本文關(guān)鍵詞：SLIT2基因轉(zhuǎn)染對(duì)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞VEGF表達(dá)的影響及其作用機(jī)制

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【摘要】：目的:研究Slit2基因?qū)θ艘暰W(wǎng)膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)細(xì)胞表達(dá)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影響,并探討絲裂原激活(mitogen-activated,MEK)/細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracellular signal regulated protein kinase,ERK)和磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶(serine-threonine kinase,AKT)這2條信號(hào)通路在此過(guò)程中的作用。方法:(1)體外培養(yǎng)人RPE細(xì)胞株RPE-19;(2)將腺病毒介導(dǎo)的Slit2(adenovirus-mediated Slit2,Ad-Slit2)轉(zhuǎn)染RPE細(xì)胞,培養(yǎng)12、24 h及48 h;(3)轉(zhuǎn)染前將MEK信號(hào)通路阻斷劑PD98059、PI3K信號(hào)通路阻斷劑LY294002預(yù)處理RPE細(xì)胞1 h;(4)用real-time PCR及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)檢測(cè)VEGF的表達(dá)水平,用Western blot檢測(cè)磷酸化ERK、磷酸化AKT的表達(dá)情況。結(jié)果:Slit2轉(zhuǎn)染的RPE細(xì)胞后,real-time PCR結(jié)果顯示不同時(shí)間之間VEGF m RNA表達(dá)有差別(F=12.789,P=0.018),組別和時(shí)間之間存在交互作用(F=13.375,P=0.017),不同組別有差別(F=16.855,P=0.015),在24 h與48 h,Ad-Slit2組高于空腺病毒組(P24 h=0.002,P48 h=0.018)。ELISA結(jié)果顯示不同時(shí)間之間VEGF蛋白表達(dá)有差別(F=24.886,P=0.000),組別和時(shí)間之間存在交互作用(F=23.524,P=0.000),不同組別有差別(F=28.250,P=0.006),在48 h,Ad-Slit2組高于空腺病毒組(P=0.003)。Western blot結(jié)果可見p-ERK及p-AKT的蛋白表達(dá)水平增加,阻斷劑PD98059及LY294002分別能降低ERK、AKT的磷酸化水平,并與Ad-Slit2組相比較,real-time PCR結(jié)果顯示VEGF m RNA表達(dá)水平在不同時(shí)間有差別(F=32.202,P=0.000),組別和時(shí)間之間存在交互作用(F=8.372,P=0.006);不同組別存在差別(F=15.062,P=0.001),ELISA結(jié)果顯示VEGF蛋白表達(dá)水平在不同時(shí)間之間有差別(F=90.703,P=0.000),組別和時(shí)間之間存在交互作用(F=4.968,P=0.005),不同組別存在差別(F=69.636,P=0.000)。結(jié)論:PI3K/AKT以及MEK/ERK這兩條信號(hào)通路參與了Slit2所誘導(dǎo)的RPE細(xì)胞中VEGF表達(dá)水平增加。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院眼科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào):81170858)
【分類號(hào)】：R773.4
【正文快照】： 眼底新生血管是多種眼底疾病所導(dǎo)致的并發(fā)癥,常引起嚴(yán)重的視力障礙[1]。眼底新生血管的發(fā)生主要是由于促進(jìn)因子和抑制因子動(dòng)態(tài)平衡失調(diào)而導(dǎo)致,在這些因子中,血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)作為一種很強(qiáng)的內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂原,具有內(nèi)皮細(xì)胞高度特異

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 黃莉蕓;周希瑗;;腺病毒介導(dǎo)的slit2 shRNA對(duì)缺氧誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2014年03期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 湯艷玲;周希瑗;;腺病毒介導(dǎo)的Slit2及Slit2 ShRNA轉(zhuǎn)染缺氧誘導(dǎo)的人RPE細(xì)胞對(duì)人脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2014年11期

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 陳軍;于東風(fēng);劉弋;楊錦雷;;Slit2/Robo1蛋白在直腸癌中的表達(dá)及與微血管密度的關(guān)系[J];安徽醫(yī)藥;2011年06期

2 季銳;盧雪峰;付金棟;姜旭生;雒燕;楊淑萍;;Slit2和Robo1蛋白表達(dá)與胃癌關(guān)系的臨床研究[J];中國(guó)現(xiàn)代普通外科進(jìn)展;2008年02期

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本文編號(hào)：1178193