本文選題：Waardengurg綜合征　切入點(diǎn)：PAX　出處：《聽(tīng)力學(xué)及言語(yǔ)疾病雜志》2014年01期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的通過(guò)構(gòu)建PAX3基因及其突變體表達(dá)質(zhì)粒初步研究其外源性表達(dá)和定位表達(dá),為研究Waardenburg綜合征(Waardenburg syndrome,WS)發(fā)病機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法通過(guò)分子克隆技術(shù)雙酶切pECEPAX3和pcDNA3.0-HA后連接構(gòu)建PAX3基因重組真核細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.0-PAX3-HA,以其為模板分別構(gòu)建PAX3基因新發(fā)突變H80D和H186fs表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.0-H80D-HA和pcDNA3.0-H186fs-HA,DNA測(cè)序鑒定。將PAX3、H80D和H186fs表達(dá)質(zhì)粒分別瞬時(shí)轉(zhuǎn)染小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(NIH3T3細(xì)胞),采用Western blot和細(xì)胞免疫熒光法分別檢測(cè)和觀察野生PAX3蛋白和突變H80D、H186fs蛋白在NIH3T3細(xì)胞中的表達(dá)和分布。結(jié)果 PAX3及其突變體H80D和H186fs表達(dá)質(zhì)粒經(jīng)DNA測(cè)序鑒定序列正確,三者在NIH3T3細(xì)胞中正確表達(dá),H80D與PAX3僅在細(xì)胞核中分布,H186fs在細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核中均有分布。結(jié)論本研究成功構(gòu)建了PAX3基因及其突變體真核細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒,突變對(duì)PAX3蛋白的亞細(xì)胞定位產(chǎn)生影響,為在體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究國(guó)人PAX3基因突變致WS發(fā)病的分子機(jī)制奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to construct the expression plasmid of PAX3 gene and its mutants to study the expression and localization of exogenous expression, for the study of Waardenburg syndrome (Waardenburg syndrome WS) to provide experimental basis for the pathogenesis. Methods by molecular cloning technique and double enzyme digestion of pECEPAX3 and pcDNA3.0-HA. The recombinant PAX3 gene eukaryotic expression plasmid pcDNA3.0-PAX3-HA, which was as a template we constructed PAX3 new gene mutation of H80D and H186fs expression plasmid pcDNA3.0-H80D-HA and pcDNA3.0-H186fs-HA DNA sequencing. PAX3, H80D and H186fs expression plasmids were transiently transfected with mouse embryonic fibroblast cells (NIH3T3 cells), were used to detect and observe the wild PAX3 protein and mutant H80D by Western blot and immunofluorescence, expression and distribution H186fs protein in NIH3T3 cells. The results of PAX3 and its mutant H80D and H186fs plasmid DNA sequencing identification Set the correct sequence, the correct expression of three in NIH3T3 cells, H80D and PAX3 distribution only in the nucleus, H186fs were distributed in cytoplasm and nucleus. Conclusion: This study successfully constructed PAX3 mutant gene and its eukaryotic expression plasmid, producing mutations that affect the subcellular localization of PAX3 protein in vitro, for further study in China the human PAX3 gene laid the foundation of molecular mechanism of mutagenesis induced by the pathogenesis of WS.

【作者單位】： 新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院耳鼻咽喉科;中南大學(xué)醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;中南大學(xué)湘雅醫(yī)院耳鼻咽喉科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81260160,81170923)資助
【分類號(hào)】：R764

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1557698