本文關(guān)鍵詞：Nods樣模式識(shí)別受體在變應(yīng)性鼻炎患者鼻黏膜中的表達(dá)及意義

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【摘要】：背景 變應(yīng)性鼻炎(allergic rhinitis, AR)是一種發(fā)病廣泛、呈全球蔓延的鼻腔過敏性疾病,據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道發(fā)病率在10-20%之間,影響全球約30%成人和40%的兒童。它嚴(yán)重困擾著人們生活、學(xué)習(xí)和工作。其發(fā)病涉及環(huán)境及遺傳兩個(gè)方面,目前治療主要為藥物治療為主。ARIA:將其定義為一種難于治愈但可以長期控制的疾病。因而有必要闡明發(fā)病機(jī)制,探尋新的治療措施。其中感染因素對(duì)變態(tài)反應(yīng)的影響存在爭論。主要體現(xiàn)在“衛(wèi)生假說”提出的早期感染保護(hù)論及感染抑制變態(tài)反應(yīng)。如Aaby[2]等報(bào)道了在法國兒童中,嬰幼兒時(shí)期接種分枝桿菌能夠阻止變態(tài)反應(yīng)的發(fā)生,對(duì)和感染加重變態(tài)反應(yīng)這兩個(gè)方面。因此感染的影響成為該疾病的研究方向之一。 微生物刺激鼻黏膜引起機(jī)體啟動(dòng)天然免疫,第一步即識(shí)別,主要通過病原體本身的病原相關(guān)分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMPs)與黏膜細(xì)胞模式識(shí)別受體(Pattern Recognition Receptor, PRR)來實(shí)現(xiàn),PRR是存在于細(xì)胞的種類繁多的受體蛋白家族,他們可以識(shí)別病原微生物(細(xì)菌、病毒等)標(biāo)記或來自宿主本身的危險(xiǎn)信號(hào),進(jìn)而觸發(fā)免疫應(yīng)答反應(yīng)。研究表明,PRR參與了包括變態(tài)反應(yīng)、自身免疫疾病及腫瘤等多種疾病的發(fā)病。PRR中研究較多的是Toll樣受體,分布在細(xì)胞表面和特異的細(xì)胞器,如內(nèi)吞型溶酶體[3],主要識(shí)別的是胞外微生物,其在識(shí)別細(xì)胞表面的致敏原進(jìn)而在過敏反應(yīng)中發(fā)揮重要作用,在這一領(lǐng)域已有較多研究。但一些微生物可以逃避細(xì)胞膜PRR,進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。如何識(shí)別此類病原體及胞內(nèi)菌,引起研究者的不斷探索。后來發(fā)現(xiàn)Nod樣模式受體(Nod like receptors, NLRs)具有這種功能。近年來,這種新近發(fā)現(xiàn)但“古老,,的模式受體在包括過敏反應(yīng)在內(nèi)的上呼吸道炎癥反應(yīng)中的作用正受到重視。NLRs研究以Nod1、Nod2及Nalp3為主,對(duì)于Nod樣受體家族在變應(yīng)性鼻炎方面的作用目前文獻(xiàn)報(bào)道較少。 NLRs可識(shí)別細(xì)胞質(zhì)中的微生物成分。Nodl通過meso-DAP識(shí)別微小結(jié)構(gòu)二肽,meso—DAP(二氨基庚二酸)是多數(shù)革蘭氏陰性菌和一些革蘭氏陽性菌的特征性成分。Nod2主要識(shí)別微小結(jié)構(gòu)胞壁酰二肽(muramyldipeptide, MDP),是一種存在于所有革蘭氏陽性和陰性菌胞壁內(nèi)具有生物活性的最小肽聚糖模體。Nod1、Nod2識(shí)別各自配體后,激活Rip2(絲氨酸、蘇氨酸激酶Rip2),進(jìn)而激活促細(xì)胞分裂劑激活性蛋白激酶(MAPK)和核因子(NF-kappaB),再進(jìn)而促使前IL-1β的合成；Nalp3屬于PYD亞家族分子,它能夠識(shí)別細(xì)菌RNA、尿酸結(jié)晶物、ATP和某些細(xì)菌毒素.氫氧化鋁(白礬)等。而Nalp1b和Cryopyrin/Nalp3(又名NLRP3)識(shí)別配體后,可促進(jìn)炎癥小(inflammasomes)的合成,進(jìn)而激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1,也稱為IL-1p轉(zhuǎn)換酶.),產(chǎn)生IL-1p的成熟分子或可促進(jìn)細(xì)胞凋亡。 研究發(fā)現(xiàn)[5],國內(nèi)變應(yīng)性鼻炎主要的室內(nèi)變應(yīng)原是屋塵螨。機(jī)體是如何識(shí)別屋塵螨的變應(yīng)原和相關(guān)成分?模式識(shí)別受體TLR發(fā)揮了重要的作用。如Der p1主要通過TLR2識(shí)別,LPS通過TLR4識(shí)別,與變應(yīng)性鼻炎有關(guān)。但是TLR僅僅是分布于胞膜和胞內(nèi)內(nèi)涵體的受體,對(duì)于其他的病原體,如可逃避胞膜進(jìn)入胞質(zhì)的成分,TLR則不能識(shí)別,而NLR卻可以識(shí)別。而屋塵螨的結(jié)構(gòu)中恰恰存在這樣的成分,主要在胞內(nèi)識(shí)別。所以,研究NLR在屋塵螨引起的天然免疫的發(fā)病作用,顯得十分關(guān)鍵。 Jacquet等[6]認(rèn)為,HDM中可以檢測出微生物組分,包括脂多糖LPS和b-葡聚糖類,這些成分似乎和HDM真正的抗原成分一樣重要,通過模式識(shí)別受體的激活,引起Th2的極化。但是僅有佐劑成分能否激活天然免疫,卻需要進(jìn)一步研究。他著重說明強(qiáng)調(diào),屋塵螨骨架蛋白包含殼多糖,并可以被表面模式識(shí)別受體TLR-2識(shí)別,產(chǎn)生促炎和前炎癥介質(zhì)。而另外的文獻(xiàn)說明,佐劑殼聚糖(基于殼多糖的聚合糖),和二氧化硅、石棉,氫氧化鋁一樣,都能激活NLRP3(即NALP3),并且可以通過抗原提呈細(xì)胞進(jìn)行信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。說明模式識(shí)別受體NALP3在屋塵螨變應(yīng)原信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)方面,可起到關(guān)鍵作用。殼多糖在屋塵螨引起的天然免疫中可發(fā)揮一定作用,但其中的機(jī)制需要進(jìn)一步研究。 Hysi等[9]通過nod1基因多態(tài)性研究發(fā)現(xiàn),Card4的變異和哮喘增高的易感性有關(guān)。細(xì)胞內(nèi)模式識(shí)別受體nod1識(shí)別細(xì)菌特異性產(chǎn)物,影響了兒童哮喘的發(fā)病率。哮喘與變應(yīng)性鼻炎“一個(gè)氣道,一種疾病”,故nod1基因多態(tài)性可能與變應(yīng)性鼻炎發(fā)病有關(guān)。 因此,NLR對(duì)機(jī)體免疫功能有一定影響,對(duì)變應(yīng)性鼻炎的發(fā)病有一定作用,可能體現(xiàn)在：1.感知微生物,介導(dǎo)炎癥反應(yīng)。2.激活后可以引起Th2細(xì)胞因子的釋放,從而加重或維持變應(yīng)性鼻炎炎癥狀態(tài)。3.感知佐劑,增強(qiáng)免疫應(yīng)答。4.其基因多態(tài)性可能與變應(yīng)性鼻炎發(fā)病有關(guān)。 本研究擬深入探討NLR受體(Nod1、Nod2、Nalp3)在變應(yīng)性鼻炎發(fā)病中的作用,現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下。 目的 探討Nods(核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域,Nod Like receptors)樣模式識(shí)別受體(PRR)在變應(yīng)性鼻炎患者下鼻甲黏膜組織中的表達(dá)及作用,并研究變應(yīng)性鼻炎下鼻甲黏膜IL-4、IL-6、IL-10、IFN-r的表達(dá)情況,以鼻中隔偏曲患者下鼻甲黏膜、鼻息肉做對(duì)照。提取變應(yīng)性鼻炎外周血單個(gè)核細(xì)胞,比較變應(yīng)性鼻炎患者脫敏治療6個(gè)月前后單個(gè)核細(xì)胞Nod1表達(dá)的變化,及脫敏治療前后血清、鼻分泌物中IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ變化情況,探索Nodl表達(dá)變化和細(xì)胞因子變化之間的關(guān)系。 方法 2011年9月至2012年9月在南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院門診變應(yīng)性鼻炎(AR)患者,根據(jù)AIRA2010(依據(jù)臨床表現(xiàn)、鼻腔檢查情況、皮膚點(diǎn)刺實(shí)驗(yàn)結(jié)果或血清變應(yīng)原特異性IgE檢測)入組；對(duì)照組1：期間因鼻中隔偏曲行單純鼻中隔偏曲矯正術(shù)患者；對(duì)照組2：慢性鼻竇炎伴鼻息肉(CRSwNP, chronic rhinosinusitis with nasal polyps)住院患者(根據(jù)EPOS2007指南標(biāo)準(zhǔn)納入研究組)。本項(xiàng)研究得到了南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn),且征得所有研究對(duì)象知情簽字同意。 分別采用real-time RT-PCR、western-blot及免疫組織化學(xué)檢測Nod1、od2、 NALP3mRNA及蛋白在變應(yīng)性鼻炎患者下鼻甲黏膜(患者下鼻甲黏膜,以下簡稱黏膜)表達(dá),以鼻中隔偏曲患者代償側(cè)下鼻甲黏膜、鼻息肉粘膜做對(duì)照。 ELISA測變應(yīng)性鼻炎黏膜(組織勻漿液)IL-4、L-6、IL-10、 IFN-γ的表達(dá)量,以鼻中隔偏曲下鼻甲黏膜,鼻息肉組織做對(duì)照。 western-blot測變應(yīng)性鼻炎患者舌下特異性免疫脫敏治療6個(gè)月前后外周血單個(gè)核細(xì)胞Nod1的表達(dá)變化。 ELISA測變應(yīng)性鼻炎患者脫敏治療6個(gè)月前后血清、鼻腔分泌物IL-4、IL-6、 IL-10、IFN-γ表達(dá)變化。 結(jié)果 1.Real-Time RT-PCR顯示：變應(yīng)性鼻炎黏膜組織Nod1mRNA表達(dá)較正常對(duì)照下鼻甲粘膜、鼻息肉均低(P=0.31, P=0.00),NALP3mRNA表達(dá)較正常對(duì)照下鼻甲粘膜、鼻息肉均高(P=0.01,P=0.01),Nod2mRNA表達(dá)與正常對(duì)照下鼻甲粘膜、鼻息肉比較無明顯差別,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.06,P=0.10)。 2.western-blot結(jié)果提示：變應(yīng)性鼻炎黏膜組織Nod1表達(dá)低于正常對(duì)照下鼻甲粘膜、鼻息肉組(均為P=0.00),NALP3高于正常對(duì)照下鼻甲粘膜、鼻息肉(均為P=0.00), Nod2三組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.52,P=0.29)。 3.免疫組織化學(xué)表明,三種模式受體在三組中均有表達(dá),主要表達(dá)于上皮細(xì)胞、腺體上皮、炎性細(xì)胞(如漿細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞),變應(yīng)性鼻炎黏膜組織Nod1表達(dá)較正常對(duì)照下鼻甲粘膜、鼻息肉均低(P=0.01,P=0.00),NALP3表達(dá)較較正常對(duì)照下鼻甲粘膜、鼻息肉均高(P=0.01, P=0.01), Nod2蛋白表達(dá)三組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.14)。 4.脫敏治療前后,變應(yīng)性鼻炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞均能檢測出Nodl表達(dá),治療前(相對(duì)量1.06±0.13,)較正常對(duì)照組(0.29±0.05)相比,表達(dá)升高(P=0.00),治療后表達(dá)量(0.34±0.15)降低,前后差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00)。 5.鼻粘膜IL-4.IL-6與Nodl呈正相關(guān),分別為r=0.751,p=0.001, r=0.826,p=0.000,相關(guān)密切。變應(yīng)性鼻炎黏膜IL-4、IL-6、IL-10與鼻中隔偏曲組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(單位：pg/mg,15.22±1.17vs13.02±4.60,254.67±27.3vs206.00±62.56,20.25±2.75vs24.11±3.81,P=0.53,0.27,0.20),但均低于鼻息肉患者組(25.80±2.20,1133.09±312.08,51.10±17.22,P=0.00,0.00,0.01)。IFN-γ低于鼻中隔偏曲組(20.50±2.00vs28.19±7.63, P=0.04),與鼻息肉組相比(19.89±5.01,P=0.86),無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 6.舌下脫敏治療6月前后變應(yīng)鼻炎血清細(xì)胞因子濃度分別：治療前IL-6(8.25±0.93) pg/ml,治療后(6.39±0.71) pg/ml,降低,P=0.00；治療前IL-10(2.66±0.48) pg/ml,治療后(4.78±0.44) pg/ml,升高,P=0.00；治療前IFN-y (2.90±0.68)pg/ml,治療后(9.82±0.85) pg/ml,升高(P=0.00)。鼻腔分泌物IL-4降低(P=0.01),IL-6、IL-10、IFN-γ兩組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.33,P=0.19,P=0.18)。 7.舌下脫敏治療后,外周血單個(gè)核細(xì)胞Nodl表達(dá)改變與外周血IL-10的改變呈負(fù)相關(guān),r=-0.884,p=0.002,相關(guān)密切。Nodl表達(dá)改變與IL-6的改變呈正相關(guān),r=0.574,p=0.106. 結(jié)論 1. Nod1、Nod2及NALP3在三組組織中均有表達(dá),變應(yīng)性鼻炎組Nodl表達(dá)低于正常對(duì)照組、鼻息肉組,NALP3高于正常對(duì)照組、鼻息肉組。說明Nod1、NALP3有可能參與變應(yīng)性鼻炎的發(fā)病。 2.變應(yīng)性鼻炎外周血單個(gè)核細(xì)胞存在Nod1表達(dá),且舌下脫敏治療后,外周血單個(gè)核細(xì)胞Nod1表達(dá)降低,其表達(dá)降低與外周血IL-10的改變呈負(fù)相關(guān),Nodl可能通過調(diào)控IL-10變化,參與舌下脫敏治療。
【關(guān)鍵詞】：Nods 樣模式識(shí)別受體 變應(yīng)性鼻炎 變應(yīng)原舌下脫敏
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R765.21
【目錄】：

• 摘要3-8
• ABSTRACT8-16
• 前言16-23
• 第一部分 變應(yīng)性鼻炎患者鼻粘膜NLRS表達(dá)研究23-45
• 第一節(jié) 變應(yīng)性鼻炎患者鼻粘膜NLRs基因表達(dá)研究23-30
• 第二節(jié) 變應(yīng)性鼻炎患者鼻粘膜NLRs蛋白表達(dá)研究30-38
• 第三節(jié) 變應(yīng)性鼻炎患者鼻粘膜NLRs免疫組織化學(xué)研究38-45
• 第二部分 變應(yīng)性鼻炎患者鼻黏膜TH1/TH2細(xì)胞因子檢測及與NLR關(guān)系45-51
• 1. 材料和方法45-48
• 2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果48-51
• 第三部分 脫敏治療前后變應(yīng)性鼻炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞的NOD1改變及與血清、分泌物TH1/TH2細(xì)胞因子的改變關(guān)系研究51-59
• 1. 材料和方法51-52
• 2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果52-59
• 討論59-66
• 全文結(jié)論66-67
• 參考文獻(xiàn)67-74
• 綜述74-85
• 英文縮寫85-86
• 倫理審查同意書86-87
• 在讀期間發(fā)表論文87-88
• 致謝88-89

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5 趙文明;中醫(yī)治療鼻鼽（變應(yīng)性鼻炎）的臨床研究及北京城區(qū)670例變應(yīng)性鼻炎變應(yīng)原分析[D];中國中醫(yī)科學(xué)院;2011年

6 孟粹達(dá);免疫球蛋白游離輕鏈在變應(yīng)性鼻炎及非變應(yīng)性鼻炎中表達(dá)及其意義[D];吉林大學(xué);2012年

7 唐新業(yè);金黃色葡萄球菌腸毒素B在變應(yīng)性鼻炎發(fā)病機(jī)制中作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

8 謝燕清;鼻炎的炎癥特征及其與下氣道炎癥及氣道高反應(yīng)性的關(guān)系[D];廣州醫(yī)學(xué)院;2011年

9 呂云霞;變應(yīng)性鼻炎的血清蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];中南大學(xué);2012年

10 張怡;主動(dòng)吸煙對(duì)變應(yīng)性鼻炎患者的影響[D];武漢大學(xué);2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 沙驥超;兒童變應(yīng)性鼻炎臨床特點(diǎn)分析及相關(guān)問題調(diào)查[D];吉林大學(xué);2011年

2 滑[

本文編號(hào)：1114106