本文關(guān)鍵詞：NLRP3蛋白在病毒性角膜炎中的表達(dá)性研究

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【摘要】：目的 病毒性角膜炎是一種由病毒致病原感染角膜而引起的致盲率極高的感染性疾病，其發(fā)病機(jī)理尚未明確。本研究主要選用固有免疫中NOD樣模式識別受體分子中NLRP3蛋白，采用Balb/C小鼠角膜和人角膜上皮建立實驗性病毒性角膜炎模型。通過檢測角膜上皮細(xì)胞中病毒體對NLRP3蛋白表達(dá)的影響及作用，進(jìn)而研究NLRP3蛋白在病毒性角膜炎發(fā)病中的相關(guān)作用。 方法 選用相同周齡雄性Balb/C小鼠，采用角膜基質(zhì)注射法注射3×105/ml Ⅰ型帶狀皰疹病毒（HSV-1）1μl建立小鼠的病毒性角膜炎模型。在感染后第1天和第7天用Western blot和免疫熒光技術(shù)分別觀察NLRP3蛋白的表達(dá)及定位情況。在臨床上取正常人和HSV-1感染活動期病人的角膜環(huán)做冰凍切片，用免疫熒光技術(shù)檢測人角膜上皮細(xì)胞中NLPR3位置變化情況。通過體外培養(yǎng)的SV-40大T抗原（猿猴空泡病毒大T抗原）轉(zhuǎn)染的人角膜上皮細(xì)胞系（HCEC）模擬體外病毒性角膜炎發(fā)病模型，用同樣的方法觀察NLRP3蛋白在HCEC上的表達(dá)及變化情況。并在加入KCL抑制劑后，觀察NLRP3蛋白的表達(dá)的表達(dá)情況。 結(jié)果 Balb/C小鼠在角膜基質(zhì)注射3×105/ml HSV-1病毒后感染了嚴(yán)重的角膜炎。在感染7天時，小鼠角膜水腫、潰瘍，有大量的角膜新生血管產(chǎn)生。Western blot結(jié)果顯示小鼠角膜感染7天時，NLRP3蛋白被激活，組成一個分子較大的NLRP3炎癥小體的復(fù)合體，并且有大量的IL-1β表達(dá)。免疫熒光結(jié)果顯示，正常小鼠角膜上皮細(xì)胞中NLRP3蛋白主要在細(xì)胞質(zhì)區(qū)域表達(dá)，在感染后第1天時，基本沒有變化，但在感染后第7天時，有大量的NLRP3蛋白高表達(dá)在角膜上皮細(xì)胞的細(xì)胞核區(qū)域。在正常人和HSV-1感染活動期的人的角膜環(huán)上，免疫熒光實驗顯示同樣的重定位現(xiàn)象。結(jié)果顯示，在HSV-1病毒性角膜炎感染一定時期，HSV-1病毒可以激活NLRP3蛋白的活性，并且可以使NLRP3蛋白發(fā)生重定位現(xiàn)象。為了驗證，在角膜上皮細(xì)胞系當(dāng)中，病毒感染與NLRP3蛋白之間的作用并非偶然性。我們在SV-40大T抗原轉(zhuǎn)染的人角膜上皮細(xì)胞（HCEC）當(dāng)中，用Westernblot和免疫熒光技術(shù)檢測了NLRP3的表達(dá)與位置定位情況。實驗結(jié)果顯示，在正常的人角膜上皮細(xì)胞中，NLRP3蛋白主要表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)區(qū)域，而在HCEC模擬病毒性角膜炎模型當(dāng)中，，NLRP3蛋白幾乎全部在細(xì)胞核區(qū)域表達(dá)，在細(xì)胞質(zhì)區(qū)域幾乎沒有表達(dá)。KCL是在NLRP3炎癥小體活化過程中的一種抑制劑，可以抑制NLRP3炎癥小體的活化，當(dāng)我們在HCEC當(dāng)中加入相應(yīng)濃度的KCL后，發(fā)現(xiàn)大部分的NLRP3蛋白部分表達(dá)在了細(xì)胞質(zhì)區(qū)域。實驗結(jié)果顯示，SV-40大T抗原，在HCEC當(dāng)中，與NLRP3蛋白發(fā)生了一定的作用，在激活NLRP3炎癥小體的同時，使NLRP3蛋白發(fā)生從細(xì)胞質(zhì)到細(xì)胞核的轉(zhuǎn)移性表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：泰山醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R772.21

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1175207