本文關(guān)鍵詞：綠原酸對氧化應(yīng)激損傷人視網(wǎng)膜色素上皮細胞保護作用的分子機制

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【摘要】：目的： 觀察綠原酸（CGA）對過氧化氫誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷人視網(wǎng)膜色素上皮細胞(ARPE-19)的保護作用，，通過觀察視網(wǎng)膜色素上皮細胞在過氧化氫處理后細胞凋亡相關(guān)分子的表達變化，探討綠原酸對氧化應(yīng)激的視網(wǎng)膜色素上皮細胞的抗凋亡作用及其可能的分子機制，為將來臨床上利用綠原酸治療年齡相關(guān)性黃斑變性等與氧化應(yīng)激相關(guān)的眼病提供理論依據(jù)。 方法： 1、參考國外相關(guān)文獻，以500uM濃度的過氧化氫(H2O2)作用于ARPE-19人視網(wǎng)膜色素上皮細胞24h，建立氧化應(yīng)激損傷模型。 2、WST-1細胞增殖實驗檢測綠原酸對ARPE-19人視網(wǎng)膜色素上皮細胞的毒性，綠原酸處理細胞24h后待檢。 3、實驗分三組：正常對照組，過氧化氫建模組，綠原酸保護組。WST-1細胞增殖實驗檢測各組細胞存活率。 4、采用流式細胞儀檢測每個實驗組ARPE-19細胞的凋亡率。 5、通過RT-PCR檢測每個實驗組細胞的Bcl-2和Caspase-3基因表達水平。 6、通過Western blot檢測每個實驗組細胞的Bcl-2和Caspase-3蛋白表達水平。 結(jié)果： 1、不同濃度的CGA（12.5uM，25uM,50uM,100uM,200uM）處理ARPE-19人視網(wǎng)膜色素上皮細胞24h后，各實驗組ARPE-19細胞的相對細胞活力（cellviability）與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義；說明0~200uM濃度的CGA對ARPE-19人視網(wǎng)膜色素上皮細胞沒有表現(xiàn)出明顯的毒性作用。 2、各實驗組的相對細胞活力H2O2建模組低于對照組（P＜0.05），50uM,100uM,200uM的CGA保護組高于H2O2建模組（P＜0.05）；說明H2O2能夠誘導(dǎo)ARPE-19人視網(wǎng)膜色素上皮細胞氧化應(yīng)激損傷，而CGA具有保護過氧化氫誘導(dǎo)的ARPE-19人視網(wǎng)膜色素上皮細胞的氧化應(yīng)激損傷的作用。 3、各實驗組細胞凋亡率（%）正常對照組為8.31±2.87，H2O2建模組為65.43±8.82，綠原酸（100uM）保護組為29.43±6.80。結(jié)果顯示建模組的細胞凋亡率高于正常對照組的凋亡率（P＜0.05），綠原酸保護組的細胞凋亡率低于H2O2建模組的凋亡率（P＜0.05）；說明H2O2能夠誘導(dǎo)ARPE-19人視網(wǎng)膜色素上皮細胞凋亡，綠原酸具有抗ARPE-19人視網(wǎng)膜色素上皮細胞凋亡作用。 4、RT-PCR結(jié)果顯示Bcl-2mRNA表達水平H2O2建模組低于正常對照組而綠原酸保護組高于H2O2建模組（P＜0.05），Caspase-3mRNA表達水平H2O2建模組高于正常對照組而綠原酸保護組低于H2O2建模組（P＜0.05）；說明綠原酸保護過氧化氫誘導(dǎo)的ARPE-19人視網(wǎng)膜色素上皮細胞的氧化應(yīng)激損傷時上調(diào)Bcl-2基因的表達，下調(diào)Caspase-3基因的表達。 5、Western blot結(jié)果顯示Bcl-2蛋白表達水平H2O2建模組低于正常對照組而綠原酸保護組高于H2O2建模組（P＜0.05），Caspase-3蛋白表達水平H2O2建模組高于正常對照組而綠原酸保護組低于H2O2建模組（P＜0.05）；說明綠原酸保護過氧化氫誘導(dǎo)的ARPE-19人視網(wǎng)膜色素上皮細胞的氧化應(yīng)激損傷時上調(diào)Bcl-2蛋白的表達，下調(diào)Caspase-3蛋白的表達。 結(jié)論： 1、綠原酸對氧化應(yīng)激損傷的ARPE-19人視網(wǎng)膜色素上皮細胞具有保護作用,而對正常的ARPE-19細胞沒有表現(xiàn)出明顯的毒性作用。 2、綠原酸對H2O2誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷ARPE-19人視網(wǎng)膜色素上皮細胞具有抗凋亡保護作用，其可能通過增強Bcl-2基因和蛋白表達以及抑制Caspase-3的基因和蛋白發(fā)揮保護作用。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R774

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本文編號：1138290