發(fā)布時(shí)間：2018-03-05 19:40

  本文選題：SIRT　切入點(diǎn)：青光眼小梁網(wǎng)細(xì)胞　出處：《四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)》2014年04期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的研究Ⅲ類組蛋白去乙酰化酶SIRT1與青光眼小梁網(wǎng)細(xì)胞(GTM)DNA雙鏈損傷(DSBs)修復(fù)能力及細(xì)胞衰老之間的關(guān)系。方法首先通過RT-PCR和Western blot檢測正常小梁網(wǎng)細(xì)胞(HTM)與GTM之間SIRT1表達(dá)的差異;然后將HTM、GTM細(xì)胞分別分為4組,白藜蘆醇組(0.5μmol/L Res干預(yù)24h)、SIRT1-ShRNA組(構(gòu)建成功的SIRT1干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞)、microRNA34a組(構(gòu)建成功的microRNA34a表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞)以及Control組,通過Western blot檢測各組細(xì)胞中SIRT1表達(dá)水平的差異;SA-β-Gal衰老染色檢測連續(xù)生長10h、32h、3d、6d后各組細(xì)胞的衰老變化;中性彗星電泳檢測經(jīng)1.33mol/L H2O2液處理0h、2h時(shí)各組細(xì)胞中DNA雙鏈損傷情況;Western blot檢測1.33mol/L H2O2液處理0h、1h、2h后,各組細(xì)胞中γ-H2AX表達(dá)的變化情況。結(jié)果 HTM及GTM細(xì)胞中均存在SIRT1的表達(dá),且HTM中的表達(dá)要高于GTM;HTM、GTM細(xì)胞各組內(nèi)比較發(fā)現(xiàn),SIRT1蛋白的表達(dá)水平呈Res組Control組microRNA34a組SIRT1-ShRNA組趨勢;SA-β-Gal衰老染色則發(fā)現(xiàn)在相同時(shí)間點(diǎn),GTM細(xì)胞的衰老程度均高于HTM細(xì)胞,而在同一類細(xì)胞中,SIRT1-ShRNA組細(xì)胞最先表現(xiàn)出衰老,且隨著時(shí)間的延長,其衰老程度也最為嚴(yán)重,Res干預(yù)細(xì)胞24h后,能明顯延緩細(xì)胞衰老。中性彗星電泳檢測表明經(jīng)氧化劑處理后,GTM組雙鏈DNA的損傷情況比HTM組嚴(yán)重,并呈現(xiàn)出SIRT1-ShRNA組microRNA34a組Control組Res組的趨勢,γ-H2AX表達(dá)量的檢測結(jié)果與中性彗星電泳的結(jié)果一致。結(jié)論 SIRT1表達(dá)活性的下調(diào)可能是誘發(fā)青光眼的因素之一;Res能顯著增強(qiáng)HTM細(xì)胞中SIRT1的表達(dá)活性,上調(diào)的SIRT1能促進(jìn)HTM細(xì)胞DNA雙鏈損傷修復(fù)的能力,維持細(xì)胞基因組的穩(wěn)定性,進(jìn)而減緩細(xì)胞的衰老。
[Abstract]:Objective to study the relationship between histone deacetylase (SIRT1) and repair ability and cell senescence of glaucoma trabecular meshwork (GTM) cells. Methods the expression of SIRT1 in normal trabecular meshwork cells and GTM was detected by RT-PCR and Western blot. Then the HTMM-GTM cells were divided into four groups: resveratrol group (0.5 渭 mol/L Res) and Control group (SIRT1 interference plasmid transfected cells) and Control group. The expression of SIRT1 was detected by Western blot. SA- 尾 -Gal senescence staining was used to detect the changes of cell senescence in each group after 3 days of continuous growth for 10 h or 32 h. Neutral comet electrophoresis was used to detect DNA double strand damage in cells treated with 1.33 mol / L H2O2 solution for 2 h. Western blot was used to detect the changes of 緯 -H2AX expression in cells treated with 1.33 mol / L H2O2 solution for 1 h or 2 h. Results the expression of SIRT1 was detected in both HTM and GTM cells. The expression level of sirt1 protein in HTM was higher than that in GTM group. It was found that the expression level of sirt1 protein was higher than that of HTM cell in Control group, microRNA34a group, SIRT1-ShRNA group, SA- 尾 -Gal senescence staining, and at the same time, the senescence degree of GTM cells was higher than that of HTM cell at the same time. In the same type of cells, the cells of SIRT1-ShRNA group showed senescence first, and with the prolongation of time, the senescence degree of the cells was the most serious after Res intervention for 24 hours. Neutral comet electrophoresis showed that the damage of double-stranded DNA in GTM group was more serious than that in HTM group. The results of 緯 -H2AX expression were consistent with those of neutral comet electrophoresis. Conclusion the down-regulation of SIRT1 expression activity may be one of the factors inducing glaucoma to increase HTM cells. The expression activity of SIRT1, Upregulated SIRT1 can promote the ability of DNA double strand damage repair in HTM cells, maintain the stability of cell genome, and then slow down cell senescence.
【作者單位】： 四川大學(xué)華西基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室;中山大學(xué)中山眼科中心眼科學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【分類號(hào)】：R775

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 李莉萍;曾衛(wèi)民;郭明日;;SIRT1的生物學(xué)功能及其在胰島素抵抗中的作用[J];生命科學(xué)研究;2010年04期

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 李碧俠;趙芳;付言峰;王學(xué)敏;方曉敏;涂楓;任守文;王金玉;;豬卵巢顆粒細(xì)胞中SIRT1基因表達(dá)量與雌激素分泌的相關(guān)性[J];江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2013年03期

2 高洋;龐廣昌;;白藜蘆醇對(duì)SIRT1的調(diào)節(jié)作用及SIRT家族對(duì)代謝綜合征的防治意義[J];食品科學(xué);2011年23期

3 唐外姣;周本杰;;基于SIRT1靶點(diǎn)的非酒精性脂肪肝研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2011年19期

4 李碧俠;趙芳;任守文;王學(xué)敏;方曉敏;付言峰;涂楓;王金玉;;白黎蘆醇誘導(dǎo)的去乙�；窼IRT1高表達(dá)對(duì)豬卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的影響[J];中國畜牧雜志;2013年03期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 李碧俠;去乙�；窼IRT1對(duì)母豬卵巢泡發(fā)育的影響[D];揚(yáng)州大學(xué);2013年

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 郭�？�;金海鷹;王麗婭;張洪洋;楊鑫;金海燕;;晶狀體上皮細(xì)胞端粒酶活性及細(xì)胞衰老的實(shí)驗(yàn)研究[J];眼科研究;2005年06期

2 翟所強(qiáng);;去乙�；窼IRT1抗衰老研究進(jìn)展對(duì)防治老年性聾的啟示[J];聽力學(xué)及言語疾病雜志;2010年02期

3 梁�；�;張?jiān)嘛w;;抑癌基因p16與鼻咽癌相關(guān)性的研究進(jìn)展[J];廣東醫(yī)學(xué);2007年07期

4 柯屹峰;陳松;;復(fù)制衰老在眼部衰老改變中的研究進(jìn)展[J];眼科研究;2008年03期

5 張煜昭,孫京華;端粒酶系統(tǒng)在增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變中的研究進(jìn)展[J];臨床眼科雜志;2005年03期

6 吳平;柒琳;章華;蔣衛(wèi)紅;趙素萍;;POT1蛋白在人鼻咽癌細(xì)胞系及鼻咽癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J];中國耳鼻咽喉顱底外科雜志;2011年01期

7 李強(qiáng);馬蕾;;增齡對(duì)兔角膜緣干細(xì)胞標(biāo)志物ABCG2表達(dá)的影響[J];山西醫(yī)藥雜志;2009年07期

8 石妍;楊帆;葛紅巖;劉平;;改良兔角膜上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)及純化的方法[J];眼科新進(jìn)展;2010年07期

9 陳松;崔蘭君;馬修彬;韓泉洪;;藍(lán)光誘導(dǎo)豬視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞復(fù)制衰老的實(shí)驗(yàn)研究[J];臨床眼科雜志;2008年06期

10 盧偉,秦兆冰;老年性聾病因?qū)W研究進(jìn)展及啟示[J];醫(yī)學(xué)與社會(huì);2000年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前2條

1 郭偉;黃志剛;陳曉紅;范爾鐘;張盛忠;;衰老經(jīng)典標(biāo)志物在喉癌及癌前病變中的表達(dá)研究[A];2010全國耳鼻咽喉頭頸外科中青年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

2 趙穎;牛膺筠;;促紅細(xì)胞生成素延緩過氧化氬誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞衰老的作用機(jī)制[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二屆全國眼科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 張自峰;年齡相關(guān)性白內(nèi)障相關(guān)基因NDRG2和MRG15的功能研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2006年

2 胡媛;SIRT1在內(nèi)耳擬老化伴線粒體DNA4834缺失突變細(xì)胞模型中的作用及其機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前3條

1 柯屹峰;藍(lán)光誘導(dǎo)大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞復(fù)制衰老動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2008年

2 金海鷹;晶狀體上皮細(xì)胞端粒酶活性及衰老、凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[D];暨南大學(xué);2003年

3 陳輝;HUVEC及RGC的端粒變化與其凋亡[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2003年

，

本文編號(hào)：1571605