本文關(guān)鍵詞：快速老化小鼠聽功能、耳蝸NGFR TrkA的增齡性變化以及NGF轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)

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【摘要】：目的：探討快速老化小鼠聽覺功能、耳蝸組織中神經(jīng)生長因子受體酪氨酸激酶受體A（nerve growth factor receptor TrkA，NGFR TrkA）表達(dá)的增齡性變化以及NGF轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)，為老年性耳聾發(fā)病的分子機(jī)制和基因治療提供理論基礎(chǔ)。方法：該研究選用3、5、7月齡的快速老化小鼠亞系8（SAMP8）作為觀察對象。采用聽覺誘發(fā)反應(yīng)儀檢測其8kHz短純音ABR閾值；應(yīng)用免疫組化染色檢測NGFR TrkA在耳蝸組織中的表達(dá)情況，并應(yīng)用光密度檢測分析其增齡性變化特點(diǎn)。將欲轉(zhuǎn)染的小鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞分為四組：A組為脂質(zhì)體2000包裹的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組；B組為脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染組；C組為脂質(zhì)體包裹的空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組；D組為含10%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)液的陰性對照組。按質(zhì)粒提取試劑盒說明提取含NGF重組質(zhì)粒的陽性克隆大腸桿菌，將提取的重組質(zhì)粒經(jīng)限制性內(nèi)切酶HindIII and XhoI雙酶切鑒定后，，采用脂質(zhì)體Lipofectamine TM2000轉(zhuǎn)染方法將含有人β-NGF神經(jīng)生長因子的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至小鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞中，于轉(zhuǎn)染48小時(shí)后用4%多聚甲醛固定各組細(xì)胞并通過細(xì)胞免疫組化染色檢測NGF的表達(dá)情況。結(jié)果：1、各組SAMP8小鼠聽性腦干反應(yīng)閾值（ABR）分別為：3月齡SAMP8小鼠：左耳為31.667±2.582，右耳為32.500±2.739；5月齡SAMP8小鼠：左耳為54.167±2.041，右耳為53.333±2.582；7月齡SAMP8小鼠：左耳為58.333±2.582，右耳為58.333±2.582。5月齡與3月齡進(jìn)行比較P＜0.05，7月齡與5月齡進(jìn)行比較P＜0.05有顯著性差異。2、NGFR TrkA蛋白在不同月齡快速老化小鼠耳蝸組織中均有表達(dá)，且主要表達(dá)于螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和內(nèi)外毛細(xì)胞的胞核和胞漿。各組小鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞TrkA免疫組化染色平均光密度值分別為：3月齡SAMP8小鼠：0.5262±0.0148；5月齡SAMP8小鼠：0.4758±0.0129；7月齡SAMP8小鼠：0.4505±0.0148。5月齡與3月齡進(jìn)行比較P＜0.05，7月齡與5月齡進(jìn)行比較P＜0.05有顯著性差異。各組小鼠耳蝸內(nèi)外毛細(xì)胞TrkA免疫組化染色平均光密度值分別為：3月齡SAMP8小鼠：0.6311±0.0200；5月齡SAMP8小鼠：0.5487±0.0179；7月齡SAMP8小鼠：0.5183±0.0187。5月齡與3月齡進(jìn)行比較P＜0.05，7月齡與5月齡進(jìn)行比較P＜0.05有顯著性差異。3、各組骨髓基質(zhì)干細(xì)胞胞漿均可見棕黃色顆粒，且脂質(zhì)體2000包裹的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組（A組）NGF表達(dá)明顯高于其他組，與其他組進(jìn)行比較P＜0.05有顯著性差異。結(jié)論：NGFR TrkA蛋白的表達(dá)水平隨著快速老化小鼠聽覺功能增齡性減退而降低，說明NGFR TrkA可能與維持耳蝸的功能狀態(tài)有關(guān)；采用脂質(zhì)體Lipofectamine TM2000轉(zhuǎn)染方法能將NGF重組質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染至骨髓基質(zhì)干細(xì)胞并能在中表達(dá)，為應(yīng)用β-NGF修飾的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行耳蝸移植治療老年聾的動物實(shí)驗(yàn)研究提供前提和理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R764.436

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 郭運(yùn)凱;謝鼎華;楊新明;;小鼠內(nèi)耳3種溶酶體酶的定位及酶缺乏時(shí)的聽力損害[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年01期

2 劉潔,方秀斌;神經(jīng)營養(yǎng)因子4/5的研究進(jìn)展[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2001年03期

3 劉強(qiáng)和;羅香林;耿宛平;陳晨;雷迅;劉芳賢;鄧銘;;快速老化小鼠的聽功能和耳蝸螺旋神經(jīng)元的增齡性變化[J];山東大學(xué)耳鼻喉眼學(xué)報(bào);2008年03期

4 楊杰;周芝文;鄭麗君;曾進(jìn);楊期東;;TrkA和Bcl-2在局灶性腦缺血再灌注大鼠大腦皮質(zhì)中的表達(dá)[J];中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志;2010年07期

5 楊進(jìn)福;周文武;唐滔;喻杰鋒;周新民;胡建國;;血管內(nèi)皮生長因子轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞心肌移植對心肌梗死后大鼠心功能及血管新生的作用[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2006年15期

6 劉強(qiáng)和;羅香林;向秋;耿宛平;陳晨;雷迅;劉芳賢;伍紅良;;快速老化小鼠耳蝸組織MeCP2的增齡性變化[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2009年05期

本文編號：1208126