本文關(guān)鍵詞：A20蛋白質(zhì)O-GlcNAc修飾對(duì)大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞炎癥、反應(yīng)應(yīng)答的影響及機(jī)制

  更多相關(guān)文章： A20 O-GlcNAc修飾 大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 炎癥反應(yīng) 遷移 增殖

【摘要】：[目的]本研究旨在探討A20的O-GlcNAc(氧連-N-乙酰葡萄糖胺)修飾對(duì)NF-KB信號(hào)通路的調(diào)節(jié)效應(yīng),闡明細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)O-GlcNAc修飾對(duì)A20活性的影響及其在抗炎效應(yīng)中的作用,從而明確蛋白質(zhì)O-GlcNAc修飾提供血管保護(hù)效應(yīng)的關(guān)鍵靶點(diǎn)。[方法](1)分別給予大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(rat aortic smooth muscle cells, RASMCs)轉(zhuǎn)染空載體腺病毒(AD-NULL)、攜帶A20消減基因的腺病毒(AD-shA20-2)以及攜帶A20過表達(dá)基因的腺病毒(AD-A20-IRES)后,再給予Thiamet-G (150nmol/ml)頁處理1小時(shí),接著給予TNF-a (lOng/ml)處理6小時(shí),提取RNA樣本,采用real-time RT-PCR檢測(cè)炎癥因子MCP-1、P-selectin的mRNA表達(dá)。(2)分別給予RASMCs轉(zhuǎn)染AD-NULL、AD-shA20-2及AD-A20-IRES后,給予Thiamet-G預(yù)處理(150nmol/ml) 1小時(shí),隨后將細(xì)胞接種在Boyden小室上腔,下腔注入含有TNF-α (10ng/ml)的DMEM,繼續(xù)孵育24小時(shí),細(xì)胞經(jīng)固定、染色、漂洗,隨機(jī)選擇10個(gè)視野計(jì)數(shù)遷移至小室底面的細(xì)胞數(shù)量。(3)分別給予RASMCs轉(zhuǎn)染AD-NULL、AD-shA20-2及AD-A20-IRES,接種至96孔板,饑餓細(xì)胞,給予Thiamet-G (150nmol/ml)預(yù)處理1小時(shí),再給予10%FBS孵育24小時(shí),采用CCK8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞的增殖情況。[結(jié)果](1)在轉(zhuǎn)染AD-NULL的RASMCs, Thiamet-G預(yù)處理快速提高細(xì)胞O-GlcNAc修飾水平能夠顯著抑制TNF-a誘導(dǎo)的炎癥因子MCP-1、P-selectin表達(dá)；在轉(zhuǎn)染AD-shA20-2的RASMCs, A20蛋白表達(dá)明顯減少,而Thiamet-G預(yù)處理不再能夠抑制TNF-α誘導(dǎo)的炎癥因子表達(dá)；轉(zhuǎn)染AD-A20-IRES可顯著增加A20蛋白表達(dá),Thiamet-G預(yù)處理仍然能夠抑制TNF-α誘導(dǎo)的炎癥因子表達(dá)。(2)在轉(zhuǎn)染AD-NULL的RASMCs, Thiamet-G預(yù)處理快速提高細(xì)胞O-GlcNAc修飾水平能夠顯著抑制TNF-α誘導(dǎo)的RASMCs遷移；在轉(zhuǎn)染AD-shA20-2的RASMCs, Thiamet-G預(yù)處理不再能夠抑制TNF-a誘導(dǎo)的RASMCs遷移；而在轉(zhuǎn)染AD-A20-IRES的RASMCs, Thiamet-G預(yù)處理仍然能夠抑制TNF-α誘導(dǎo)的RASMCs遷移。(3)在轉(zhuǎn)染AD-NULL的RASMCs, Thiamet-G預(yù)處理快速提高細(xì)胞O-GlcNAc修飾水平能夠顯著抑制血清誘導(dǎo)的RASMCs增殖；在轉(zhuǎn)染AD-shA20-2的RASMCs,消減A20蛋白表達(dá)可廢除Thiamet-G對(duì)血清誘導(dǎo)RASMCs增殖的抑制；相反,過表達(dá)A20蛋白并不影響Thiamet-G對(duì)血清誘導(dǎo)RASMCs增殖的抑制。[結(jié)論]快速提高細(xì)胞內(nèi)I-GlcNAc修飾水平能夠顯著抑制TNF-a誘導(dǎo)的RASMCs炎癥介質(zhì)表達(dá)和遷移以及血清誘導(dǎo)的RASMCs增殖,腺病毒介導(dǎo)的A20消減可以廢除快速O-GlcNAc修飾對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的RASMCs炎癥介質(zhì)表達(dá)和遷移的抑制以及對(duì)血清誘導(dǎo)RASMCs增殖的抑制。因此,A20很有可能是介導(dǎo)快速O-GlcNAc修飾對(duì)血管保護(hù)效應(yīng)的關(guān)鍵分子靶標(biāo)。
【關(guān)鍵詞】：A20 O-GlcNAc修飾 大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 炎癥反應(yīng) 遷移 增殖
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R541.4
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-8
• 中英文對(duì)照縮略詞表8-9
• 前言9-12
• 材料與方法12-21
• 結(jié)果21-30
• 討論30-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-39
• 綜述39-47
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 致謝47-48
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文目錄48-49

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張肖冰;師以康;;蛋白質(zhì)O-GlcNAc糖基化與腫瘤[J];腫瘤;2013年11期

2 樊瓊;顧玉超;于文功;;O-GlcNAc修飾與腫瘤發(fā)生及轉(zhuǎn)移[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2011年08期

3 Mitsutaka Ogawa;Koichi Furukawa;Tetsuya Okajima;;Extracellular O-linked β-N-acetylglucosamine: Its biology and relationship to human disease[J];World Journal of Biological Chemistry;2014年02期

4 張積仁,張學(xué)庸;腫瘤患者血清碳水化合物末端Galβ1→4 GlcNAc糖鏈序列的表達(dá)[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);1991年01期

5 第五永長(zhǎng);田金洲;;Tau蛋白磷酸化及O-GlcNAc糖基化修飾與阿爾茨海默病[J];中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志;2010年03期

6 蒯學(xué)章;張令強(qiáng);賀福初;;O-GlcNAc修飾研究進(jìn)展[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;2006年01期

7 屈茹楠;琚娜娜;吳明軍;趙德璋;王應(yīng)雄;楊竹;于超;;功能蛋白O-GlcNAc糖基化修飾調(diào)控絨毛膜癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移[J];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào);2013年07期

8 陳玉靜;黃小波;陳文強(qiáng);王寧群;;遠(yuǎn)志皂苷元對(duì)PC12細(xì)胞tau蛋白磷酸化和O-GlcNAc糖基化的影響[J];天津中醫(yī)藥;2013年01期

9 ;Chemoenzymatic synthesis of α2 3-sialylated carbohydrate epitopes[J];Science China(Chemistry);2011年01期

10 朱敏;沈愛國(guó);丁炯;顧曉松;王鶴鳴;;Galβ-1,4-GlcNAc在鉗夾傷后大鼠坐骨神經(jīng)中的表達(dá)變化[J];中國(guó)臨床解剖學(xué)雜志;2006年06期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;A novel coupled-enzyme method for O-linked GIcNAc transferase activity assay[A];第六屆全國(guó)化學(xué)生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2009年

2 王文君;尹志東;謝端;曹宸銘;劉太寶;李鐵海;郭麗娜;沈杰;趙煒;王欣;王鵬;;基于生物素修飾探針分子的O-GlcNAc轉(zhuǎn)移酶研究[A];第六屆全國(guó)化學(xué)生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2009年

3 ;Investigation of Efficient Constructing Gal(1-3)[NeuAc(2-6)]GlcNAc(2-6)Man[A];2011年全國(guó)藥物化學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議——藥物的源頭創(chuàng)新論文摘要集[C];2011年

4 邢立靜;李娟;徐云遠(yuǎn);種康;;春化作用的O-GlcNAc信號(hào)調(diào)控機(jī)制[A];中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)植物遺傳和基因組學(xué)專業(yè)委員會(huì)2009年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2009年

5 劉華東;李艷梅;;UDP-GIcNAc轉(zhuǎn)移酶(OGT)的結(jié)構(gòu)及作用機(jī)理[A];第七屆全國(guó)酶學(xué)學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2004年

6 Ju餼rez,S.;Hartweck,L.;Alamillo,J.M.;Simón-Mateo,C.;Pérez,J.J.;Fern餼ndez-Fern餼ndez,M.R.;Olszewski,N.E.;García,J.A.;;THE O-GlcNAc TRANSFERASE SECRET AGENT PLAYS A ROLE IN PLANT VIRUS INFECTION[A];中國(guó)植物病理學(xué)會(huì)2005年學(xué)術(shù)年會(huì)暨植物病理學(xué)報(bào)創(chuàng)刊50周年紀(jì)念會(huì)論文摘要集[C];2005年

7 Peng George Wang;;Design and synthesis of O-GIcNAcase inhibitor[A];2011年全國(guó)藥物化學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議——藥物的源頭創(chuàng)新論文摘要集[C];2011年

8 ;De-Novo Designed α-helix to Mimicking the OGT Binding with UDP-GlcNAc[A];第七屆全國(guó)磷化學(xué)化工暨第四屆海峽化學(xué)生物學(xué)、生物技術(shù)與醫(yī)藥發(fā)展討論會(huì)論文集[C];2006年

9 李艷梅;陳永湘;;利用ESI-MS和MALDI-TOF鑒定多肽O-GlcNAc修飾位點(diǎn)[A];中國(guó)蛋白質(zhì)組學(xué)第三屆學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要[C];2005年

10 邢立靜;李娟;種康;;參與胞內(nèi)運(yùn)動(dòng)的小麥凝集素VER2介導(dǎo)春化誘導(dǎo)的O-GlcNAc信號(hào)[A];中國(guó)植物學(xué)會(huì)七十五周年年會(huì)論文摘要匯編（1933-2008）[C];2008年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 宓文義;O-GlcNAc糖基化修飾在腫瘤發(fā)生與轉(zhuǎn)移過程中的作用及其機(jī)制研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2011年

2 施建華;O-GlcNAc糖基化在神經(jīng)疾病中的作用[D];蘇州大學(xué);2012年

3 顧玉超;O-GlcNAc修飾在乳腺癌轉(zhuǎn)移過程中的作用及其機(jī)制研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2008年

4 房俊強(qiáng);大腸桿菌K12 GlcNAc-1-P尿苷轉(zhuǎn)移酶的研究[D];山東大學(xué);2009年

5 第五永長(zhǎng);銀思維對(duì)擬SAD大鼠腦內(nèi)tau磷酸化及其O-GlcNAc修飾的調(diào)節(jié)作用及相關(guān)研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2011年

6 關(guān)婉怡;N-乙酰氨基葡萄糖/半乳糖核苷酸及類似物的酶法合成與應(yīng)用研究[D];山東大學(xué);2011年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 叢琦;蛋白質(zhì)O-GlcNAc修飾研究的方法探討[D];中國(guó)海洋大學(xué);2012年

2 高歡姿;基于糖鏈轉(zhuǎn)移酶的N-糖鏈相對(duì)定量分析研究[D];延邊大學(xué);2015年

3 毛慶伏;O-GlcNAc糖基化修飾對(duì)TET3蛋白核定位的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

4 時(shí)照梅;蛋白質(zhì)O-GlcNAc糖基化修飾的規(guī)模化富集鑒定方法研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

5 張肖冰;蛋白質(zhì)O-GlcNAc糖基化在紫杉醇抗腫瘤活性中的作用研究[D];山東大學(xué);2015年

6 周豐;O-GlcNAc修飾對(duì)泛素化相關(guān)基因的調(diào)控[D];天津大學(xué);2014年

7 姚丹;A20蛋白質(zhì)O-GlcNAc修飾對(duì)大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞炎癥、反應(yīng)應(yīng)答的影響及機(jī)制[D];揚(yáng)州大學(xué);2015年

8 周潔雯;高效合成UDP-N-GlcNAc多酶體系的構(gòu)建[D];浙江大學(xué);2010年

9 鄧瑞萍;基于人蛋白質(zhì)組芯片的新O-GlcNAc糖基轉(zhuǎn)移酶相互作用蛋白及底物發(fā)現(xiàn)研究[D];上海交通大學(xué);2013年

10 樊瓊;O-GlcNAc修飾在結(jié)腸癌形成和遷移過程中的作用[D];中國(guó)海洋大學(xué);2011年

，

本文編號(hào)：994438