和細胞系,初步研究表明異位表達的Ig具有生長因子樣作用。我們研究小組已對IgM在多種上皮來源腫瘤組織和細胞系中的表達進行了報道,本實驗旨在探討喉鱗癌Hep-2細胞中IgM蛋白的表達情況,并對喉鱗癌Hep-2細胞表達IgM蛋白的生物學活性進行初步研究。方法：進行喉鱗癌Hep-2細胞體外培養(yǎng),分別通過免疫細胞化學技術(鏈霉親和素生物素法,SABC法)、免疫印記法(Western blot)以及流式細胞術(FCM)檢測Hep-2細胞中IgM蛋白的表達情況；應用抗人IgM抗體,設置時間梯度和濃度梯度,通過細胞增殖抑制試驗(MTS法)研究抗人IgM抗體對喉鱗癌Hep-2細胞生長增殖活性的影響,并對細胞形態(tài)進行觀察；通過軟瓊脂細胞集落形成實驗檢測不同濃度抗人IgM抗體對Hep-2細胞增殖能力的影響；通過流式細胞儀(Annexin V/PI染色)和Hoechst染色方法,研究抗人IgM抗體對喉鱗癌Hep-2細胞凋亡的影響,并觀察凋亡細胞形態(tài)；應用流式細胞儀PI染色法觀察抗人IgM抗體對喉鱗癌Hep-2細胞細胞周期的影響。結果：免疫細胞化學SABC法顯示Hep-2細胞存在IgM蛋白表達且主要表達于細胞漿中；將Hep-2細胞的蛋白提取液進行免疫印記法檢測,在分子量75KD處檢出了陽性信號,提示Hep-2細胞存在IgM蛋白的表達；應用流式細胞儀間接免疫熒光法檢測出Hep-2細胞的熒光強度為12.4±2.55,陽性對照組Raji細胞熒光強度為17.2±2.30,分別與陰性對照組熒光強度2.29±0.50比較差異顯著(P0.05),說明IgM在喉鱗癌Hep-2細胞中有表達；MTS顯示喉鱗癌Hep-2細胞的抑制率隨時間延長而增高,在第三天開始出現(xiàn)明顯抑制作用,同時喉鱗癌Hep-2細胞的抑制率隨濃度增加而增高,在50μg/ml濃度開始出現(xiàn)明顯抑制作用,說明抗人IgM抗體具有時間和濃度依賴性地抑制喉鱗癌Hep-2細胞增殖生長的作用(P0.05),并使細胞出現(xiàn)相應形態(tài)學改變；軟瓊脂細胞集落形成實驗顯示抗人IgM抗體能明顯抑制喉鱗癌Hep-2細胞的增殖能力,并具有濃度依賴性,與對照組比較有顯著性差異(P0.05)；抗人IgM抗體能明顯促進喉鱗癌Hep-2細胞凋亡,且使喉鱗癌Hep-2細胞呈現(xiàn)出典型凋亡形態(tài)改變,流式細胞儀Annexin V/PI染色和Hoechst染色方法檢測Hep-2細胞凋亡率分別為(20.33±1.93)%和(20.45±3.45)%,與對照組比較差異顯著(均P0.05)；流式細胞術顯示抗人IgM抗體還能影響喉鱗癌Hep-2細胞的細胞周期,導致G1期細胞減少,S期細胞增多,從而使細胞周期阻滯于S期(P0.05)。結論：喉鱗癌Hep-2細胞能夠表達IgM蛋白,且主要表達于Hep-2細胞漿中,抗人IgM抗體能夠抑制喉鱗癌Hep-2細胞增殖能力,誘導Hep-2細胞凋亡,并導致細胞周期阻滯,提示喉鱗癌細胞表達IgM具有生長因子樣活性,這可能為喉鱗癌治療提供一個新的靶點。
[Abstract]:Objective: immunoglobulin (immunoglobulin, Ig) is an important immune molecule in the body's immune system, its main function is to mediate humoral immunity, according to the traditional immunological theory, Ig is the specific product of B lymphocytes and other cells in the body does not produce Ig. however, in recent years it was found that malignant tumor of ectopic expression of Ig in epithelial tissue the source and cell lines, preliminary study showed that ectopic expression of Ig is a growth factor like role. Our research group has reported on the expression of IgM in Epitheliogenic Malignant tumor tissues and cell lines, to investigate the expression of IgM protein in laryngeal squamous cell carcinoma Hep-2 cells, and the expression of Hep-2 in laryngeal squamous cell carcinoma cells the biological activity of IgM protein was preliminarily studied. Methods: in vitro culture of laryngeal squamous cell carcinoma Hep-2 cells, respectively, by immunohistochemistry (streptavidin biotin method, SABC 娉，

本文編號：1574927