本文關鍵詞： 鼻咽腫瘤 胰島素樣生長因子-1受體 苦鬼臼毒素(PPP) 內(nèi)化 β-抑制蛋白1 免疫印跡 絲裂素活化蛋白激酶 絲/蘇氨酸激酶　出處：《武漢大學》2011年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：全文由四部分組成。 第一部分胰島素樣生長因子-Ⅰ受體蛋白在鼻咽癌細胞中的表達及其臨床意義 目的：探討鼻咽癌組織中胰島素樣生長因子1受體(1GF-1R)蛋白的表達及其臨床意義。方法：采用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)技術和免疫組織化學方法檢測63例鼻咽癌組織和鼻咽部炎性粘膜組織中IGF-1R的表達,對其中45例鼻咽癌患者進行隨訪觀察5年,并采用免疫印跡技術(Western blots)檢測三種體外培養(yǎng)的鼻咽癌細胞株中IGF-1R蛋白的表達情況。結果：在鼻咽癌組織中IGF-1R mRNA和蛋白的表達明顯高于鼻咽慢性炎癥組織。63例鼻咽癌和21鼻咽粘膜(伴慢性炎癥)組織中的IGF-1R陽性表達率分別為82.5%和14.3%,在鼻咽癌中的表達陽性率明顯高于鼻咽炎性組織(X2=32.45,P0.01)。鼻咽癌組織中IGF-IR的表達與TNM分期和頸淋巴結轉移有關,有頸淋巴結轉移者其表達陽性率較高；Ⅰ～Ⅱ期表達陽性率較Ⅲ～Ⅳ期低(P0.01)；鼻咽癌局部復發(fā)者IGF-1R陽性表達率(89.5%)明顯高于無局部復發(fā)者(53.9%,P0.05)；鼻咽癌放療后生存期小于5年者的陽性表達率(88.9%)明顯高于5年以上生存期者的陽性表達率(51.9%,P0.01)；病理分化程度越高IGF-1R陽性表達率越低,但鼻咽癌病理類型間比較差異無顯著性(P0.05)。在三種鼻咽癌細胞系中IGF-IR的表達明顯高于鼻咽炎癥粘膜組織,其中TW03表達最強,CNE2其次,CNE1表達稍弱。結論：鼻咽癌組織中存在IGF-1R的過表達現(xiàn)象,IGF-1R的異常表達與鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展存在一定的關系,可考慮將其作為鼻咽癌早期診斷和判斷預后的指標之一。IGF-1R可能是復發(fā)或轉移性鼻咽癌治療中一個潛在的靶分子。 第二部分PKB/AKT和ERK/MAPK兩條信號通路在鼻咽癌細胞中的活性表達和臨床意義 背景：IGF-1R已經(jīng)被證實在細胞的生存、凋亡、增殖和分化中起著非常重要的作用,在某些惡性腫瘤組織中它能異常激活兩條激酶系統(tǒng)如Akt/蛋白激酶B和細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(MAPK)。目的：探討鼻咽癌細胞中PKB/AKT和ERK/MAPK信號轉導通路異常激活與鼻咽癌細胞發(fā)生發(fā)展的關系。方法：應用Western blots檢測鼻咽癌組織和鼻咽炎性組織中IGF-1R、AKT和ERK1/2蛋白的表達情況；然后采用相同實驗方法檢測鼻咽癌細胞系CNE2中磷酸化的PAKT和pERK1/2蛋白的表達,以及給予胰島素樣生長因子-1刺激癌細胞后磷酸化的pAkt和pERK的表達水平,和同時用PKB/AKT、ERK/MAPK通路抑制劑Wortmannin、PD98059對鼻咽癌細胞PKB/AKT、ERK/MAPK信號轉導通路磷酸化的調(diào)節(jié)。結果：鼻咽癌細胞系CNE2中IGF-1R、Akt和Erk1/2蛋白水平明顯高于鼻咽炎性組織；IGF-1可刺激鼻咽癌細胞系CNE2pAKT、pErk1/2的表達增加,與對照組相比,其pAkt和pErk表達明顯增高；Wortmannin和PD98059能分別有效阻滯IGF-1對pAKT和pERK的激活。結論：IGF-1R的過度表達和PKB/AKT和ERK/MAPK信號轉導通路的異常激活與鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展有密切的關系,而IGF-1R系統(tǒng)可能是復發(fā)或轉移性鼻咽癌治療中一個潛在的治療靶分子。 第三部分Picropodophyllin (PPP)靶向抑制鼻咽鱗癌細胞的胰島素樣生長因子-1受體的實驗研究 背景：鼻咽癌(NPC)是在中國南方和東南亞地區(qū)最常見的頭頸部惡性腫瘤。在癌癥治療方面,胰島素樣生長因子-1受體(IGF-1R)已經(jīng)表現(xiàn)出它是一種新的極有前景的治療靶。IGF-1R在大部分惡性腫瘤組織中是過度表達的,并與預后不良有關,但其在鼻咽癌中的表達仍然不十分清楚。方法：應用Western blots檢測四個鼻咽癌細胞株(CNE1、CNE2、TWO3以及TW03EB病毒(+))中IGF-1R蛋白表達、以及磷酸化pAKT和pERKl/2蛋白的表達情況；然后蛋白免疫沉淀技術檢測四個鼻咽癌細胞株給予PPP治療后IGF-1R磷酸化水平；最后采用XTT法檢測四個鼻咽癌細胞株給予PPP治療后的生長抑制。結果：四個鼻咽癌細胞株IGF-1R蛋白表達不同,TW03表達最高,CNE2和CNE1次之,TW03EB病毒(+)表達最低；給予PPP治療后,IGF-1R激活后的兩條主要信號通路PI3K和MAPK中,PPP在CNE2、CNE1和TW03三個細胞株均能明顯降低AKT磷酸化水平,它僅能稍微降低ERK1/2磷酸化水平；同時在上述三個細胞株中,PPP有效地阻止了磷酸化IGF-1R的活性,對高表達IGF-1R的細胞反應更快；此外,在體外培養(yǎng)的細胞株中明顯表現(xiàn)出對癌細胞的生長抑制。PPP上述這些作用在TW03EB (+)細胞株表現(xiàn)非常弱。這些結果暗示EB病毒的感染促進了鼻咽癌細胞的腫瘤形成和降低抗癌治療的效果。結論：實驗結果表明IGF-1R有可能成為一個極有前途的鼻咽癌治療的靶分子。 第四部分在腫瘤細胞中胰島素樣生長因子-Ⅰ受體的內(nèi)化和泛素化分析 背景：胰島素樣生長因子-1受體(IGF-1R)已被證明在許多惡性腫瘤中呈高表達,在這些腫瘤的形成、生長、增殖、侵襲轉移和拮抗細胞凋亡中起著關鍵作用,已被一些研究者作為一個極有前途的抗癌治療的分子靶,然而對于正常細胞的生長并不是絕對需要IGF-1R, IGF-1R膜受體蛋白內(nèi)化和泛素化降解已經(jīng)引起研究者的重視。目的：本研究的主要目的是探討β-arrestin1分子在過度表達IGF-1R的腫瘤細胞中IGF-1R膜受體內(nèi)化和泛素化降解的作用。方法：我們采用免疫印跡法(Western Blots)、免疫沉淀技術(IP)技術對鼠胚胎成纖維瘤三種細胞株進行IGF-1R內(nèi)化檢測。結果：在IGF-1R過度表達的P6細胞隨配體刺激時間的增加內(nèi)化IGF-1R明顯增加,但非內(nèi)化IGF-1R的水平明顯降低；在β-arrestin1陰性細胞株隨配體刺激時間的增加非內(nèi)化IGF-1R的水平保持不變,而無IGF-1R內(nèi)化產(chǎn)生,但陽性對照可以看到條帶清晰的IGF-1R;同時檢測在細胞通路中IGF-1R內(nèi)化的作用在β-arrestin陰性細胞檢測不到磷酸化的pERK。結論：結果表明在β-arrestin1缺乏的情況下IGF-1R內(nèi)化不能發(fā)生,β-arrestin1可作為一個調(diào)節(jié)IGF-1R內(nèi)化的工具,也表明受體內(nèi)化對細胞通路之一的MAPK是必需的。
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【學位授予單位】：武漢大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R739.63

【參考文獻】

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1 宋建新，，劉秋潤;表皮生長因子受體在鼻咽癌及癌前病變組織中的表達[J];臨床耳鼻咽喉科雜志;1996年06期

本文編號：1500071