本文關(guān)鍵詞：TPRN基因突變檢測分析及其質(zhì)粒表達(dá)載體的構(gòu)建

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【摘要】：摘要：耳聾是造成人類殘疾最常見的原因,我國現(xiàn)有聽力言語殘疾者達(dá)2780萬人,居各類殘疾的首位。目前全世界每1000個新生兒中就有一個先天性的聾兒,我國每年約有3萬聾兒出生,其中60%為遺傳性聾。在遺傳性聾中,非綜合征性聾約占70%,綜合征性聾占30%。最常見的類型為常染色體隱性遺傳性非綜合征性聾,占非綜合征性聾的比例約77%。目前已發(fā)現(xiàn)常染色體隱性遺傳性非綜合征性聾位點(diǎn)73個,相關(guān)基因40個。 TPRN基因是2010年發(fā)現(xiàn)的一個主要表達(dá)在毛細(xì)胞靜纖毛Taper區(qū)域的常染色體隱性遺傳性耳聾79型(DFNB79)的致病基因,其表達(dá)產(chǎn)物為Taperin蛋白。 為了解TPRN基因突變在中國人非綜合征性聾人群中的分布情況和研究Taperin蛋白在聽覺產(chǎn)生中的作用。本實(shí)驗(yàn)一方面采用耳聾基因芯片檢測法和DNA直接測序法對耳聾患者進(jìn)行TPRN基因突變的檢測分析；另一方面構(gòu)建TPRN shRNA質(zhì)粒表達(dá)載體為下一步的TPRN基因體外抑制實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備。 一.TPRN基因在中國非綜合征型耳聾患者中的檢測 目的：研究TPRN基因在中國人非綜合征性聾患者中的突變發(fā)生的概率、突變形式。 方法：采用耳聾基因芯片對81名非綜合征性聾患者進(jìn)行耳聾基因檢測,排除了常見的4個致病基因的9個位點(diǎn)后,采用DNA直接測序法對這81例耳聾患者和52例健康對照成員進(jìn)行TPRN基因的檢測。 結(jié)果：81名耳聾患者中未發(fā)現(xiàn)已報(bào)道的TPRN基因突變；2名患者在1號外顯子處發(fā)現(xiàn)攜帶有相同的TPRN基因雜合子突變559GT,導(dǎo)致編碼的氨基酸由丙氨酸變?yōu)榻z氨酸(A187S),對照組中未發(fā)現(xiàn)相同突變。另外在患者和正常人中發(fā)現(xiàn)1號外顯子處2個同義突變157CT和318CT。經(jīng)氨基酸同源性分析得出A187S位于Taperin蛋白的高度保守區(qū)域內(nèi),而且在對照組未發(fā)現(xiàn)該突變,此突變可能與耳聾有關(guān)。 結(jié)論目前發(fā)現(xiàn)TPRN基因突變在中國人非綜合征型耳聾患者中整體發(fā)生頻率較低,其功能有待進(jìn)一步研究。 二.TPRN siRNA質(zhì)粒表達(dá)載體的構(gòu)建和鑒定 目的：構(gòu)建TPRN siRNA質(zhì)粒表達(dá)載體,為進(jìn)一步的RNA干擾實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備。 方法：設(shè)計(jì)并合成2組針對靶基因編碼區(qū)的siRNA和1組陰性對照的siRNA,分別連接到pGenesil-2質(zhì)粒載體上,并用PCR和酶切法對重組質(zhì)粒進(jìn)行鑒定。 結(jié)果：重組質(zhì)粒中已插入了目的基因片段。 結(jié)論：成功的構(gòu)建了和鑒定了TPRN siRNA質(zhì)粒表達(dá)載體pGenesil-2-tprn-siRNA。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R764.43

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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本文編號：1248915