發(fā)布時間：2017-10-14 22:43

  本文關(guān)鍵詞：脫細(xì)胞晶狀體前囊膜為載體培養(yǎng)角膜緣干細(xì)胞的實驗研究

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【摘要】：目的：通過將增殖能力較強(qiáng)的青年期兔角膜緣干細(xì)胞(limbalstemcell,LSCs)[1]原代培養(yǎng)，擴(kuò)增后探索適宜的種植細(xì)胞密度。將其種植于同種異體晶狀體前囊膜上，探討晶狀體前囊膜為角膜緣干細(xì)胞培養(yǎng)載體潛在價值，為組織工程化角膜上皮載體選擇提供新的載體材料。 方法：（1）用酶消化法將增殖能力較強(qiáng)的青年兔角膜緣組織制備成細(xì)胞懸液培養(yǎng)，原代培養(yǎng)后將傳代細(xì)胞（2代），用含10%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)液將其制備成1.0×106、1.0×105、1.0×104個細(xì)胞/ml的細(xì)胞懸液。將其接種于48孔培養(yǎng)板，觀察在基礎(chǔ)培養(yǎng)條件一定的情況下傳代（2代）培養(yǎng)角膜緣干細(xì)胞的生長情況，，48h檢測其細(xì)胞貼壁率并記錄細(xì)胞融合時間；CCK-8法檢測增殖活性。（2）以適宜細(xì)胞密度將其種植于同種異體兔晶狀體前囊膜上，對照組無為無載體培養(yǎng)，DMEM:F12為基礎(chǔ)培養(yǎng)液，觀察在其上的生長情況，免疫熒光法檢測角膜緣細(xì)胞的△Np63、角蛋白K3表達(dá)，運用SPSS18.0統(tǒng)計軟件對所獲數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。 結(jié)果：（1）在基礎(chǔ)培養(yǎng)條件一定的情況下，以1.0×104個細(xì)胞/ml接種48h換液，懸浮細(xì)胞較多，可見少數(shù)細(xì)胞貼壁生長，細(xì)胞貼壁率低和融合成單層時間長，與其他兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.001）。以1.0×106和1.0×105個細(xì)胞/ml接種，48h貼壁細(xì)胞明顯增多。貼壁率分別為86.84±7.04和74.52±6.16；細(xì)胞融合成單層時間分別是6.02±0.52和7.06±0.46;兩組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。CCK-8法生長曲線顯示，以1.0×105個細(xì)胞/ml細(xì)胞密度接種，細(xì)胞有較強(qiáng)的增殖活性，細(xì)胞密度過高過低在有限的培養(yǎng)條件下都會對細(xì)胞增殖產(chǎn)生影響。（2）同種異體晶狀體前囊膜為載體，角膜緣干細(xì)胞可貼壁生長，細(xì)胞形態(tài)呈圓形、橢圓形和多邊形，細(xì)胞間連接緊密。約7天左右可形成細(xì)胞植片。免疫熒光染色△Np63大部分細(xì)胞呈陽性，角蛋白K3少量細(xì)胞表達(dá)；隨著培養(yǎng)時間的延長△Np63表達(dá)量下降，角蛋白K3表達(dá)量上升，與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。 結(jié)論：適宜的種植細(xì)胞密度有利于角膜緣干細(xì)胞生長特性的維持；角膜緣干細(xì)胞接種于晶狀體前囊膜上，細(xì)胞可以貼壁生長，可以形成類似于角膜上皮的結(jié)構(gòu)；同種異體種植，角膜緣干細(xì)胞可在其上生長，說明晶狀體前囊膜是一種極為冷淡的載體材料。
【關(guān)鍵詞】：脫細(xì)胞晶狀體前囊膜 載體 角膜緣干細(xì)胞 細(xì)胞培養(yǎng)
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R772.2
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 前言9-11
• 材料和方法11-16
• 結(jié)果16-19
• 討論19-23
• 結(jié)論23-24
• 附圖24-26
• 參考文獻(xiàn)26-29
• 綜述29-40
• 參考文獻(xiàn)35-40
• 致謝40-41
• 個人簡介41

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1033606