發(fā)布時(shí)間：2017-10-30 10:36

  本文關(guān)鍵詞：皇家外科學(xué)院大鼠視網(wǎng)膜色素變性發(fā)病過(guò)程中周期素依賴性蛋白激酶5與細(xì)胞凋亡的關(guān)系

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【摘要】：目的觀察周期素依賴性蛋白激酶5(Cdk5)和p25在不同病程皇家外科學(xué)院（RCS）大鼠視網(wǎng)膜色素變性（RP）模型視網(wǎng)膜中的表達(dá)及與細(xì)胞凋亡的關(guān)系，探討Cdk5/p25介導(dǎo)的光感受器細(xì)胞凋亡在RP的發(fā)病過(guò)程中的作用。 方法取RCS RP大鼠（RCS大鼠）及正常對(duì)照RCS-rdy+大鼠17、25、35、60日齡組視網(wǎng)膜，光學(xué)顯微鏡下觀察視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)，測(cè)量視網(wǎng)膜外核層厚度；利用免疫組織化學(xué)染色法觀察各日齡組大鼠視網(wǎng)膜中Cdk5、p25和cleave-caspase3的表達(dá)及變化；采用Western blot法測(cè)定視網(wǎng)膜中cleave-caspase3的蛋白質(zhì)表達(dá)水平；原位末端標(biāo)記（TUNEL）法檢測(cè)視網(wǎng)膜中凋亡發(fā)生的情況，并對(duì)凋亡細(xì)胞平均吸光度[A，舊稱光密度（OD）]值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。 結(jié)果隨著出生日齡的增加，RCS大鼠視網(wǎng)膜厚度較正常對(duì)照組RCS-rdy+相應(yīng)日齡組大鼠視網(wǎng)膜厚度變薄，主要表現(xiàn)為視網(wǎng)膜視桿、視錐細(xì)胞層和外核層明顯變薄。在RCS大鼠17、25、35日齡組，Cdk5，p25和cleave-caspase3在視網(wǎng)膜中的表達(dá)呈現(xiàn)為逐漸增強(qiáng)的趨勢(shì)，60日齡組表達(dá)下降；對(duì)照組RCS-rdy+大鼠視網(wǎng)膜中表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Western blot法檢測(cè)結(jié)果顯示，隨著出生日齡的增加，RCS大鼠視網(wǎng)膜cleave-caspase3的表達(dá)明顯增加，以35日齡組增加最為明顯，而RCS-rdy+大鼠視網(wǎng)膜cleave-caspase3的表達(dá)沒有明顯的變化。TUNEL標(biāo)記法檢測(cè)結(jié)果顯示，各日齡組視網(wǎng)膜中凋亡細(xì)胞主要出現(xiàn)在視網(wǎng)膜外核層中，，在RCS大鼠17、25、35日齡組，各組凋亡細(xì)胞呈逐漸增多的趨勢(shì)，60日齡組凋亡細(xì)胞顯著下降；RCS-rdy+各日齡組凋亡細(xì)胞沒有明顯的變化。多變量偏相關(guān)分析結(jié)果顯示，Cdk5表達(dá)與p25表達(dá)、Cdk5表達(dá)與cleave-caspase3表達(dá)、Cdk5表達(dá)與凋亡細(xì)胞表達(dá)、p25表達(dá)與cleave-caspase3表達(dá)、p25表達(dá)與凋亡細(xì)胞表達(dá)、cleave-caspase3表達(dá)與凋亡細(xì)胞表達(dá)的偏相關(guān)系數(shù)分別為0.949、0.808、0.959、0.887、0.979、0.852，p值為0.000，兩兩變量之間均顯著相關(guān)。 結(jié)論17、25、35日齡RCS大鼠，隨著出生日齡的增加，其視網(wǎng)膜凋亡細(xì)胞逐漸增多，而Cdk5、p25和cleave-caspase3的表達(dá)逐漸增強(qiáng)。RCS大鼠視網(wǎng)膜中凋亡細(xì)胞變化趨勢(shì)與Cdk5、p25和cleave-caspase3的表達(dá)水平基本一致，提示RCS大鼠視網(wǎng)膜中光感受器細(xì)胞的凋亡與Cdk5、p25的表達(dá)水平升高有關(guān)，Cdk5可能參與了RCS大鼠RP的發(fā)生與發(fā)展。
【關(guān)鍵詞】：視網(wǎng)膜炎 色素性/病理生理學(xué) 細(xì)胞周期蛋白依賴激酶5 細(xì)胞凋亡 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R774.13
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-12
• 前言12-20
• 1.視網(wǎng)膜色素變性12-13
• 2.細(xì)胞周期蛋白依賴激酶 5（Cdk5）13-16
• 3.Caspase 家族16-18
• 4.RCS 大鼠18
• 5.當(dāng)前研究的目的18-20
• 材料和方法20-31
• 1.材料20-24
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物20
• 1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組20
• 1.3 主要試劑及儀器20-24
• 2.研究方法24-31
• 2.1 組織蠟塊的制作及視網(wǎng)膜蛋白的提取24-25
• 2.2 HE 染色25-26
• 2.3 免疫組織化學(xué)染色實(shí)驗(yàn)26-27
• 2.4 TUNEL 檢測(cè)27-28
• 2.5 蛋白免疫印跡法（Western Blot）28-30
• 2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法30-31
• 結(jié)果31-39
• 1 實(shí)驗(yàn)組 RCS 大鼠及對(duì)照組 RCS-rdy+大鼠視網(wǎng)膜組織石蠟切片 HE 染色31-32
• 2.免疫組織化學(xué)染色32-36
• 3 TUNEL 檢測(cè) RCS 大鼠及對(duì)照組 RCS-rdy+大鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡情況36-38
• 4.Cdk5、p25、cleave-caspase3、TUNEL 表達(dá)相關(guān)分析38
• 5 Western blot 法檢測(cè) cleave-caspase3 在 RCS 大鼠及 RCS-rdy+大鼠日天齡組視網(wǎng)膜中的表達(dá)38-39
• 討論39-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-52
• 文獻(xiàn)綜述52-63
• 綜述參考文獻(xiàn)59-63
• 致謝63
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文63

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本文編號(hào)：1117306