本文關鍵詞：氧化應激狀態(tài)下人小梁網細胞中miRNA199b-5p對TGF-β2作用機制的研究

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【摘要】：目的：青光眼的眼壓增高與小梁網的氧化變性、流出阻力增加有關。原發(fā)性開角型青光眼(Primary Open Angle Glaucoma,POAG)患者中細胞外基質(Extracellular Matrix, ECM)的異常沉積可導致小梁網流出阻力增加。本實驗主要研究在氧化應激狀態(tài)下人眼小梁網細胞(Human Trabecular Meshwork Cells, HTMC)中細胞外基質的表達,以及miRNA-199b-5p對轉化生長因子β2(Transforming Growth Factor-β2, TGF-β2)的作用。 方法：在人眼小梁網細胞中,不同濃度過氧化氫(H202)刺激HTMC后,利用MTT實驗檢測細胞生長活性的變化。300uM H2O2刺激HTMC1.5h, real-timePCR和免疫組化分別檢測細胞中TGF-β2和纖維連接蛋白(Fibronectin, FN)等細胞外基質基因和蛋白的表達�；蛐酒瑱z測在氧化應激狀態(tài)下miRNA-199b-5p的表達,并用real-time PCR驗證miRNA-199b-5p的表達。參考生物信息學miRNA-199b-5p靶定TGF-β2。 miRNA-199b-5p過表達檢測其對HTMC功能的影響并檢測miRNA-199b-5p對TGF-β2的作用。 結果：在人眼小梁網細胞中,H202可抑制細胞生長活性,H202可以促進TGF-β2和細胞外基質FN的表達：H202刺激HTMC后,TGF-β2表達在1h、2h、4h、8h、12h、24h較對照組增加,相對表達量分別為1.04±0.33,5.04±1.25,8.54±2.48,10.88±2.25,11.83±2.15,18.72±3.09,25.38±5.18,差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01)；FN表達在1h、2h、4h、8h、12h、24h較對照組增加,相對表達量分別為1.00±0.17,2.82±0.30,4.56±0.35,5.22±1.86,6.65±2.18,11.06±7.57,17.10±4.12,差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01)�；蛐酒蛂eal-time PCR檢測顯示在氧化應激狀態(tài)下miRNA-199b-5p表達下調,H202刺激HTMC后,miRNA199b-5p于1h、2h、4h、8h、12h、24h表達較對照組下調,相對表達量分別為1.00±0.16,0.50±0.17,0.57±0.39,0.41±0.14,0.45±0.09,0.38±0.12,0.17±0.04,差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01)。在HTMC中過表達miRNA-199b-5p可抑制細胞的遷移能力,同時過表達miRNA-199b-5p可導致TGF-β2和FN的表達下調。在轉染miRNA199b-5p mimics24h, HTMC中TGF-β2的相對表達量對照組為2.544±0.38,處理組為1.18±0.29,總體差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)；FN的相對表達量對照組為2.54+0.29,處理組為1.04±0.08,總體差異有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01)。 結論：HTMC在氧化應激狀態(tài)下TGF-β2表達增多,而miRNA-199b-5p表達降低。miRNA-199b-5p可以靶定TGF-β2的3'-UTR,對TGF-β2起負調控作用,可以推斷氧化應激促進TGF-β2表達增加,與miRNA-199b-5p表達下調有關。同時氧化應激可促進HTMC細胞外基質FN分泌增加,可能與miRNA-199b-5p表達下調有一定關系。
【關鍵詞】：氧化應激 人小梁網細胞 miRNA199b-5p TGF-β2 青光眼
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R775
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-11
• 前言11-15
• 研究現狀、成果11-13
• 研究目的、方法13-15
• 一、氧化應激對細胞功能的影響15-29
• 1.1 材料、方法15-23
• 1.1.1 實驗材料15-16
• 1.1.2 實驗方法16-23
• 1.2 結果23-27
• 1.2.1 MTT檢測H_2O_2對HTMC細胞活性的影響23
• 1.2.2 氧化應激狀態(tài)下TGF-β 2和FN在HTMC中的表達23-26
• 1.2.3 氧化應激狀態(tài)下miRNA199b-5p在HTMC中的表達26-27
• 1.3 討論27-28
• 1.4 小結28-29
• 二、過表達miRNA199b-5p對HTMC的影響29-39
• 2.1 材料和方法29-34
• 2.1.1 實驗材料29
• 2.1.2 實驗方法29-34
• 2.2 結果34-37
• 2.2.1 過表達miRNA199b-Sp對HTMC功能的影響34-35
• 2.2.2 過表達miRNA199b-5p后HTMC中TGF-β 2和FN的表達35-37
• 2.3 討論37-38
• 2.4 小結38-39
• 結論39-40
• 不足之處及下一步研究方向40-41
• 參考文獻41-44
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明44-45
• 綜述 MiRNA在青光眼中的研究進展45-52
• 綜述參考文獻50-52
• 致謝52

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前1條

1 鐘麗春,李美玉;轉化生長因子β_1誘導培養(yǎng)的人眼小梁細胞產生彈性蛋白的實驗研究[J];中華眼科雜志;1999年05期

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本文編號：1090219