本文關(guān)鍵詞：綠原酸對(duì)氧化應(yīng)激損傷人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞保護(hù)作用的分子機(jī)制

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【摘要】：目的： 觀察綠原酸（CGA）對(duì)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(ARPE-19)的保護(hù)作用，，通過(guò)觀察視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞在過(guò)氧化氫處理后細(xì)胞凋亡相關(guān)分子的表達(dá)變化，探討綠原酸對(duì)氧化應(yīng)激的視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的抗凋亡作用及其可能的分子機(jī)制，為將來(lái)臨床上利用綠原酸治療年齡相關(guān)性黃斑變性等與氧化應(yīng)激相關(guān)的眼病提供理論依據(jù)。 方法： 1、參考國(guó)外相關(guān)文獻(xiàn)，以500uM濃度的過(guò)氧化氫(H2O2)作用于ARPE-19人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞24h，建立氧化應(yīng)激損傷模型。 2、WST-1細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)綠原酸對(duì)ARPE-19人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的毒性，綠原酸處理細(xì)胞24h后待檢。 3、實(shí)驗(yàn)分三組：正常對(duì)照組，過(guò)氧化氫建模組，綠原酸保護(hù)組。WST-1細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞存活率。 4、采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)每個(gè)實(shí)驗(yàn)組ARPE-19細(xì)胞的凋亡率。 5、通過(guò)RT-PCR檢測(cè)每個(gè)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的Bcl-2和Caspase-3基因表達(dá)水平。 6、通過(guò)Western blot檢測(cè)每個(gè)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的Bcl-2和Caspase-3蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果： 1、不同濃度的CGA（12.5uM，25uM,50uM,100uM,200uM）處理ARPE-19人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞24h后，各實(shí)驗(yàn)組ARPE-19細(xì)胞的相對(duì)細(xì)胞活力（cellviability）與對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；說(shuō)明0~200uM濃度的CGA對(duì)ARPE-19人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞沒(méi)有表現(xiàn)出明顯的毒性作用。 2、各實(shí)驗(yàn)組的相對(duì)細(xì)胞活力H2O2建模組低于對(duì)照組（P＜0.05），50uM,100uM,200uM的CGA保護(hù)組高于H2O2建模組（P＜0.05）；說(shuō)明H2O2能夠誘導(dǎo)ARPE-19人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷，而CGA具有保護(hù)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的ARPE-19人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷的作用。 3、各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率（%）正常對(duì)照組為8.31±2.87，H2O2建模組為65.43±8.82，綠原酸（100uM）保護(hù)組為29.43±6.80。結(jié)果顯示建模組的細(xì)胞凋亡率高于正常對(duì)照組的凋亡率（P＜0.05），綠原酸保護(hù)組的細(xì)胞凋亡率低于H2O2建模組的凋亡率（P＜0.05）；說(shuō)明H2O2能夠誘導(dǎo)ARPE-19人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞凋亡，綠原酸具有抗ARPE-19人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞凋亡作用。 4、RT-PCR結(jié)果顯示Bcl-2mRNA表達(dá)水平H2O2建模組低于正常對(duì)照組而綠原酸保護(hù)組高于H2O2建模組（P＜0.05），Caspase-3mRNA表達(dá)水平H2O2建模組高于正常對(duì)照組而綠原酸保護(hù)組低于H2O2建模組（P＜0.05）；說(shuō)明綠原酸保護(hù)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的ARPE-19人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷時(shí)上調(diào)Bcl-2基因的表達(dá)，下調(diào)Caspase-3基因的表達(dá)。 5、Western blot結(jié)果顯示Bcl-2蛋白表達(dá)水平H2O2建模組低于正常對(duì)照組而綠原酸保護(hù)組高于H2O2建模組（P＜0.05），Caspase-3蛋白表達(dá)水平H2O2建模組高于正常對(duì)照組而綠原酸保護(hù)組低于H2O2建模組（P＜0.05）；說(shuō)明綠原酸保護(hù)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的ARPE-19人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷時(shí)上調(diào)Bcl-2蛋白的表達(dá)，下調(diào)Caspase-3蛋白的表達(dá)。 結(jié)論： 1、綠原酸對(duì)氧化應(yīng)激損傷的ARPE-19人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞具有保護(hù)作用,而對(duì)正常的ARPE-19細(xì)胞沒(méi)有表現(xiàn)出明顯的毒性作用。 2、綠原酸對(duì)H2O2誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷ARPE-19人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞具有抗凋亡保護(hù)作用，其可能通過(guò)增強(qiáng)Bcl-2基因和蛋白表達(dá)以及抑制Caspase-3的基因和蛋白發(fā)揮保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R774

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本文編號(hào)：1138290