發(fā)布時間：2017-10-09 09:08

  本文關(guān)鍵詞：激活素A在大鼠PVN調(diào)控動脈血壓作用及其機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 激活素A 下丘腦室旁核 自發(fā)性高血壓 動脈血壓

【摘要】：激活素A(Activin A)屬于轉(zhuǎn)化生長因子β(transforming growth factor-beta,TGF-β)超家族的多功能細(xì)胞因子,在多種組織器官的分化、發(fā)育以及細(xì)胞的增殖、凋亡調(diào)控中發(fā)揮重要作用。卵泡抑素(Follistatin,FS)是Activin的結(jié)合蛋白,能與Activin發(fā)生特異結(jié)合進(jìn)而中和Activin的生物學(xué)效應(yīng)。下丘腦室旁核(hypothalamic paraventricular nucleus,PVN)不僅可以調(diào)節(jié)自主神經(jīng)功能,而且是神經(jīng)內(nèi)分泌活動的重要調(diào)節(jié)中樞,在血壓中樞調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。但是,Activin A能否在中樞神經(jīng)系統(tǒng)PVN調(diào)控動脈血壓,仍無相關(guān)報道。因此,本研究利用Wistar-Kyoto(WKY)及自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneous hypertensive rat,SHR),以及原代培養(yǎng)PVN神經(jīng)元,應(yīng)用RT-PCR、免疫組織化學(xué)染色、中樞核團(tuán)微量注射和ELISA等實(shí)驗(yàn)方法,探討Activin A在大鼠PVN調(diào)控動脈血壓作用以及在高血壓發(fā)病中的作用及其機(jī)制。本研究首先采用RT-PCR檢測Activin A及其受體、信號傳導(dǎo)蛋白Smads和FS在WKY和SHR大鼠PVN的表達(dá),結(jié)果顯示Activin A、Activin IIA型受體(activin type IIA receptor,Act RIIA)、IIB型受體(activin type IIB receptor,Act RIIB)、Smad2,3,4和FS m RNA在SHR大鼠PVN表達(dá)明顯高于WKY大鼠,免疫組織化學(xué)染色進(jìn)一步表明Activin A、Act R IIA及FS蛋白在SHR大鼠PVN表達(dá)也明顯高于WKY大鼠,提示Activin A可能以自分泌/旁分泌的方式參與調(diào)節(jié)PVN神經(jīng)元的功能,并且在WKY和SHR大鼠中存在表達(dá)量的差異。實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步采用大腦立體定位及中樞核團(tuán)微量注射法檢測了Activin A及FS在WKY及SHR大鼠PVN對動脈血壓的作用,結(jié)果顯示,PVN微量注射Activin A后,WKY及SHR大鼠動脈血壓均明顯升高,且SHR大鼠動脈血壓升高比WKY大鼠更明顯。實(shí)驗(yàn)同時檢測了FS在WKY及SHR大鼠PVN對動脈血壓的影響,結(jié)果顯示PVN微量注射FS后對WKY大鼠動脈血壓無明顯作用,而SHR大鼠PVN微量注射FS可導(dǎo)致動脈血壓明顯下降。最后,實(shí)驗(yàn)利用神經(jīng)元維持培養(yǎng)基體外原代培養(yǎng)WKY大鼠乳鼠PVN神經(jīng)元,Activin A處理12h后,ELISA法檢測PVN神經(jīng)元培養(yǎng)上清中Ang II及AVP水平,RT-PCR方法檢測PVN神經(jīng)元Act R及Smads、FS、血管緊張素II 1型受體(angiotensin II type 1 receptor,AT1)、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(angiotensin converting enzyme,ACE)、血管升壓素(arginine vasopressin,AVP)及AVP受體(arginine vasopressin recptor,AVPR)m RNA表達(dá)。結(jié)果顯示,Activin A可促進(jìn)PVN神經(jīng)元分泌Ang II及AVP,上調(diào)PVN神經(jīng)元ACE、AT1及AVPR m RNA表達(dá),同時也明顯促進(jìn)體外原代培養(yǎng)PVN神經(jīng)元Act RIIA、Smad3及FS m RNA表達(dá)。上述研究結(jié)果表明,Activin A及其受體、Smads信號傳導(dǎo)蛋白、FS在SHR大鼠PVN表達(dá)明顯高于正常血壓WKY大鼠,而且Activin A在PVN升高SHR大鼠動脈血壓較WKY大鼠更明顯,Activin結(jié)合蛋白FS能明顯下調(diào)SHR大鼠動脈血壓。因此,Activin A可能以自分泌/旁分泌形式調(diào)控PVN神經(jīng)元功能,進(jìn)而影響動脈血壓,其作用與Act RIIA-Smad3信號傳導(dǎo)通路有關(guān)。而且Activin A可能通過誘導(dǎo)PVN神經(jīng)元Ang II及AVP的合成和釋放,上調(diào)PVN神經(jīng)元AT1及AVPR表達(dá),參與SHR大鼠高血壓的形成。因此,本研究不僅進(jìn)一步揭示了Activin A在中樞神經(jīng)系統(tǒng)PVN對動脈血壓的調(diào)控作用,也為進(jìn)一步闡述高血壓發(fā)病機(jī)制及尋找有效的高血壓中樞治療靶點(diǎn)提供了研究基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：激活素A 下丘腦室旁核 自發(fā)性高血壓 動脈血壓
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R544.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 英文詞表11-12
• 第1章 文獻(xiàn)綜述12-20
• 1.1 激活素12-14
• 1.2 動脈血壓調(diào)節(jié)14-17
• 1.2.1 腎素-血管緊張素系統(tǒng)14-15
• 1.2.2 壓力感受性反射15
• 1.2.3 下丘腦室旁核15-16
• 1.2.4 精氨酸加壓素16-17
• 1.3 激活素與高血壓的關(guān)系17-18
• 1.4 本課題研究目的和特色18-20
• 1.4.1 本課題的研究目的18
• 1.4.2 研究內(nèi)容18-19
• 1.4.3 本課題的研究特色19-20
• 第2章 材料與方法20-27
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動物20
• 2.2 實(shí)驗(yàn)試劑20
• 2.3 相關(guān)實(shí)驗(yàn)試劑的配制20-21
• 2.3.1 1×PBS的配制20
• 2.3.2 胰蛋白酶消化液的配制20-21
• 2.3.3 4%多聚甲醛的配制21
• 2.4 實(shí)驗(yàn)儀器21-22
• 2.5 實(shí)驗(yàn)方法22-26
• 2.5.1 實(shí)驗(yàn)動物的飼養(yǎng)管理22
• 2.5.2 RT-PCR方法22-23
• 2.5.3 免疫組織化學(xué)染色23-25
• 2.5.4 PVN微量注射及大鼠動脈血壓測定25
• 2.5.5 大鼠乳鼠PVN神經(jīng)元培養(yǎng)25
• 2.5.6 ELISA方法25-26
• 2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析26-27
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-37
• 3.1 Activin A在WKY和SHR大鼠PVN的作用27-31
• 3.1.1 Activin A及其受體、Smads mRNA在WKY和SHR大鼠PVN的表達(dá)27-28
• 3.1.2 Activin A及ActRIIA蛋白在WKY和SHR大鼠PVN的表達(dá)28-29
• 3.1.3 Activin A在WKY和SHR大鼠PVN對動脈血壓的作用29-31
• 3.2 FS在WKY和SHR大鼠PVN的作用31-33
• 3.2.1 FS mRNA在WKY和SHR大鼠PVN的表達(dá)31
• 3.2.2 FS蛋白在WKY和SHR大鼠PVN的表達(dá)31-32
• 3.2.3 FS在WKY和SHR大鼠PVN對動脈血壓的作用32-33
• 3.3 Activin A對PVN神經(jīng)元的作用機(jī)制研究33-37
• 3.3.1 ACE及AT1在WKY和SHR大鼠PVN組織中的表達(dá)33-34
• 3.3.2 Activin A對原代培養(yǎng)PVN神經(jīng)元Ang II和AVP合成和分泌的作用34-35
• 3.3.3 Activin A對原代培養(yǎng)WKY大鼠PVN神經(jīng)元Activin A受體和Smads信號傳導(dǎo)分子的作用35-37
• 第4章 討論37-41
• 4.1 Activin A在PVN調(diào)控動脈血壓38-39
• 4.2 Activin A在PVN調(diào)控動脈血壓的可能機(jī)制研究39-41
• 第5章 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-50
• 作者簡介及攻讀碩士期間取得的成果50-51
• 致謝51

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2 祝~=驤;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;，

本文編號：999321