本文關(guān)鍵詞： IL-10 基因轉(zhuǎn)染 腺病毒 角膜移植 免疫耐受　出處：《遼寧醫(yī)學(xué)院》2013年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的 應(yīng)用大鼠穿透性角膜移植模型，將腺病毒介導(dǎo)的IL-10轉(zhuǎn)染角膜作為供體，研究其是否可以誘導(dǎo)角膜移植的免疫耐受。 方法 1、取Wistar大鼠角膜植片，對照組:含10%小牛血清（FCS）的RPMI-1640培養(yǎng)基；GFP組：含有滴度為108的GFP-Adenovirus重組腺病毒的10%小牛血清（FCS）的RPMI-1640培養(yǎng)基； IL-10組：含有滴度為108的IL-10-GFP-Adenovirus重組腺病毒的10%小牛血清（FCS）的RPMI-1640培養(yǎng)基。4℃，3h后三組培養(yǎng)基均換成含10%小牛血清（FCS）的RPMI-1640培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，分別在3、24、48、72小時用倒置熒光顯微鏡和共聚焦顯微鏡觀察角膜植片的熒光表達(dá)情況。Westen Blot方法檢測轉(zhuǎn)染后角膜植片中IL-10的蛋白表達(dá)情況。 2、動物實(shí)驗(yàn)分為三組：對照組、GFP組、IL-10組，以Wistar大鼠為供體，SD大鼠為受體，分別取供體角膜植片培養(yǎng)在每組對應(yīng)的培養(yǎng)基中，在4℃條件下培養(yǎng)3h后建立大鼠穿透性角膜移植模型。術(shù)后每日在裂隙燈下觀察角膜植片的狀態(tài)，，并記錄角膜植片存活時間。術(shù)后第12天通過RT-PCR方法、ELISA方法檢測各組細(xì)胞因子的變化，應(yīng)用組織病理學(xué)檢測各組術(shù)眼角膜的病理變化。 結(jié)果 1、在四個時間點(diǎn)觀察，3h時各組未見熒光表達(dá)，24h時GFP組和IL-10組角膜內(nèi)皮層有少量熒光表達(dá)，到48h時表達(dá)達(dá)到高峰，至72h時熒光表達(dá)逐漸減退。Westen Blot方法檢測到在IL-10組轉(zhuǎn)染的角膜植片中IL-10蛋白的高表達(dá)。 2、IL-10組的角膜植片存活時間（16.00±1.67d）較對照組（10.17±1.94d）、GFP組（12.00±0.89d）顯著延長（P＜0.01），GFP組與對照組比較差異無顯著性（P＞0.05）。RT-PCR方法檢測IL-10組角膜中IL-2、INF-γ與其他各組比較明顯降低， TGF-β、IL-10、IL-4與其他各組比較明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；ELISA方法檢測房水中IL-4與其他各組比較明顯升高， TNF-α與其他各組比較明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），組織病理學(xué)檢查示IL-10組角膜植片輕度水腫、增厚，且炎性細(xì)胞浸潤較少。 結(jié)論 1.、在體外，GFP-Adenovirus和IL-10-GFP-Adenovirus能順利轉(zhuǎn)染進(jìn)角膜組織中。 2、用IL-10基因轉(zhuǎn)染過的角膜植片能誘導(dǎo)角膜移植免疫耐受，延長角膜植片的存活時間。Th1/Th2的偏離及Th3因子增高，是其誘導(dǎo)移植耐受的機(jī)制之一。
[Abstract]:Purpose. A rat model of penetrating keratoplasty was used to investigate whether adenovirus-mediated IL-10 was transfected into cornea as a donor and whether it could induce the immune tolerance of corneal transplantation. Method. 1. Cornea grafts were taken from Wistar rats. Control group: RPMI-1640 medium containing 10% calf serum): RPMI-1640 medium containing 108-titer GFP-Adenovirus recombinant adenovirus 10% calf serum; IL-10 group: RPMI-1640 containing 108-titer IL-10-GFP-Adenovirus recombinant adenovirus 10% calf serum. After 3 hours at 4 鈩

本文編號：1520636