本文關(guān)鍵詞：10-23脫氧核酶沉默Survivin基因誘導(dǎo)HLECs凋亡的實驗研究

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【摘要】：目的：設(shè)計針對Survivin mRNA序列的特異性10-23脫氧核酶（10-23DNAzyme），通過脂質(zhì)體介導(dǎo)Survivin基因特異性10-23DNAzyme轉(zhuǎn)染到人晶狀體上皮細(xì)胞（HLECs）SRA01/04細(xì)胞珠，探討沉默Survivin基因?qū)urvivin mRNA表達(dá)及HLECs凋亡的影響，為后發(fā)性白內(nèi)障的預(yù)防及治療提供實驗依據(jù)及新方法。方法：體外培養(yǎng)HLECs永生系SRA01/04，將細(xì)胞分為3組，空白對照組：HLECs+完全培養(yǎng)基；陰性對照組：HLECs+脂質(zhì)體+非特異性10-23DNAzyme；實驗組：HLECs+脂質(zhì)體+特異性10-23DNAzyme。利用反義技術(shù)，以脂質(zhì)體為載體分別將特異及非特異10-23DNAzyme轉(zhuǎn)染至HLECs內(nèi)，HLECs轉(zhuǎn)染24h及48h后，采用倒置相差顯微鏡觀察HLECs的生長狀態(tài)及HLECs的形態(tài)改變。HLECs轉(zhuǎn)染48h后，運用RT-PCR聯(lián)合灰度掃描半定量方法檢測HLECs中Survivin mRNA的表達(dá)情況，運用流式細(xì)胞儀（FCM）聯(lián)合膜聯(lián)蛋白V/PI(Annexin V/PI）雙染法來檢測HLECs的凋亡率。結(jié)果：運用倒置相差顯微鏡觀察，轉(zhuǎn)染24h后空白對照組、陰性對照組的HLECs細(xì)胞呈橢圓形或類圓形，均勻分散貼于培養(yǎng)瓶底，細(xì)胞的胞體無色透亮，胞漿豐富，細(xì)胞內(nèi)含有粗細(xì)不一致的及排列緊湊的顆粒，少部分細(xì)胞胞體伸出凸起，與其它細(xì)胞凸起相連。48h后，細(xì)胞增多，細(xì)胞間隙減小，胞體伸出的凸起變少，呈類圓形。實驗組的HLECs轉(zhuǎn)染24h后，細(xì)胞開始變圓，染色質(zhì)凝聚，胞質(zhì)濃縮；轉(zhuǎn)染48h后，部分細(xì)胞已經(jīng)裂解成形態(tài)不一類圓形的凋亡小體，有的細(xì)胞已經(jīng)脫離培養(yǎng)瓶底，漂浮在培養(yǎng)液中。轉(zhuǎn)染48h后RT-PCR法聯(lián)合灰度掃描半定量檢測結(jié)果示：在空白對照組、陰性對照組及實驗組中，HLECs的Survivin mRNA相對表達(dá)量分別為：0.726±0.148、0.700±0.115及0.314±0.130。實驗組Survivin mRNA的相對含量分別和空白對照組及陰性對照組相比較，分別降低了56.75%和55.14%，差異具有明顯統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.0000.05）�？瞻讓φ战M及陰性對照組的Survivin mRNA的相對含量相比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.0550.05）。流式細(xì)胞儀聯(lián)合V/PI雙染色法結(jié)果顯示：HLECs轉(zhuǎn)染48h后，空白對照組HLECs凋亡率為2.33±0.23％，陰性對照組HLECs凋亡率為3.57±0.20％，兩組細(xì)胞之間HLECs凋亡率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.0720.05）。實驗組HLECs凋亡率為19.52±1.16％，與空白及陰性對照組相比較，實驗組HLECs的凋亡率明顯增加，二者之間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.0000.05）。結(jié)論：特異性10-23DNAzyme可以有效沉默Survivin基因，，抑制HLECs中surivivn mRNA的表達(dá)；HLECs中Survivin基因表達(dá)下調(diào)可促進(jìn)HLECs凋亡。
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R776.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1291779