本文關(guān)鍵詞：羊膜淚道修復(fù)支架對兔淚小管損傷后愈合過程的影響

  更多相關(guān)文章： 兔淚小管 CD31 a-SMA Muc5AC 免疫組織化學 免疫熒光

【摘要】：目的: 觀察羊膜淚道修復(fù)支架對兔淚小管損傷后愈合過程的影響，以及通過檢測炎癥細胞、CD31、a-SMA及Muc5AC在兔淚小管組織中的表達變化情況，并與傳統(tǒng)硅膠淚道支架對比，為羊膜淚道修復(fù)支架在淚道阻塞性疾病尤其是淚小管阻塞疾病的臨床應(yīng)用提供實驗理論依據(jù)。 方法： 選取成年健康新西蘭兔30只，雌雄兼用，重1.8-2.0kg,無結(jié)膜炎、淚囊炎、眼瞼異常、眼球異常等眼部疾患及頭面部異常，淚小點位置正常，淚道沖洗通暢。應(yīng)用硬化劑（葡萄糖磷霉素鈉混合溶液）注入兔淚小管，其中3只作為空白組，剩余27只建立兔淚小管損傷模型，然后隨機分為三組，羊膜組和硅膠組分別進行羊膜淚道修復(fù)支架、淚道硅膠支架植入術(shù)，造模組造模后不做任何處理。分別于術(shù)后第1、2、4w三個不同時間點處死三組實驗動物，，每組每次取材3只，解剖分離兔雙側(cè)淚小管，冰凍保存切片，并行常規(guī)HE染色觀察兔淚小管組織的炎性反應(yīng)程度以及粘膜上皮細胞修復(fù)情況，用免疫組織化學染色和免疫熒光染色檢測兔淚小管組織中的CD31和a-SMA的含量，間接反映淚小管組織的纖維化程度及炎性血管增生狀態(tài)，同時檢測兔淚小管組織中Muc5AC粘蛋白表達情況，分析淚小管粘膜的組織學特點。 結(jié)果： 1、應(yīng)用磷霉素鈉葡萄糖混合液硬化劑能夠成功制作兔淚小管損傷模型： HE染色結(jié)果顯示，正常兔淚小管粘膜表現(xiàn)為管壁光滑，上皮層為復(fù)層柱狀上皮，排列整齊，上皮下基質(zhì)層結(jié)構(gòu)疏松，可見少量正常血管，無炎性細胞浸潤，而造模后淚小管上皮層數(shù)明顯減少、變薄，上皮層結(jié)構(gòu)紊亂及出現(xiàn)缺損區(qū)，炎性細胞大量浸潤，免疫組織化學染色和免疫熒光染色結(jié)果顯示，a-SMA及CD31表達明顯上調(diào)。 2、造模后三組兔淚小管組織均可見上皮層細胞數(shù)量減少，結(jié)構(gòu)紊亂，炎癥細胞浸潤，但羊膜組各觀察時間點，炎癥細胞數(shù)量明顯少于造模組及硅膠組，羊膜組術(shù)后第28天，淚小管上皮層數(shù)及結(jié)構(gòu)與正常淚道上皮相當。 3、免疫組織化學染色結(jié)果顯示，在正常兔淚小管組織中CD31表達陽性，而a-SMA表達陰性，造模后三組各時間點兔淚小管組織中CD31與a-SMA的表達逐漸增加，因處理方法不同，兩者在兔淚小管組織中的表達量發(fā)生變化。羊膜組和硅膠組中a-SMA和CD31的表達量少于造模組，羊膜組的表達又少于硅膠組。 4、免疫熒光染色結(jié)果顯示，兔淚小管組織中粘蛋白Muc5AC表達陰性，即兔淚小管上皮中缺乏杯狀細胞。 結(jié)論： 磷霉素鈉葡萄糖混合液硬化劑能夠成功制作兔淚小管的損傷模型；羊膜作為淚道生物性的修復(fù)支架材料，使受損兔淚小管的基質(zhì)纖維化水平明顯被抑制，同時具有減輕炎癥及抑制炎癥性血管形成的作用，效果優(yōu)于硅膠淚道支架，用于重建修復(fù)受損淚道粘膜及抑制淚道瘢痕性狹窄具有較大的潛力。兔淚小管作為結(jié)膜組織的延續(xù)，組織學上具有差異，即淚小管中無杯狀細胞存在。
【關(guān)鍵詞】：兔淚小管 CD31 a-SMA Muc5AC 免疫組織化學 免疫熒光
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R777.22
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮略詞表9-10
• 第1章 引言10-12
• 第2章 材料與方法12-18
• 2.1 材料12-14
• 2.1.1 研究對象12
• 2.1.2 實驗耗材12
• 2.1.3 主要實驗儀器設(shè)備及應(yīng)用軟件12-13
• 2.1.4 主要抗體13
• 2.1.5 主要溶液配置13-14
• 2.2 方法14-18
• 2.2.1 兔淚小管損傷模型制備14
• 2.2.2 操作方法及分組14
• 2.2.3 標本的采集及制備14-15
• 2.2.4 實驗方法15-17
• 2.2.5 結(jié)果判定標準17
• 2.2.6 統(tǒng)計學分析17-18
• 第3章 結(jié)果18-26
• 3.1 淚小管 HE 染色情況18
• 3.2 CD31 在三組中的表達情況18-19
• 3.3 a-SMA 在三組中的表達情況19
• 3.4 粘蛋白 Muc5AC 在淚小管中的表達19
• 3.5 CD31 和 a-SMA 在三組中各時間點的比較19-22
• 3.6 附圖22-26
• 第4章 討論26-33
• 4.1 淚小管損傷動物模型的制作28
• 4.2 淚道標記物的選擇28-30
• 4.3 羊膜在淚道阻塞中的應(yīng)用30-33
• 第5章 課題結(jié)論與展望33-34
• 致謝34-35
• 參考文獻35-39
• 攻讀學位期間的研究成果39-40
• 綜述40-45
• 參考文獻44-45

【參考文獻】

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本文編號：1102609