本文關(guān)鍵詞：二甲雙胍對(duì)抗下咽癌Fadu細(xì)胞生長(zhǎng)的作用及其對(duì)化療藥物敏感性影響的研究

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【摘要】：目的：檢測(cè)二甲雙胍作用于下咽癌Fadu細(xì)胞后其增殖及周期情況的變化，初步研究P21是否參與二甲雙胍所激活的AMPK信號(hào)分子相關(guān)通路，并探討二甲雙胍聯(lián)合順鉑、5-氟尿嘧啶及紫杉醇對(duì)Fadu細(xì)胞增殖情況的影響，為糖尿病下咽癌患者的藥物治療提供新方案。 方法： 1體外培養(yǎng)下咽癌Fadu細(xì)胞，予不同濃度的二甲雙胍（0、2mmol/L、5mmol/L、10mmol/L、20mmol/L、40mmol/L）分別作用24h、48h、72h，用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況，流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期。 2分別以0mmol/L、5mmol/L、10mmol/L的二甲雙胍作用于Fadu細(xì)胞株，免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)細(xì)胞中AMPK、P21表達(dá)情況的變化。 3體外培養(yǎng)Fadu細(xì)胞，將5mmol/L的二甲雙胍分別與不同濃度的三種化療藥物聯(lián)用，其中順鉑濃度分別為0、0.1μg/ml、0.5μg/ml、2μg/ml、4μg/ml，5-氟尿嘧啶為0、4μg/ml、20μg/ml、100μg/ml、500μg/ml，紫杉醇0、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml，作用于Fadu細(xì)胞24h、48h、72h，MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況的變化。 結(jié)果： 1二甲雙胍作用于Fadu細(xì)胞后可抑制其增殖，并且呈濃度、時(shí)間依賴(lài)性。隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)方差分析顯示：濃度因素對(duì)細(xì)胞存活率有影響，（F=97.411，P0.01）；作用時(shí)間對(duì)細(xì)胞存活率有影響，（F=323.251，P0.01）。其中作用48小時(shí)二甲雙胍對(duì)人下咽癌Fadu細(xì)胞的IC50為15.036mmol/L。流式技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期顯示，二甲雙胍作用可使Fadu細(xì)胞發(fā)生G1期阻滯，同樣受藥物濃度及作用時(shí)間的雙重影響。（P0.01）。 2免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示：二甲雙胍干預(yù)組較對(duì)照組AMPK及P21表達(dá)均增高，其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。且AMPK蛋白表達(dá)水平與P21蛋白表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.764, P0.05)。 3二甲雙胍聯(lián)合化療藥物與單獨(dú)應(yīng)用化療藥物干預(yù)Fadu細(xì)胞不同時(shí)間，MTT結(jié)果顯示：（1）不同濃度順鉑聯(lián)合5mmol/L二甲雙胍作用不同時(shí)間后細(xì)胞增殖抑制率均較單獨(dú)應(yīng)用順鉑增高，，作用24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)行多因素方差分析顯示聯(lián)合用藥及順鉑單獨(dú)作用對(duì)細(xì)胞增殖的影響有差異，P值均小于0.01。計(jì)算48小時(shí)聯(lián)合用藥的CI值為0.43，認(rèn)為在人下咽癌Fadu細(xì)胞中二甲雙胍聯(lián)合順鉑作用具有高度協(xié)同作用。（2）低濃度5-氟尿嘧啶（4μg/ml、20μg/ml）聯(lián)合5mmol/L二甲雙胍作用24小時(shí)、48小時(shí)較單用5-氟尿嘧啶細(xì)胞存活率稍有降低，至作用72小時(shí)反而增加；而高濃度5-氟尿嘧啶（500μg/ml）與二甲雙胍聯(lián)合應(yīng)用時(shí)在24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)均較單獨(dú)應(yīng)用5-氟尿嘧啶細(xì)胞存活率增加。計(jì)算48小時(shí)CI值為1.15，認(rèn)為在人下咽癌Fadu細(xì)胞中二甲雙胍對(duì)5-氟尿嘧啶有拮抗作用。（3）除1000ng/ml紫杉醇聯(lián)用二甲雙胍作用72小時(shí)較單用化療藥物細(xì)胞存活率升高以外，其余各濃度組作用不同時(shí)間Fadu細(xì)胞存活率均降低。作用24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)各行多因素方差分析顯示聯(lián)合用藥及紫杉醇單獨(dú)作用對(duì)細(xì)胞增殖影響有差異，P值均小于0.01。計(jì)算48小時(shí)聯(lián)合用藥的CI值為0.37，認(rèn)為在人下咽癌Fadu細(xì)胞中二甲雙胍聯(lián)合紫杉醇具有強(qiáng)協(xié)同作用。 結(jié)論： 1二甲雙胍可以抑制人下咽癌Fadu細(xì)胞的增殖，這與二甲雙胍導(dǎo)致細(xì)胞阻滯于G1期相關(guān)，并且二甲雙胍至少部分通過(guò)AMPK及P21相關(guān)的信號(hào)分子發(fā)揮抗腫瘤作用。 2二甲雙胍可以增強(qiáng)順鉑及紫杉醇的化療敏感性，但是卻拮抗5-氟尿嘧啶對(duì)Fadu細(xì)胞的毒性作用，提示我們?cè)谔悄虿『喜⑾卵拾┗颊叩乃幬镏委熯^(guò)程中，二甲雙胍可以作為順鉑及紫杉醇的增敏劑使用，但卻不宜與5-氟尿嘧啶聯(lián)合應(yīng)用。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R739.63

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 楊安強(qiáng);鄭興征;潘曉琳;付錦艷;;細(xì)胞周期調(diào)控基因p21~(WAF1/CIP1)與腫瘤的關(guān)系[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2006年02期

2 吳雄志;;運(yùn)用新一代抗腫瘤藥物分類(lèi)系統(tǒng)指導(dǎo)中醫(yī)學(xué)研究[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志;2009年09期

本文編號(hào)：1182066