本文關(guān)鍵詞：晚期糖基化終產(chǎn)物對(duì)C57小鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡及其受體表達(dá)的影響

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【摘要】：目的： 研究晚期糖基化終產(chǎn)物(AGEs)對(duì)體外培養(yǎng)的小鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（SGCs）凋亡及其受體（RAGE）表達(dá)的影響，探討AGEs誘導(dǎo)SGCs凋亡的可能作用途徑，分析老年性聾神經(jīng)型的可能致病機(jī)制。 方法： 取出生后3～5天C57BL/6J新生小鼠，利用切割分離+酶消化法分離出SGCs，并進(jìn)行體外培養(yǎng)。將培養(yǎng)4天的SGCs用4％多聚甲醛室溫固定30min，以小鼠源神經(jīng)微絲蛋白抗體（NF-L+H）為一抗，按照免疫熒光法對(duì)所培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行免疫細(xì)胞熒光染色，對(duì)SGCs作出鑒定。以RAGE抗體為一抗，按照免疫熒光法及免疫組化法，對(duì)SGCs上的RAGE進(jìn)行鑒定。將培養(yǎng)第4天的細(xì)胞加入不同濃度的AGEs，，作用不同的時(shí)間，運(yùn)用原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)法（TUNEL法），在熒光顯微鏡下觀察不同濃度、不同時(shí)間AGEs對(duì)培養(yǎng)的SGCs凋亡的影響。并采用采用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR（Real time RT-PCR）方法檢測(cè)不同濃度、不同時(shí)間AGEs作用培養(yǎng)的SGCs后RAGE的mRNA的表達(dá)。 結(jié)果： SGCs原代培養(yǎng)獲得成功，經(jīng)神經(jīng)微絲蛋白抗體(NF-H)抗體免疫熒光法染色，其胞質(zhì)及突起均呈陽(yáng)性反應(yīng)，染成綠色熒光。SGCs經(jīng)RAGE抗體免疫細(xì)胞熒光法及免疫組織化學(xué)染色，其胞質(zhì)及突起均呈陽(yáng)性反應(yīng)，分別染成綠色熒光及棕色表現(xiàn)。AGEs加入體外培養(yǎng)的SGCs中，可明顯誘導(dǎo)SGCs凋亡，凋亡率與劑量、時(shí)間呈正相關(guān)。在發(fā)生凋亡的同時(shí)有RAGE mRNA表達(dá)的增強(qiáng)。 結(jié)論： 新生小鼠SGCs上即存在著RAGE，AGEs對(duì)SGCs有誘導(dǎo)凋亡的作用，該作用可能通過RAGE介導(dǎo)。AGEs促使SGCs凋亡可能是老年性聾神經(jīng)型的發(fā)病機(jī)制之一。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R764.431

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

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本文編號(hào)：1274206