發(fā)布時間：2017-12-03 14:19

  本文關鍵詞：TPRN基因突變檢測分析及其質(zhì)粒表達載體的構建

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【摘要】：摘要：耳聾是造成人類殘疾最常見的原因,我國現(xiàn)有聽力言語殘疾者達2780萬人,居各類殘疾的首位。目前全世界每1000個新生兒中就有一個先天性的聾兒,我國每年約有3萬聾兒出生,其中60%為遺傳性聾。在遺傳性聾中,非綜合征性聾約占70%,綜合征性聾占30%。最常見的類型為常染色體隱性遺傳性非綜合征性聾,占非綜合征性聾的比例約77%。目前已發(fā)現(xiàn)常染色體隱性遺傳性非綜合征性聾位點73個,相關基因40個。 TPRN基因是2010年發(fā)現(xiàn)的一個主要表達在毛細胞靜纖毛Taper區(qū)域的常染色體隱性遺傳性耳聾79型(DFNB79)的致病基因,其表達產(chǎn)物為Taperin蛋白。 為了解TPRN基因突變在中國人非綜合征性聾人群中的分布情況和研究Taperin蛋白在聽覺產(chǎn)生中的作用。本實驗一方面采用耳聾基因芯片檢測法和DNA直接測序法對耳聾患者進行TPRN基因突變的檢測分析；另一方面構建TPRN shRNA質(zhì)粒表達載體為下一步的TPRN基因體外抑制實驗做準備。 一.TPRN基因在中國非綜合征型耳聾患者中的檢測 目的：研究TPRN基因在中國人非綜合征性聾患者中的突變發(fā)生的概率、突變形式。 方法：采用耳聾基因芯片對81名非綜合征性聾患者進行耳聾基因檢測,排除了常見的4個致病基因的9個位點后,采用DNA直接測序法對這81例耳聾患者和52例健康對照成員進行TPRN基因的檢測。 結果：81名耳聾患者中未發(fā)現(xiàn)已報道的TPRN基因突變；2名患者在1號外顯子處發(fā)現(xiàn)攜帶有相同的TPRN基因雜合子突變559GT,導致編碼的氨基酸由丙氨酸變?yōu)榻z氨酸(A187S),對照組中未發(fā)現(xiàn)相同突變。另外在患者和正常人中發(fā)現(xiàn)1號外顯子處2個同義突變157CT和318CT。經(jīng)氨基酸同源性分析得出A187S位于Taperin蛋白的高度保守區(qū)域內(nèi),而且在對照組未發(fā)現(xiàn)該突變,此突變可能與耳聾有關。 結論目前發(fā)現(xiàn)TPRN基因突變在中國人非綜合征型耳聾患者中整體發(fā)生頻率較低,其功能有待進一步研究。 二.TPRN siRNA質(zhì)粒表達載體的構建和鑒定 目的：構建TPRN siRNA質(zhì)粒表達載體,為進一步的RNA干擾實驗做準備。 方法：設計并合成2組針對靶基因編碼區(qū)的siRNA和1組陰性對照的siRNA,分別連接到pGenesil-2質(zhì)粒載體上,并用PCR和酶切法對重組質(zhì)粒進行鑒定。 結果：重組質(zhì)粒中已插入了目的基因片段。 結論：成功的構建了和鑒定了TPRN siRNA質(zhì)粒表達載體pGenesil-2-tprn-siRNA。
【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R764.43

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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2 江凌曉;凌月仙;蔡桂君;王瑞蓮;;遺傳性耳聾基因芯片檢測的臨床應用研究[J];分子診斷與治療雜志;2011年03期

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本文編號：1248915