本文關(guān)鍵詞： 人甲狀腺鈉/碘同向轉(zhuǎn)運(yùn)體 基因轉(zhuǎn)染 放射性核素顯像 放射性核素治療 磁共振成像 擴(kuò)散加權(quán)成像 鼻咽癌　出處：《暨南大學(xué)》2010年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的： 本文通過(guò)建立基于人甲狀腺鈉／碘同向轉(zhuǎn)運(yùn)體(hNIS)基因轉(zhuǎn)染介導(dǎo)放射性核素顯像和治療鼻咽癌的技術(shù),為鼻咽癌進(jìn)行放射性核素報(bào)告基因顯像和基因治療提供一種新的治療策略；通過(guò)建立動(dòng)物模型,運(yùn)用擴(kuò)散加權(quán)磁共振成像(DW-MRI)早期評(píng)價(jià)131I對(duì)hNIS轉(zhuǎn)染鼻咽癌移植瘤的治療效果,為靶向放射性核素治療的療效監(jiān)測(cè)提供新的方法；以調(diào)控腫瘤凋亡的相關(guān)基因?yàn)榘悬c(diǎn),探討hNIS轉(zhuǎn)染介導(dǎo)放射性核素治療鼻咽癌的作用機(jī)制。 方法： 1、體外部分：構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pCMV-Tag2-hNIS,通過(guò)脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2,G418篩選得到穩(wěn)定表達(dá)hNIS的鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2-hNIS;研究其攝取125I活性以及125I內(nèi)流和外流特征；通過(guò)CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、克隆形成實(shí)驗(yàn)、Hoechst 33342熒光染色法和AnnexinV-FITC/PI雙染流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)131I對(duì)鼻咽癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響。 2、體內(nèi)部分：建立裸鼠鼻咽癌移植瘤模型。當(dāng)移植瘤直徑達(dá)10 mm時(shí),裸鼠腹膜內(nèi)注射125I,用Y-計(jì)數(shù)器測(cè)定注射后0.5、1、2、6、24小時(shí)不同臟器的cpm計(jì)數(shù),進(jìn)行裸鼠體內(nèi)臟器125I分布定量實(shí)驗(yàn)；裸鼠腹腔內(nèi)注射99mTcO4,進(jìn)行鼻咽癌荷瘤裸鼠99mTc顯像。 3、運(yùn)用磁共振成像(MRI)觀察131I治療后實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組移植瘤在3、6、12、18、24天的體積變化情況；通過(guò)DW-MRI觀察131I治療后3、6、12、18、24天移植瘤ADC值的變化,并與治療后6、12、18、24天TUNEL法和Caspase-3免疫組化法檢測(cè)細(xì)胞凋亡,Ki-67免疫組化法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況進(jìn)行相關(guān)性分析。 4、通過(guò)Western blot檢測(cè)131I作用前后鼻咽癌細(xì)胞內(nèi)p53、Bax、Bcl-2、Caspase-3和Survivin的蛋白表達(dá)水平的變化。 結(jié)果： 1、成功構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pCMV-Tag2-hNIS,得到穩(wěn)定表達(dá)hNIS的鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2-hNIS。CNE-2-hNIS攝取125I活性較CNE-2增高17.1±2.3倍(P0.05),125I在CNE-2-hNIS中快速聚集,30分鐘達(dá)到高峰,同時(shí)125I從細(xì)胞中亦快速外流,有效半衰期約為8.45分鐘。隨著131I濃度的增高,CNE-2-hNIS增殖率和克隆形成率逐漸降低,凋亡率逐漸增高。 2、成功構(gòu)建裸鼠鼻咽癌移植瘤模型,體內(nèi)臟器125I分布定量實(shí)驗(yàn)顯示,hNIS轉(zhuǎn)染移植瘤攝取125I能力增強(qiáng),1小時(shí)達(dá)到高峰,2小時(shí)仍維持較高的水平,125I生物半衰期約1.56小時(shí)。99mTc顯像實(shí)驗(yàn)顯示,hNIS轉(zhuǎn)染移植瘤有放射性濃聚,腫瘤顯影清晰,而對(duì)照組移植瘤未見(jiàn)顯影。 3、通過(guò)MRI觀察,131I治療后實(shí)驗(yàn)組移植瘤體積較對(duì)照組明顯縮小(P0.05)。DW-MRI顯示,131I治療后第3天,實(shí)驗(yàn)組ADC值有增高,第6天和12天達(dá)到高峰,隨后ADC值下降,治療后移植瘤ADC值與TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率呈正相關(guān)(r=0.72,P0.05),與Caspase-3陽(yáng)性率呈正相關(guān)(r=0.65,P0.05),與Ki-67標(biāo)記指數(shù)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.71,P0.05)。 4、131I作用于hNIS轉(zhuǎn)染的鼻咽癌細(xì)胞,上調(diào)p53表達(dá),下調(diào)Bcl-2表達(dá),Caspase-3活化增加,Survivin蛋白高表達(dá),對(duì)Bax的表達(dá)無(wú)影響。 結(jié)論： 成功建立基于hNIS基因轉(zhuǎn)染介導(dǎo)放射性核素顯像和治療鼻咽癌的基因治療方法。首次運(yùn)用DW-MRI成像技術(shù)實(shí)現(xiàn)從水分子微觀變化水平對(duì)靶向放射性核素治療腫瘤療效的早期無(wú)創(chuàng)性監(jiān)測(cè),展示了DW-MRI在基因治療療效監(jiān)測(cè)上的應(yīng)用前景。131I能有效抑制hNIS轉(zhuǎn)染鼻咽癌的生長(zhǎng),其凋亡作用機(jī)制與上調(diào)p53表達(dá),下調(diào)Bcl-2表達(dá),促進(jìn)Caspase-3活化有關(guān)。
[Abstract]:Objective:
In this paper, through the establishment of human thyroid based on sodium iodide symporter (hNIS) gene transfection mediated by radionuclide imaging and treatment of nasopharyngeal carcinoma, and provide a new strategy for the treatment of radionuclide reporter gene imaging and gene therapy for nasopharyngeal carcinoma; the animal model established by diffusion weighted magnetic resonance imaging (DW-MRI) in early treatment to evaluate the effect of 131I on hNIS was transfected into nasopharyngeal carcinoma xenografts, targeted to provide a new method to monitor the effect of radionuclide therapy; apoptosis related gene regulation in tumor targeting mechanism of hNIS transfection mediated radionuclide therapy of nasopharyngeal carcinoma.
Method錛，

本文編號(hào)：1462873