本文關(guān)鍵詞：蛋氨酸對(duì)順鉑引起的內(nèi)耳毒性保護(hù)機(jī)制的研究

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【摘要】：目的：順鉑是在臨床當(dāng)中廣泛應(yīng)用的化療藥物，主要用于卵巢癌、睪丸癌、肺癌、頭頸部腫瘤和膀胱癌。雖然其抗腫瘤的療效可以肯定，但是它的副作用在治療的過(guò)程中和治療后發(fā)生，這些副作用包括消化道反應(yīng)、腎毒性、神經(jīng)毒性和耳毒性。聽(tīng)力損傷的主要特點(diǎn)是雙側(cè)進(jìn)行性、不可逆性的，往往累及的是高頻聽(tīng)力，嚴(yán)重時(shí)可以累及中低頻聽(tīng)力。目前的研究大多集中在順鉑的聽(tīng)力損傷方面，但順鉑導(dǎo)致的前庭功能紊亂同樣不能忽視，前庭功能的紊亂可直接引起患者眩暈并喪失行動(dòng)能力，這樣就嚴(yán)重影響了許多腫瘤病人康復(fù)后的生存質(zhì)量。 順鉑導(dǎo)致內(nèi)耳毒性的機(jī)制目前尚未完全闡明，其對(duì)耳蝸形態(tài)的影響主要表現(xiàn)在Corti器的外毛細(xì)胞、血管紋和螺旋神經(jīng)節(jié)三方面，而前庭組織的形態(tài)學(xué)暫時(shí)還沒(méi)有充分的報(bào)道可供參考�；钚匝醮兀≧OS）在順鉑內(nèi)耳毒性中所起的作用得到廣泛認(rèn)可。ROS積聚后產(chǎn)生的亞硝酸鹽可以破壞蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能；ROS還作用于構(gòu)成細(xì)胞膜的多不飽和脂肪酸，使之變性生成具有更強(qiáng)毒性的4-羥基壬烯醛（4-HNE），4-HNE與Ca2+內(nèi)流密切相關(guān)，而Ca2+內(nèi)流可直接導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的發(fā)生。此外，耳蝸中存在大量縫隙連接蛋白，即Connexin26（Cx26）和Connexin30（Cx30），對(duì)于正常的聽(tīng)力是必不可少的，Cx26和Cx30因在遺傳性耳聾中的作用而被廣泛關(guān)注，但兩種蛋白是否參與了順鉑導(dǎo)致的耳毒性和前庭毒性的發(fā)病機(jī)制,國(guó)內(nèi)外目前還沒(méi)有相關(guān)研究。在預(yù)防耳毒性上，蛋氨酸可以減少順鉑導(dǎo)致的聽(tīng)功能損傷和耳蝸毛細(xì)胞的丟失，是一種很好的內(nèi)耳保護(hù)藥物。 我們將通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來(lái)研究蛋氨酸在功能學(xué)、形態(tài)學(xué)、氧化應(yīng)激水平和凋亡水平上對(duì)順鉑引起的內(nèi)耳毒性是否均具有保護(hù)作用，以及連接蛋白Cx26和Cx30是否參與了順鉑導(dǎo)致的耳毒性和前庭毒性，蛋氨酸能否對(duì)Cx26和Cx30在順鉑中的變化產(chǎn)生影響。 方法：30只雄性昆明小鼠按照隨機(jī)原則分為①對(duì)照組（n=10）②順鉑組（n=10）③蛋氨酸+順鉑組（n=10）。①對(duì)照組：腹腔注射生理鹽水2ml，1次/天，連續(xù)3天；②順鉑組：腹腔注射順鉑溶液15mg/kg體重，1次/天，連續(xù)3天；③蛋氨酸+順鉑組：首先腹腔注射蛋氨酸溶液400mg/kg體重，一個(gè)小時(shí)后，腹腔注射順鉑溶液15mg/kg體重，1次/天，連續(xù)3天。三組昆明小鼠在造模前和造模后，都接受聽(tīng)覺(jué)腦干反應(yīng)（ABR）和前庭誘發(fā)肌電位（VEMP）的測(cè)試來(lái)評(píng)估聽(tīng)力功能和前庭功能，依據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)要求來(lái)收集基底膜組織和前庭組織的標(biāo)本。通過(guò)基底膜及前庭組織鋪片HE染色和myosin-VI染色來(lái)觀(guān)察各組毛細(xì)胞的存活情況；通過(guò)脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物4-HNE免疫組織化學(xué)和TUNEL凋亡檢測(cè)來(lái)研究各組內(nèi)耳中的氧化應(yīng)激水平和凋亡情況；通過(guò)Cx26和Cx30免疫熒光組織化學(xué)染色及Cx26和Cx30western blot檢測(cè)來(lái)觀(guān)察兩種蛋白在各組中的表達(dá)，從而研究蛋氨酸是否在上述方面對(duì)順鉑引起的耳毒性和前庭毒性具有保護(hù)作用。利用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差形式表示，以P0.05為存在顯著性差異的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果： 1一般觀(guān)察結(jié)果：對(duì)照組小鼠正常生長(zhǎng),好動(dòng)，耳廓反應(yīng)靈敏；順鉑組小鼠毛發(fā)無(wú)光澤，消瘦，不好動(dòng)，，耳廓反應(yīng)不靈敏；蛋氨酸+順鉑組小鼠正常生長(zhǎng)，毛發(fā)有光澤，略消瘦，好動(dòng)，耳廓反應(yīng)較靈敏。 2聽(tīng)覺(jué)腦干反應(yīng)（ABR）測(cè)試結(jié)果：實(shí)驗(yàn)前各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物ABR閾值、潛伏期及波間期沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；試驗(yàn)后對(duì)照組小鼠閾值為（3.25±3.35）dB SPL，順鉑組小鼠閾值為（63.10±19.87）dB SPL，蛋氨酸+順鉑組小鼠閾值為（41.67±13.17）dB SPL，三組之間兩兩比較均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）。 3前庭誘發(fā)肌電位（VEMP）測(cè)試結(jié)果：造模前三組小鼠VEMP檢測(cè)均引出正常的波形，且各組間Ⅰ波、II波潛伏期沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）。造模后，正常組小鼠可以引出正常波形，Ⅰ波、II波潛伏期分別為（0.57±0.12）ms和（0.89±0.13）ms；順鉑組小鼠均未引出正常的波形；蛋氨酸+順鉑組小鼠可以引出波形，但Ⅰ波、II波潛伏期分別是（1.60±0.54）ms和（1.98±0.53）ms，與對(duì)照組相比Ⅰ波、II波潛伏期存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）。 4基底膜及前庭組織鋪片HE染色和myosin-VI染色結(jié)果：對(duì)照組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物耳蝸內(nèi)、外毛細(xì)胞排列整齊，結(jié)構(gòu)清晰，未發(fā)現(xiàn)變性、缺損；順鉑組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與對(duì)照組相比，毛細(xì)胞出現(xiàn)較為明顯的缺失，以外毛細(xì)胞更為明顯；蛋氨酸+順鉑組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與對(duì)照組相比，毛細(xì)胞出現(xiàn)散在的缺失，主要出現(xiàn)在外毛細(xì)胞，剩余毛細(xì)胞結(jié)構(gòu)較為完整。 54-HNE免疫組織化學(xué)染色結(jié)果：對(duì)照組耳蝸組織切片中耳蝸基底膜、血管紋、螺旋側(cè)韌帶和球囊中沒(méi)有表達(dá)4-HNE；順鉑組耳蝸基底膜、血管紋、螺旋側(cè)韌帶和球囊中都非常強(qiáng)烈地表達(dá)了4-HNE；蛋氨酸+順鉑組耳蝸基底膜、血管紋、螺旋側(cè)韌帶中出現(xiàn)了4-HNE的表達(dá)，但明顯弱于順鉑組，球囊中幾乎沒(méi)有4-HNE的表達(dá)。 6TUNEL凋亡檢測(cè)結(jié)果：對(duì)照組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物耳蝸組織切片TUNEL染色沒(méi)有發(fā)現(xiàn)凋亡細(xì)胞的出現(xiàn)，球囊中同樣沒(méi)有發(fā)現(xiàn)凋亡細(xì)胞；順鉑組在耳蝸組織基底膜、血管紋和螺旋側(cè)韌帶上出現(xiàn)較多的凋亡細(xì)胞，球囊中散在出現(xiàn)了凋亡細(xì)胞；蛋氨酸+順鉑組在耳蝸組織基底膜、血管紋和螺旋側(cè)韌帶上局部出現(xiàn)散在的凋亡細(xì)胞，但凋亡細(xì)胞的數(shù)量要明顯少于順鉑組，球囊則沒(méi)有發(fā)現(xiàn)明顯的凋亡細(xì)胞。 7Cx26和Cx30免疫熒光組織化學(xué)染色結(jié)果：對(duì)照組耳蝸組織切片中，耳蝸組織基底膜、血管紋和螺旋側(cè)韌帶上存在大量的Cx26和Cx30蛋白，球囊中同樣存在大量的Cx26和Cx30蛋白；順鉑組耳蝸組織基底膜、血管紋、螺旋側(cè)韌帶以及球囊上Cx26和Cx30蛋白出現(xiàn)了明顯的減少；蛋氨酸+順鉑組耳蝸組織和球囊中的Cx26和Cx30蛋白要多于順鉑組，但較對(duì)照組還是出現(xiàn)了一定程度的下降。 8Cx26和Cx30western blot檢測(cè)結(jié)果：順鉑組中Cx26和Cx30的表達(dá)要明顯弱于對(duì)照組和蛋氨酸+順鉑組，即兩種蛋白在順鉑組中出現(xiàn)了明顯的下降，而對(duì)照組和蛋氨酸+順鉑組相比，Cx26和Cx30的表達(dá)沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論： 1順鉑可以導(dǎo)致聽(tīng)覺(jué)功能和前庭功能的損傷，并且形態(tài)學(xué)中出現(xiàn)與之相對(duì)應(yīng)的毛細(xì)胞的損傷和破壞，蛋氨酸對(duì)上述功能學(xué)和形態(tài)學(xué)的破壞具有一定的保護(hù)作用。 2順鉑通過(guò)ROS和細(xì)胞凋亡導(dǎo)致耳毒性和前庭毒性的出現(xiàn)，而蛋氨酸在ROS和細(xì)胞凋亡水平上對(duì)其具有一定的保護(hù)作用。 3連接蛋白Cx26和Cx30可能參與了順鉑內(nèi)耳毒性的發(fā)病機(jī)制，而蛋氨酸能夠阻止Cx26和Cx30在順鉑應(yīng)用過(guò)程中的下降。
【關(guān)鍵詞】：順鉑 內(nèi)耳毒性 氧化應(yīng)激 凋亡 連接蛋白26 連接蛋白30 蛋氨酸
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R764.3
【目錄】：

• 摘要4-8
• ABSTRACT8-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-19
• 結(jié)果19-23
• 附圖23-40
• 附表40-45
• 討論45-49
• 結(jié)論49
• 參考文獻(xiàn)49-53
• 綜述 藥物性耳聾及防治措施的研究進(jìn)展53-62
• 參考文獻(xiàn)57-62
• 致謝62-63
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷63

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 張青松;葛圣雷;謝鼎華;朱綱華;;腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子和神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)順鉑誘導(dǎo)的內(nèi)耳毒性的保護(hù)作用[J];聽(tīng)力學(xué)及言語(yǔ)疾病雜志;2006年02期

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本文編號(hào)：1117310