本文關(guān)鍵詞：siRNA沉默HIF-1α對(duì)缺氧培養(yǎng)的人脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞VEGF表達(dá)的影響

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【摘要】：目的：研究HIF-1α小干擾RNA(small interference RNA, siRNA)轉(zhuǎn)染干擾缺氧誘導(dǎo)的OCM-1細(xì)胞前后HIF-1α和VEGF的表達(dá)情況,初步探討HIF-1α在脈絡(luò)膜黑色素瘤血管生成中的作用。 方法：體外培養(yǎng)人脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞(OCM-1),在培養(yǎng)基中加入CoCl2溶液至終濃度為100μmol/L,用于模擬腫瘤內(nèi)缺氧微環(huán)境。生物公司設(shè)計(jì)并合成si RNA(包括HIF-1α siRN、β-actin siRNA及陰性對(duì)照),以陽(yáng)離子脂質(zhì)體(LipofectamineTM2000)為載體介導(dǎo)合成的siRNA轉(zhuǎn)染OCM-1細(xì)胞。RT-PCR及Western-blot分別在mRNA和蛋白水平檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后HIF-1α和VEGF表達(dá)的變化。 結(jié)果：與常氧組相比,單純?nèi)毖踅MHIF-11α mRNA表達(dá)無(wú)明顯變化,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05); HIF-1a蛋白表達(dá)上調(diào),其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；VEGFmRNA及蛋白表達(dá)均上調(diào),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。缺氧狀態(tài)下,與陰性對(duì)照組相比,干擾組HIF-11α mRNA和蛋白、VEGFmRNA和蛋白的表達(dá)均下調(diào),且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論：缺氧可誘導(dǎo)OCM-1細(xì)胞HIF-1α在蛋白水平表達(dá)上調(diào),并通過(guò)轉(zhuǎn)錄激活VEGF的機(jī)制調(diào)控脈絡(luò)膜黑色素瘤血管生成。合成的HIF-11α siRNA通過(guò)轉(zhuǎn)染OCM1細(xì)胞成功地下調(diào)HIF-1α及其下游基因VEGI的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R739.7

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本文編號(hào)：1250176