本文關(guān)鍵詞：DEPDC1基因在鼻咽癌中作用的初步研究

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【摘要】：目的： DEPDC1基因是新發(fā)現(xiàn)的腫瘤相關(guān)基因，位于染色體1p31.2，全長約23Kb，編碼分子量為93kd和61kd大小的兩種蛋白質(zhì)。已有研究表明DEPDC1在膀胱癌、乳腺癌、肺腺癌等惡性腫瘤中呈現(xiàn)過表達，，而在除睪丸以外的其他24種正常組織(如肺、卵巢、腎等)中未發(fā)現(xiàn)陽性表達。通過現(xiàn)僅有的幾篇文獻報道，表明此基因可能為一新的癌基因，與細胞增殖、凋亡、周期、分化等有密切關(guān)系。但到目前為止，其在鼻咽癌中的作用未見研究報道。我們在前期實驗研究中發(fā)現(xiàn)DEPDC1基因在鼻咽癌組織中的表達量明顯高于正常鼻咽部組織，本研究旨在此基礎(chǔ)上，對DEPDC1基因在鼻咽癌中的作用進行初步探討和分析，為鼻咽癌的臨床治療提供實驗基礎(chǔ)和理論依據(jù)。 方法： （1）沉默DEPDC1基因?qū)Ρ茄拾┘毎礖NE-1、CNE-1生長、凋亡、周期的影響：根據(jù)siRNA靶序列設(shè)計原則和方法，設(shè)計針對DEPDC1基因的siRNA序列，并轉(zhuǎn)染入HNE-1、CNE-1細胞，分別在mRNA和蛋白質(zhì)水平檢測DEPDC1基因表達量。通過倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化，流式細胞術(shù)檢測兩種細胞的凋亡和周期變化。采用MTS、平板克隆實驗檢測細胞的生長增殖情況。 （2）DEPDC1基因表達下調(diào)對細胞系HNE-1生長、凋亡、周期影響的機制研究：采用熒光定量PCR檢測HNE-1細胞中NF-κB通路的相關(guān)細胞因子的變化情況。同時采用熒光定量PCR和蛋白印跡檢測HNE-1中細胞分子CCNB1的變化。 結(jié)果： （1）通過PCR及Western Blot檢測顯示設(shè)計合成的siRNA可有效抑制DEPDC1基因的表達。細胞系HNE-1、CNE-1均出現(xiàn)明顯的細胞形態(tài)改變，細胞生長增殖受抑，細胞凋亡明顯增加，細胞周期阻滯于G2/M期。 （2）熒光定量PCR檢測HNE-1細胞，結(jié)果顯示NF-κB通路中多個腫瘤相關(guān)細胞因子出現(xiàn)變化。即抑制NF-κB激活的A20基因表達量明顯上調(diào)，受NF-κB調(diào)控的腫瘤相關(guān)靶基因的表達量下降，包括C-MYC、BCL-2、MMP9、ICAM-1基因。與細胞周期密切相關(guān)的CCNB1分子的表達在mRNA水平無明顯變化。在蛋白水平，其表達量上升。 綜上，本研究發(fā)現(xiàn)，沉默DEPDC1基因，導(dǎo)致鼻咽癌細胞系HNE-1和CNE-1出現(xiàn)細胞增殖受抑、凋亡增加、周期阻滯，其可能的機制為NF-κB通路被抑制，CCNB1蛋白降解延遲、減少所致。以上研究結(jié)果對于今后進一步深入探討DEPDC1基因在鼻咽癌發(fā)生發(fā)展中的作用機制及促進以DEPDC1為靶點的臨床抗癌藥物的研究具有重要意義。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R739.63

【參考文獻】

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本文編號：1239302