本文關鍵詞：小鼠體外視網膜神經節(jié)細胞中PirB的表達及其對軸突生長的作用研究　出處：《第三軍醫(yī)大學》2014年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：哺乳動物成體中樞神經損傷后再生的可能性很低,當前醫(yī)學關注的重點集中在如何促進其再生。以往一系列的實驗研究表明,成年人的中樞神經軸突損傷后再生十分困難,這主要是與神經損傷周圍的微環(huán)境有關。中樞微環(huán)境中有許多不利于軸突再生的因素,包括神經抑制因子、炎癥的發(fā)生和神經營養(yǎng)因子的缺乏,其中神經抑制因子是最重要的影響因素。髓鞘相關抑制因子是諸多神經抑制因子的代表,主要包括髓鞘相關蛋白(Nogo-A,MAG和Omgp等)以及這些蛋白的受體/共受體(NgR1,p75,TROY,PirB和Lingo-1等)。這幾種主要神經抑制因子(Nogo-A,MAG和Omgp)以NgR為其共同作用受體,MAIs-NgR通路的探索為成體動物神經損傷后的再生指明了新的方向。但是,一系列的研究發(fā)現,將NgR阻斷后,中樞神經元軸突的再生能力沒有明顯改善。據2008年《Science》文章報道,這幾種主要神經抑制因子還存在另一共同受體PirB,它能夠阻抑中樞神經元軸突生長,且它阻抑軸突生長的作用比NgR更強。PirB的發(fā)現源于一項針對于免疫系統的研究,它被發(fā)現與人類自身IgA的FC受體非常相似,在很多各個種類的造血系細胞中均有PirB的出現,PirB蛋白的重要功能是可以維持免疫系統功能的穩(wěn)定,保護正常細胞組織免受免疫細胞攻擊和損傷。Josh Syken等學者進一步發(fā)現了PirB蛋白在中樞神經系統中有表達。本課題著重進行以下三方面的探討:1.確定PirB在視網膜神經節(jié)細胞中的表達;2.探討PirB蛋白在體外培養(yǎng)的C57BL/6小鼠的視網膜神經節(jié)細胞(RGCs)中的表達及變化;3.驗證PirB調控體外RGCs生長的機制。目的:以PirB受體為主要的研究對象,研究它在小鼠RGCs軸突生長中的生理作用。方法:論文以C57BL/6小鼠原代分離的視網膜神經節(jié)細胞為模型,采用免疫組織化學熒光的實驗技術方法確定PirB在視網膜神經節(jié)細胞上的表達;熒光定量PCR和免疫印跡技術分別檢測在視網膜神經節(jié)細胞誘導分化過程中,PirB和NgR的mRNA和蛋白表達水平;采用慢病毒轉染等方法研究了敲低PirB以及NgR對體外培養(yǎng)的C57BL/6小鼠RGCs軸突生長中的作用;通過顯微鏡觀察拍照,記錄統計不同處理條件下,小鼠RGCs軸突生長的長度。本文重點關注PirB在RGCs中的表達情況以及阻斷PirB對RGCs軸突生長的作用,并探討PirB與NgR可能的協同作用,主要結果和結論如下:1.PirB在體外培養(yǎng)的原代視網膜神經節(jié)細胞中表達,其表達水平變化隨著視網膜神經節(jié)細胞的培養(yǎng)時間呈現一定規(guī)律;2.使用慢病毒轉染敲低PirB或NgR后發(fā)現,PirB敲低對視網膜神經節(jié)細胞軸突的生長有一定的改善作用,但同時阻斷NgR并不會增益這一效果,而單獨阻斷NgR不會顯著改善軸突生長。此外,聯用CNTF后,阻斷了PirB的RGCs軸突生長得到進一步改善。本研究有助于深入對視神經損傷再生機制的理解,提供新的視神經損傷治療靶點,為成體視神經損傷治療提供新的思路。
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R774.1

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本文編號：1320520