本文關(guān)鍵詞： IL-10 基因轉(zhuǎn)染 腺病毒 角膜移植 免疫耐受　出處：《遼寧醫(yī)學院》2013年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的 應用大鼠穿透性角膜移植模型，將腺病毒介導的IL-10轉(zhuǎn)染角膜作為供體，研究其是否可以誘導角膜移植的免疫耐受。 方法 1、取Wistar大鼠角膜植片，對照組:含10%小牛血清（FCS）的RPMI-1640培養(yǎng)基；GFP組：含有滴度為108的GFP-Adenovirus重組腺病毒的10%小牛血清（FCS）的RPMI-1640培養(yǎng)基； IL-10組：含有滴度為108的IL-10-GFP-Adenovirus重組腺病毒的10%小牛血清（FCS）的RPMI-1640培養(yǎng)基。4℃，3h后三組培養(yǎng)基均換成含10%小牛血清（FCS）的RPMI-1640培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，分別在3、24、48、72小時用倒置熒光顯微鏡和共聚焦顯微鏡觀察角膜植片的熒光表達情況。Westen Blot方法檢測轉(zhuǎn)染后角膜植片中IL-10的蛋白表達情況。 2、動物實驗分為三組：對照組、GFP組、IL-10組，以Wistar大鼠為供體，SD大鼠為受體，分別取供體角膜植片培養(yǎng)在每組對應的培養(yǎng)基中，在4℃條件下培養(yǎng)3h后建立大鼠穿透性角膜移植模型。術(shù)后每日在裂隙燈下觀察角膜植片的狀態(tài)，，并記錄角膜植片存活時間。術(shù)后第12天通過RT-PCR方法、ELISA方法檢測各組細胞因子的變化，應用組織病理學檢測各組術(shù)眼角膜的病理變化。 結(jié)果 1、在四個時間點觀察，3h時各組未見熒光表達，24h時GFP組和IL-10組角膜內(nèi)皮層有少量熒光表達，到48h時表達達到高峰，至72h時熒光表達逐漸減退。Westen Blot方法檢測到在IL-10組轉(zhuǎn)染的角膜植片中IL-10蛋白的高表達。 2、IL-10組的角膜植片存活時間（16.00±1.67d）較對照組（10.17±1.94d）、GFP組（12.00±0.89d）顯著延長（P＜0.01），GFP組與對照組比較差異無顯著性（P＞0.05）。RT-PCR方法檢測IL-10組角膜中IL-2、INF-γ與其他各組比較明顯降低， TGF-β、IL-10、IL-4與其他各組比較明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；ELISA方法檢測房水中IL-4與其他各組比較明顯升高， TNF-α與其他各組比較明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），組織病理學檢查示IL-10組角膜植片輕度水腫、增厚，且炎性細胞浸潤較少。 結(jié)論 1.、在體外，GFP-Adenovirus和IL-10-GFP-Adenovirus能順利轉(zhuǎn)染進角膜組織中。 2、用IL-10基因轉(zhuǎn)染過的角膜植片能誘導角膜移植免疫耐受，延長角膜植片的存活時間。Th1/Th2的偏離及Th3因子增高，是其誘導移植耐受的機制之一。
[Abstract]:Purpose. A rat model of penetrating keratoplasty was used to investigate whether adenovirus-mediated IL-10 was transfected into cornea as a donor and whether it could induce the immune tolerance of corneal transplantation. Method. 1. Cornea grafts were taken from Wistar rats. Control group: RPMI-1640 medium containing 10% calf serum): RPMI-1640 medium containing 108-titer GFP-Adenovirus recombinant adenovirus 10% calf serum; IL-10 group: RPMI-1640 containing 108-titer IL-10-GFP-Adenovirus recombinant adenovirus 10% calf serum. After 3 hours at 4 鈩

本文編號：1520636