發(fā)布時(shí)間：2018-02-10 08:16

  本文關(guān)鍵詞： 鼻咽腫瘤 胰島素樣生長(zhǎng)因子-1受體 苦鬼臼毒素(PPP) 內(nèi)化 β-抑制蛋白1 免疫印跡 絲裂素活化蛋白激酶 絲/蘇氨酸激酶　出處：《武漢大學(xué)》2011年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：全文由四部分組成。 第一部分胰島素樣生長(zhǎng)因子-Ⅰ受體蛋白在鼻咽癌細(xì)胞中的表達(dá)及其臨床意義 目的：探討鼻咽癌組織中胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體(1GF-1R)蛋白的表達(dá)及其臨床意義。方法：采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)和免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)63例鼻咽癌組織和鼻咽部炎性粘膜組織中IGF-1R的表達(dá),對(duì)其中45例鼻咽癌患者進(jìn)行隨訪觀察5年,并采用免疫印跡技術(shù)(Western blots)檢測(cè)三種體外培養(yǎng)的鼻咽癌細(xì)胞株中IGF-1R蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果：在鼻咽癌組織中IGF-1R mRNA和蛋白的表達(dá)明顯高于鼻咽慢性炎癥組織。63例鼻咽癌和21鼻咽粘膜(伴慢性炎癥)組織中的IGF-1R陽(yáng)性表達(dá)率分別為82.5%和14.3%,在鼻咽癌中的表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于鼻咽炎性組織(X2=32.45,P0.01)。鼻咽癌組織中IGF-IR的表達(dá)與TNM分期和頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),有頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者其表達(dá)陽(yáng)性率較高；Ⅰ～Ⅱ期表達(dá)陽(yáng)性率較Ⅲ～Ⅳ期低(P0.01)；鼻咽癌局部復(fù)發(fā)者IGF-1R陽(yáng)性表達(dá)率(89.5%)明顯高于無(wú)局部復(fù)發(fā)者(53.9%,P0.05)；鼻咽癌放療后生存期小于5年者的陽(yáng)性表達(dá)率(88.9%)明顯高于5年以上生存期者的陽(yáng)性表達(dá)率(51.9%,P0.01)；病理分化程度越高IGF-1R陽(yáng)性表達(dá)率越低,但鼻咽癌病理類型間比較差異無(wú)顯著性(P0.05)。在三種鼻咽癌細(xì)胞系中IGF-IR的表達(dá)明顯高于鼻咽炎癥粘膜組織,其中TW03表達(dá)最強(qiáng),CNE2其次,CNE1表達(dá)稍弱。結(jié)論：鼻咽癌組織中存在IGF-1R的過(guò)表達(dá)現(xiàn)象,IGF-1R的異常表達(dá)與鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展存在一定的關(guān)系,可考慮將其作為鼻咽癌早期診斷和判斷預(yù)后的指標(biāo)之一。IGF-1R可能是復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移性鼻咽癌治療中一個(gè)潛在的靶分子。 第二部分PKB/AKT和ERK/MAPK兩條信號(hào)通路在鼻咽癌細(xì)胞中的活性表達(dá)和臨床意義 背景：IGF-1R已經(jīng)被證實(shí)在細(xì)胞的生存、凋亡、增殖和分化中起著非常重要的作用,在某些惡性腫瘤組織中它能異常激活兩條激酶系統(tǒng)如Akt/蛋白激酶B和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(MAPK)。目的：探討鼻咽癌細(xì)胞中PKB/AKT和ERK/MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路異常激活與鼻咽癌細(xì)胞發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。方法：應(yīng)用Western blots檢測(cè)鼻咽癌組織和鼻咽炎性組織中IGF-1R、AKT和ERK1/2蛋白的表達(dá)情況；然后采用相同實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)鼻咽癌細(xì)胞系CNE2中磷酸化的PAKT和pERK1/2蛋白的表達(dá),以及給予胰島素樣生長(zhǎng)因子-1刺激癌細(xì)胞后磷酸化的pAkt和pERK的表達(dá)水平,和同時(shí)用PKB/AKT、ERK/MAPK通路抑制劑Wortmannin、PD98059對(duì)鼻咽癌細(xì)胞PKB/AKT、ERK/MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路磷酸化的調(diào)節(jié)。結(jié)果：鼻咽癌細(xì)胞系CNE2中IGF-1R、Akt和Erk1/2蛋白水平明顯高于鼻咽炎性組織；IGF-1可刺激鼻咽癌細(xì)胞系CNE2pAKT、pErk1/2的表達(dá)增加,與對(duì)照組相比,其pAkt和pErk表達(dá)明顯增高；Wortmannin和PD98059能分別有效阻滯IGF-1對(duì)pAKT和pERK的激活。結(jié)論：IGF-1R的過(guò)度表達(dá)和PKB/AKT和ERK/MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的異常激活與鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展有密切的關(guān)系,而IGF-1R系統(tǒng)可能是復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移性鼻咽癌治療中一個(gè)潛在的治療靶分子。 第三部分Picropodophyllin (PPP)靶向抑制鼻咽鱗癌細(xì)胞的胰島素樣生長(zhǎng)因子-1受體的實(shí)驗(yàn)研究 背景：鼻咽癌(NPC)是在中國(guó)南方和東南亞地區(qū)最常見(jiàn)的頭頸部惡性腫瘤。在癌癥治療方面,胰島素樣生長(zhǎng)因子-1受體(IGF-1R)已經(jīng)表現(xiàn)出它是一種新的極有前景的治療靶。IGF-1R在大部分惡性腫瘤組織中是過(guò)度表達(dá)的,并與預(yù)后不良有關(guān),但其在鼻咽癌中的表達(dá)仍然不十分清楚。方法：應(yīng)用Western blots檢測(cè)四個(gè)鼻咽癌細(xì)胞株(CNE1、CNE2、TWO3以及TW03EB病毒(+))中IGF-1R蛋白表達(dá)、以及磷酸化pAKT和pERKl/2蛋白的表達(dá)情況；然后蛋白免疫沉淀技術(shù)檢測(cè)四個(gè)鼻咽癌細(xì)胞株給予PPP治療后IGF-1R磷酸化水平；最后采用XTT法檢測(cè)四個(gè)鼻咽癌細(xì)胞株給予PPP治療后的生長(zhǎng)抑制。結(jié)果：四個(gè)鼻咽癌細(xì)胞株IGF-1R蛋白表達(dá)不同,TW03表達(dá)最高,CNE2和CNE1次之,TW03EB病毒(+)表達(dá)最低；給予PPP治療后,IGF-1R激活后的兩條主要信號(hào)通路PI3K和MAPK中,PPP在CNE2、CNE1和TW03三個(gè)細(xì)胞株均能明顯降低AKT磷酸化水平,它僅能稍微降低ERK1/2磷酸化水平；同時(shí)在上述三個(gè)細(xì)胞株中,PPP有效地阻止了磷酸化IGF-1R的活性,對(duì)高表達(dá)IGF-1R的細(xì)胞反應(yīng)更快；此外,在體外培養(yǎng)的細(xì)胞株中明顯表現(xiàn)出對(duì)癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制。PPP上述這些作用在TW03EB (+)細(xì)胞株表現(xiàn)非常弱。這些結(jié)果暗示EB病毒的感染促進(jìn)了鼻咽癌細(xì)胞的腫瘤形成和降低抗癌治療的效果。結(jié)論：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明IGF-1R有可能成為一個(gè)極有前途的鼻咽癌治療的靶分子。 第四部分在腫瘤細(xì)胞中胰島素樣生長(zhǎng)因子-Ⅰ受體的內(nèi)化和泛素化分析 背景：胰島素樣生長(zhǎng)因子-1受體(IGF-1R)已被證明在許多惡性腫瘤中呈高表達(dá),在這些腫瘤的形成、生長(zhǎng)、增殖、侵襲轉(zhuǎn)移和拮抗細(xì)胞凋亡中起著關(guān)鍵作用,已被一些研究者作為一個(gè)極有前途的抗癌治療的分子靶,然而對(duì)于正常細(xì)胞的生長(zhǎng)并不是絕對(duì)需要IGF-1R, IGF-1R膜受體蛋白內(nèi)化和泛素化降解已經(jīng)引起研究者的重視。目的：本研究的主要目的是探討β-arrestin1分子在過(guò)度表達(dá)IGF-1R的腫瘤細(xì)胞中IGF-1R膜受體內(nèi)化和泛素化降解的作用。方法：我們采用免疫印跡法(Western Blots)、免疫沉淀技術(shù)(IP)技術(shù)對(duì)鼠胚胎成纖維瘤三種細(xì)胞株進(jìn)行IGF-1R內(nèi)化檢測(cè)。結(jié)果：在IGF-1R過(guò)度表達(dá)的P6細(xì)胞隨配體刺激時(shí)間的增加內(nèi)化IGF-1R明顯增加,但非內(nèi)化IGF-1R的水平明顯降低；在β-arrestin1陰性細(xì)胞株隨配體刺激時(shí)間的增加非內(nèi)化IGF-1R的水平保持不變,而無(wú)IGF-1R內(nèi)化產(chǎn)生,但陽(yáng)性對(duì)照可以看到條帶清晰的IGF-1R;同時(shí)檢測(cè)在細(xì)胞通路中IGF-1R內(nèi)化的作用在β-arrestin陰性細(xì)胞檢測(cè)不到磷酸化的pERK。結(jié)論：結(jié)果表明在β-arrestin1缺乏的情況下IGF-1R內(nèi)化不能發(fā)生,β-arrestin1可作為一個(gè)調(diào)節(jié)IGF-1R內(nèi)化的工具,也表明受體內(nèi)化對(duì)細(xì)胞通路之一的MAPK是必需的。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R739.63

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 宋建新，，劉秋潤(rùn);表皮生長(zhǎng)因子受體在鼻咽癌及癌前病變組織中的表達(dá)[J];臨床耳鼻咽喉科雜志;1996年06期

本文編號(hào)：1500071