發(fā)布時(shí)間：2017-10-17 16:35

  本文關(guān)鍵詞：siRNA沉默HIF-1α對(duì)缺氧培養(yǎng)的人脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞EPO表達(dá)的影響

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【摘要】：目的：采用陽(yáng)離子脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法,以RNA干擾為手段,研究HIF-1α-siRNA對(duì)缺氧培養(yǎng)的人眼脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞(OCM-1)轉(zhuǎn)染前后缺氧條件下HIF-1α和EPO的表達(dá),初步探討HIF-1α在缺氧條件下對(duì)人眼脈絡(luò)膜黑色素瘤的調(diào)控作用。 方法：正常組OCM-1細(xì)胞采用含10%胎牛血清、1%雙抗(青-鏈霉素混合液)的DMEM高糖培養(yǎng)基培養(yǎng),將細(xì)胞置37℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),取處于對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)研究。缺氧組OCM-1細(xì)胞在原培養(yǎng)基中加入COCl2至濃度為100μmol/L用于模擬腫瘤內(nèi)部乏氧微環(huán)境。并將缺氧組細(xì)胞分為單純?nèi)毖踅M、干擾組、陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、脂質(zhì)體對(duì)照組；設(shè)計(jì)并合成siRNA(siRNA+陰性對(duì)照+陽(yáng)性對(duì)照),并在基因庫(kù)進(jìn)行Blast同源性分析。利用陽(yáng)離子脂質(zhì)體Lipofectamille2000Reagent為載體將合成的siRNA轉(zhuǎn)入脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞OCM-1內(nèi)。RT-PCR檢測(cè)OCM-1細(xì)胞HIF-1α及EPO在RNA水平上的表達(dá)情況,Western blot檢測(cè)HIF-1α及EPO蛋白表達(dá)情況。 結(jié)果：缺氧組各組之間相比,陽(yáng)性對(duì)照組β-actin mRNA表達(dá)下降(p＜0.01),證實(shí)轉(zhuǎn)染成功；單純?nèi)毖踅M與常氧組相比,HIF一1α mRNA表達(dá)無(wú)明顯差異(p＞0.05),蛋白表達(dá)顯著升高(p＜0.01),而EPO mRNA和蛋白的表達(dá)均顯著升高(p＜0.01)。干擾組HIF-1α禾EPO mRNA和蛋白表達(dá)均明顯下降(p＜0.01),陰性對(duì)照組與脂質(zhì)體對(duì)照組相比各檢測(cè)因素均無(wú)明影差別(p＞0.05)。 結(jié)論： 1.在缺氧狀態(tài)下OCM一1細(xì)胞HIF-1αm RNA表達(dá)無(wú)明顯變化,蛋白水平表達(dá)升高；EPO的mRNA和蛋白表達(dá)量均增加。 2.合成的HIF-1α-siRNA通過(guò)轉(zhuǎn)染OCM-1細(xì)胞后,HIF-1α mRNA和蛋白表達(dá)量均下調(diào)；EPO的mRNA和蛋白表達(dá)量也均下調(diào)。 3.EPO作為HIF-1α的下游靶基因,其表達(dá)HIF-1α調(diào)控。
【關(guān)鍵詞】：脈絡(luò)膜黑色素瘤 缺氧誘導(dǎo)因子-1α 促紅細(xì)胞生成素 小片段干擾RNA RNA干擾
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R739.7
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-8
• 引言8-10
• 第一章 材料與方法10-23
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器10-13
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料10-11
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器11-12
• 1.1.3 常用液體的配制與消毒12-13
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法13-22
• 1.2.1 OCM-1細(xì)胞的培養(yǎng)及傳代13-14
• 1.2.2 OCM-1細(xì)胞的轉(zhuǎn)染14-15
• 1.2.3 OCM-1細(xì)胞HIF-1α、EPO基因及其表達(dá)15-22
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析22-23
• 第二章 結(jié)果23-30
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果23
• 2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染結(jié)果23-24
• 2.3 RT-PCR結(jié)果24-26
• 2.3.1 HIF-1α mRNA表達(dá)結(jié)果分析24-25
• 2.3.2 EPO mRNA表達(dá)結(jié)果分析25-26
• 2.4 Western Blot結(jié)果26-30
• 2.4.1 HIF-1α蛋白表達(dá)結(jié)果分析27-28
• 2.4.2 EPO蛋白表達(dá)結(jié)果分析28-30
• 第三章 討論30-33
• 第四章 結(jié)論33-34
• 參考文獻(xiàn)34-36
• 綜述36-45
• 參考文獻(xiàn)42-45
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果45-46
• 附錄46-49
• 致謝49-50

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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本文編號(hào)：1049900