發(fā)布時(shí)間：2017-11-20 18:28

  本文關(guān)鍵詞：銀杏葉提取物對(duì)大鼠視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞線粒體跨膜電位及視網(wǎng)膜組織中熱休克蛋白表達(dá)的影響

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【摘要】：目的：視神經(jīng)損傷是一種視力損傷嚴(yán)重、預(yù)后較差的視神經(jīng)病變，其治療方法少、治療效果差。探求視神經(jīng)損傷后修復(fù)再生的方法，謀求改善視神經(jīng)功能的策略一直是眼科研究的熱點(diǎn)，但目前尚缺乏安全、有效的治療藥物。越來越多的證據(jù)表明，銀杏葉提取物（Ginkgo Bilobaextract,EGb761）具有抗氧化、抗缺血、保護(hù)線粒體、抑制一氧化氮合酶、抑制谷氨酸毒性以及抑制血小板活化因子等多種作用，且長(zhǎng)期應(yīng)用未發(fā)現(xiàn)其毒、副作用[1]，是一種有潛力并且可以長(zhǎng)期應(yīng)用的視功能保護(hù)劑。 本研究通過建立大鼠視神經(jīng)不完全損傷模型，腹腔注射銀杏葉提取物，來觀察視神經(jīng)損傷后，銀杏葉提取物對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(retinalganglion cell,RGCs)線粒體跨膜電位(mitochondrial transm embranepotentials,△ψm)變化及視網(wǎng)膜組織中熱休克蛋白(heatshock proteins,HSPs)27表達(dá)的影響，從而探討銀杏葉提取物對(duì)外傷性視神經(jīng)損傷的作用，進(jìn)而為銀杏葉提取物臨床治療視神經(jīng)損傷提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：清潔級(jí)健康SD大鼠60只，雌雄不限，體重250g±10g。常規(guī)眼部檢查無眼疾。隨機(jī)分為3組,正常對(duì)照組（正常組）20只（20眼），實(shí)驗(yàn)對(duì)照組（對(duì)照組）20只（20眼），實(shí)驗(yàn)治療組（治療組）20只（20眼）。正常組不做任何處理。對(duì)照組和治療組建立左眼視神經(jīng)損傷模型，造模后1小時(shí)開始，治療組給予0.35%銀杏葉提取物(100mg/kg)，生理鹽水配置腹腔注射[2，3]，對(duì)照組給予同治療組體積的生理鹽水直接腹腔注射，此后每日一次，至試驗(yàn)結(jié)束。于實(shí)驗(yàn)3d、7d、14d、28d，每組各取5眼的動(dòng)物視網(wǎng)膜組織，用HE染色觀察各組視網(wǎng)膜組織形態(tài)學(xué)的改變、免疫組織化學(xué)染色觀察熱休克蛋白27的表達(dá)情況、流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞線粒體跨膜電位的變化。研究中計(jì)量資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x s))表示，采用方差分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析，以P0.05為差異有顯著性。 結(jié)果： 1視網(wǎng)膜組織HE染色 正常組：視網(wǎng)膜各細(xì)胞層、內(nèi)核層及外核層的細(xì)胞排列致密，結(jié)構(gòu)清晰可見，邊界清楚；對(duì)照組：各時(shí)間點(diǎn)RGCs排列紊亂，數(shù)量不同程度的減少，在損傷3d、7d，部分細(xì)胞可出現(xiàn)水腫及空泡樣變化，，隨著損傷時(shí)間延長(zhǎng)，大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層的胞核明顯變稀疏、變薄且排列紊亂，內(nèi)核層和外核層也不同程度的減少；治療組亦可見上述改變，但其各時(shí)間點(diǎn)均較對(duì)照組的3d、7d、14d、28d時(shí)間點(diǎn)損傷情況輕，其中14d損傷的情況明顯明顯輕于3d、7d和28d。 2熱休克蛋白27免疫組織化學(xué)染色： HSPs27的表達(dá)可位于視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層，其強(qiáng)陽性表達(dá)呈棕色。正常組實(shí)驗(yàn)中所見呈現(xiàn)弱陽性表達(dá)淺黃色染色，各個(gè)時(shí)間點(diǎn)無明顯變化；對(duì)照組3d為弱陽性表達(dá)呈淺黃染色，7d染色加深，14d達(dá)高峰呈強(qiáng)陽性表達(dá)棕色，28d染色呈淺黃色；實(shí)驗(yàn)組各時(shí)間點(diǎn)陽性表達(dá)均弱于對(duì)照組，但明顯強(qiáng)于正常組。 免疫組織化學(xué)的半定量檢測(cè)結(jié)果：正常組3d、7d、14d及28d的半定量檢測(cè)結(jié)果分別為：0.113士0.015、0.117士0.009、0.115士0.124、0.117士0.006；對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)的半定量檢測(cè)結(jié)果分別為：0.424士0.031、0.538士0.073、0.337士0.022、0.252士0.014；治療組各時(shí)間點(diǎn)的半定量檢測(cè)結(jié)果分別為：0.330士0.021、0.327士0.183、0.211士0.015、0.172士0.007。在實(shí)驗(yàn)的3d、7d、14d及28d，對(duì)照組和治療組HSPs27的陽性表達(dá)較正常組顯著升高，治療組較對(duì)照組HSPs27的陽性表達(dá)各時(shí)間點(diǎn)顯著降低，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P㩳0.05）。 3流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞線粒體跨膜電位 正常組正常大鼠RGC△ψm為825.648±5.822；對(duì)照組：3d、7d、14d、28d， RGC△ψm為分別為714.574±6.386、633.108±6.305、657.360±4.879、698.838±5.630，各時(shí)間點(diǎn)的△ψm均明顯低于正常組，且各時(shí)間點(diǎn)間△ψm差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 0.05)；治療組：3d、7d、14d、28d，RGC△ψm為分別為784.879±6.424、732.538±4.851、755.698±6.993、766.769±5.134，各時(shí)間點(diǎn)的△ψm均低于對(duì)照組，但高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 0.05)。 結(jié)論： 1視神經(jīng)損傷后RGCs排列紊亂，細(xì)胞數(shù)量不同程度的減少。 2視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜組織中熱休克蛋白27的表達(dá)上升，線粒體跨膜電位下降。 3應(yīng)用銀杏葉提取物治療后可以使視網(wǎng)膜組織中熱休克蛋白的表達(dá)下降，線粒體跨膜電位上升。 4銀杏葉提取物參與了視神經(jīng)損傷大鼠視網(wǎng)膜的修復(fù)過程。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R774.6

【引證文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李亙;何偉;;中藥對(duì)視神經(jīng)保護(hù)作用研究進(jìn)展[J];實(shí)用中醫(yī)藥雜志;2017年03期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張冰冰;銀杏酮酯促面神經(jīng)擠壓傷恢復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2016年

本文編號(hào)：1208064