發(fā)布時(shí)間：2018-02-01 05:01

  本文關(guān)鍵詞： 角膜移植 角膜替代物 神經(jīng)生長(zhǎng)因子 生物相容性 神經(jīng)再生　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的： 1.體外構(gòu)建重組人Ⅲ型膠原(recombinant human type-Ⅲcollagen, RHC-Ⅲ)/聚[3-(甲基丙烯酰胺)丙基-二甲基(3-磺丙)胺](poly [(3-(methacryloylamino) propyl) dimethyl (3-sulfopropyl) ammonium hydroxide]) (PMPDSAH)互穿聚合物網(wǎng)絡(luò)(interpenetrating polymer network, IPN) (RHC-Ⅲ/PMPDSAH IPN)水凝膠,并檢測(cè)其生物和力學(xué)性能。 2.評(píng)價(jià)RHC-Ⅲ/PMPDSAH IPN水凝膠板層植入兔角膜的生物相容性及其作為角膜替代物的可行性和安全性。 3.評(píng)價(jià)神經(jīng)生長(zhǎng)因子(never growth factor, NGF)對(duì)兔角膜板層移植術(shù)后創(chuàng)傷修復(fù)的作用以及負(fù)載NGF到RHC-Ⅲ/PMPDSAH IPN水凝膠中方法的可行性和有效性。 方法： 1.將10%RHC-Ⅲ溶液與3-(甲基丙烯酰胺)丙基-二甲基(3-磺丙)胺(3-(methacryloylamino) propyl) dimethyl (3-sulfopropyl) ammonium hydroxide (MPDSAH)水溶液(與膠原質(zhì)量比1：1)在0℃下混勻后加入交聯(lián)劑等,反應(yīng)后放入模具中,經(jīng)固定、固化、熟化、磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered solution, PBS)液浸泡和換液后,4℃下保存?zhèn)溆谩?由天津大學(xué)材料科學(xué)與工程學(xué)院完成) 2.將制作好的RHC-Ⅲ/PMPDSAH IPN水凝膠凍干后,浸入500μl濃度為30μg/ml的NGF-牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA) (NGF:BSA質(zhì)量比為1：300)溶液中,4℃下平衡3～4天,用PBS液洗材料,凍干后4℃下保存?zhèn)溆谩?由天津大學(xué)材料科學(xué)與工程學(xué)院完成) 3.105只中國(guó)大耳白兔根據(jù)角膜材料不同隨機(jī)分為3組：RHC-Ⅲ/PMPDSAH IPN組(A組,30只)、負(fù)載NGF的RHC-Ⅲ/PMPDSAH IPN組(B組,30只)和同種異體角膜組(C組,30只),剩余15只(30眼)為C組提供供體角膜。每組再根據(jù)不同的觀察時(shí)間點(diǎn)分為術(shù)后3天、1周、2周、1個(gè)月、3個(gè)月和6個(gè)月亞組,每組5只,右眼為手術(shù)眼。將3種材料移植入兔角膜前板層,術(shù)后裂隙燈觀察有無(wú)明顯炎癥反應(yīng),記錄角膜透明度、角膜新生血管(neovascularization, NV)的變化情況以及角膜上皮化時(shí)間,并分別于各時(shí)間點(diǎn)取兔角膜行蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin staining, HE)染色,術(shù)后6個(gè)月行角膜透光率檢測(cè),免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)角膜上皮細(xì)胞特異性標(biāo)志蛋白K3抗體AE5的表達(dá)。對(duì)3組間角膜上皮化時(shí)間、各對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)角膜透明度和NV評(píng)分以及術(shù)后6個(gè)月角膜透光率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較,以P0.05作為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4.24只中國(guó)大耳白兔隨機(jī)分為A組和B組,每組12只,再根據(jù)不同觀察時(shí)間點(diǎn)分為術(shù)后2周、1個(gè)月、3個(gè)月和6個(gè)月亞組,每組3只,右眼為手術(shù)眼。A組兔角膜前板層植入負(fù)載5ng/mg NGF的RHC-Ⅲ/PMPDSAH IPN, B組植入不含NGF的RHC-Ⅲ/PMPDSAH IPN。兩組各時(shí)間點(diǎn)取兔眼做角膜神經(jīng)氯化金染色,另取A組術(shù)后6個(gè)月亞組處死的3只兔對(duì)側(cè)眼作為正常對(duì)照,光鏡下觀察兩組各時(shí)間點(diǎn)以及正常對(duì)照眼角膜神經(jīng)修復(fù)情況并計(jì)算上皮及淺基質(zhì)層神經(jīng)纖維數(shù)量,以P0.05作為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1.材料直徑12 mm,厚度200μm,曲率半徑7.25 mm,凝膠平衡含水量為(90.2±0.7)%,白光透過(guò)率達(dá)(89±1)%,折光指數(shù)為1.35,抗張強(qiáng)度(0.56±0.41)MPa。負(fù)載NGF的RHC-Ⅲ/PMPDSAH IPN性能與RHC-Ⅲ/PMPDSAH IPN基本相同,NGF在凝膠中的載藥量為5ng/mg,包封率為10.2%。(由天津大學(xué)材料科學(xué)與工程學(xué)院完成) 2.整個(gè)觀察期間,納入實(shí)驗(yàn)的植片均未脫出,未見(jiàn)明顯排斥反應(yīng)。術(shù)后6個(gè)月,3組角膜透明度和NV評(píng)分以及角膜透光率比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F0.07,F=0.07,F=1.48,P0.05)。B組角膜上皮化時(shí)間最短,平均5.00±0.59天,3組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=57.99,P0.05)。HE染色可見(jiàn)A、B組材料能較好地與兔角膜融合,使上皮長(zhǎng)入,術(shù)后6個(gè)月新生膠原纖維排列基本整齊,免疫組化顯示角膜上皮細(xì)胞特異性標(biāo)志蛋白K3抗體AE5表達(dá)陽(yáng)性。 3.術(shù)后2周,兩組即可觀察到上皮及淺基質(zhì)層有新生的神經(jīng)纖維；術(shù)后1個(gè)月,A組淺基質(zhì)層已可見(jiàn)到少量新生的神經(jīng)纖維相互連成網(wǎng)狀；術(shù)后3個(gè)月,兩組新生神經(jīng)纖維數(shù)量明顯增多,均可見(jiàn)到網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)以及較多側(cè)枝形成；術(shù)后6個(gè)月,A組新生神經(jīng)纖維數(shù)量明顯多于B組,且結(jié)構(gòu)更為完善,兩組均可見(jiàn)到部分神經(jīng)斷端沒(méi)有再生,兩組神經(jīng)纖維數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于正常對(duì)照眼。A組各時(shí)間點(diǎn)新生神經(jīng)纖維數(shù)量明顯高于B組,兩組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=13.57, t=15.71, t=38.22,t=34.11,P0.05)。 結(jié)論： 1.RHC-Ⅲ/PMPDSAH IPN水凝膠有良好的透明度和折光指數(shù),但力學(xué)性能稍差,有待進(jìn)一步加強(qiáng)。 2.RHC-Ⅲ/PMPDSAH IPN水凝膠與兔角膜的生物相容性較好,安全性較高,但因其力學(xué)強(qiáng)度稍差,還不能完全替代同種異體角膜。 3.NGF可以有效促進(jìn)兔角膜板層移植術(shù)后的角膜創(chuàng)傷修復(fù)。 4.本實(shí)驗(yàn)將NGF加入到角膜移植材料中,形成一種活性復(fù)合組織工程角膜,方法可行有效,國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)到類似報(bào)道,有一定的創(chuàng)新性。 5.角膜神經(jīng)氯化金染色在缺少共聚焦顯微鏡的情況下,不失為一種良好的觀察角膜神經(jīng)的組織學(xué)檢查方法。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R779.6

【引證文獻(xiàn)】

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1 王洋;刑春生;周星;王磊;韓宏光;;人工角膜材料分類及材料表面改性和生物相容性的研究[J];中國(guó)組織工程研究;2012年16期

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本文編號(hào)：1480995