本文關(guān)鍵詞：神經(jīng)酰胺—內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激-AMPK在視網(wǎng)膜色素上皮細胞凋亡中的作用及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《南京醫(yī)科大學》 2014年

神經(jīng)酰胺—內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激-AMPK在視網(wǎng)膜色素上皮細胞凋亡中的作用及機制研究

畢會娥  

【摘要】：目的：研究神經(jīng)酰胺、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、AMPK信號通路在氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜色素上皮細胞凋亡中的調(diào)控作用及其相互作用機制。 方法： (1)以RPE細胞作為研究對象,采用H2O2(200μM)/UV處理體外模擬RPE細胞氧化損傷的凋亡模型；采用Western blot檢測細胞內(nèi)AMPK信號通路, TUNEL法檢測細胞凋亡；采用AMPK激動劑AICAR(1mM)和抑制劑Compound C(CC)(10μM)干預(yù)RPE細胞功能,TUNEL法檢測細胞凋亡的變化,探討AMPK信號在氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的RPE細胞凋亡中的作用； (2)建立RPE細胞的氧化應(yīng)激模型,Western blot法檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的變化；通過藥物Salubrinal (Sal)(10μM)處理干預(yù)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激活性,評價內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的RPE細胞凋亡中的作用； (3)建立RPE細胞的氧化應(yīng)激模型,用放射自顯影法檢測細胞內(nèi)神經(jīng)酰胺含量變化；添加神經(jīng)酰胺類似物C6(μg/mL)神經(jīng)酰胺酶從頭合成酶抑制劑fumonisinB1(FB-1)(10μM)預(yù)處理,TUNEL法檢測細胞凋亡的變化情況,明確神經(jīng)酰胺在氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的RPE細胞凋亡中的作用； (4)H2O2處理RPE細胞前添加內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑Sal預(yù)處理,Western blot檢測AMPK活化情況；添加神經(jīng)酰胺類似物C6預(yù)處理, Western blot檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激以及AMPK活化情況,研究三者在凋亡調(diào)控中的上下游關(guān)系。 結(jié)果： (1)經(jīng)H2O2/UV處理后的RPE細胞內(nèi)AMPK和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激均被激活；細胞內(nèi)神經(jīng)酰胺含量增多。分別添加AMPK、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及神經(jīng)酰胺合成酶抑制劑預(yù)處理后的細胞凋亡受到抑制。分別添加AMPK激活劑及神經(jīng)酰胺類似物后凋亡水平提高。 (2)在H2O2/UV誘導(dǎo)的細胞凋亡模型中,添加神經(jīng)酰胺類似物可以促進內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和AMPK的活化；添加內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑后可抑制AMPK的活化。 結(jié)論：UV/H2O2促進神經(jīng)酰胺生成后通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑激活A(yù)MPK信號通路,以促進視網(wǎng)膜色素上皮細胞凋亡。

【關(guān)鍵詞】：
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R774.5
【目錄】：

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