本文關(guān)鍵詞：載脂蛋白A1模擬肽對(duì)巨噬細(xì)胞泡沫化的抑制作用及機(jī)制

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【摘要】：目的:心血管疾病對(duì)人類(lèi)健康造成很大危害,重要的病理機(jī)制是動(dòng)脈粥樣硬化,在動(dòng)脈粥樣硬化的形成中,巨噬細(xì)胞扮演重要角色,而氧化低密度脂蛋白則是泡沫細(xì)胞形成的一個(gè)主要因素。CD36、SR-A1等清道夫受體與泡沫細(xì)胞的形成關(guān)系密切,巨噬細(xì)胞在CD36、SR-A1的介導(dǎo)下能夠?qū)ρ趸兔芏戎鞍?ox-LDL)無(wú)上限的攝取,大量脂質(zhì)積蓄在細(xì)胞內(nèi),從而形成泡沫細(xì)胞,進(jìn)而誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化。氧化脂質(zhì)的細(xì)胞毒效應(yīng)很強(qiáng),導(dǎo)致泡沫細(xì)胞凋亡、壞死,粥樣斑塊構(gòu)成的脂質(zhì)核心形成。載脂蛋白A1是高密度脂蛋白(HDL)的主要蛋白成分,其模擬肽L-4F和D-4F可以促使巨噬細(xì)胞中膽固醇外流,抑制血脂紊亂引起的小鼠AS,而D-4F是否能夠通過(guò)調(diào)控清道夫受體表達(dá)從而抑制巨噬細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積呢?目前尚未見(jiàn)報(bào)道。本工作在ox-LDL誘導(dǎo)的巨噬源性泡沫細(xì)胞模型和(內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激)ERS誘導(dǎo)劑TM誘導(dǎo)的ERS模型上,研究SR-A1的表達(dá)情況,觀察ERS抑制劑PBA是否能夠拮抗ox-LDL及TM對(duì)SR-A1的誘導(dǎo)作用,研究ERS與泡沫細(xì)胞形成的關(guān)系和作用機(jī)制,進(jìn)一步解釋Apo A-I模擬肽D-4F與巨噬細(xì)胞SR-A1的相互作用關(guān)系。方法:選擇RAW264.7巨噬細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng),給予ERS抑制劑PBA(20mmol/L)處理30 min,繼續(xù)用ox-LDL(50 mg/L)干預(yù)12 h或2μmol/L毒胡蘿卜素(thapsigagin,TG)或2 mg/L TM培養(yǎng)4 h。培養(yǎng)另外一組RAW264.7巨噬細(xì)胞,給予TM(0.5、1和2 mg/L)處理4 h或2 mg/L TM處理1、2和4 h。RAW264.7巨噬細(xì)胞用濃度為12.5、25和50 mg/L的D4F、50 mmol/L的紊亂模擬肽sD4F處理1 h或5 mmol/L PBA 30 min后,再用100 mg/L ox-LDL培養(yǎng)12 h。另外培養(yǎng)巨噬細(xì)胞,給予50 mg/L sD4F或D4F處理1 h后給予2 mg/L TM處理4 h。細(xì)胞活力檢測(cè)采用MTT法,細(xì)胞內(nèi)總膽固醇含量檢測(cè)采用總膽固醇檢測(cè)試劑盒;SR-A1和GRP78蛋白表達(dá)檢測(cè)變化采用免疫印跡法;SR-A1和GRP78mRNA表達(dá)檢測(cè)采用實(shí)時(shí)熒光定量pcr技術(shù);dil-ox-ldl攝取情況檢測(cè)采用多功能酶標(biāo)儀。結(jié)果:ox-ldl組和正常對(duì)照組比較,巨噬細(xì)胞內(nèi)tc含量增加顯著(p0.01),用pba干預(yù)后,ox-ldl誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇蓄積量降低,與ox-ldl組比較其含量降低32.0%(p0.05)。ox-ldl處理組和正常對(duì)照組比較,ox-ldl組細(xì)胞sr-a1、grp78蛋白水平上調(diào)顯明(p0.01),而pba對(duì)ox-ldl誘導(dǎo)的sr-a1上調(diào)抑制顯著,與ox-ldl組比較降低48.4%(p0.05),細(xì)胞內(nèi)grp78蛋白表達(dá)雖然降低39.3%,但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.057)。ox-ldl干預(yù)后sr-a1mrna水平顯明上調(diào),是對(duì)照組1.81倍(p0.05);在ox-ldl誘導(dǎo)sr-a1轉(zhuǎn)錄水平方面pba干預(yù)無(wú)明顯影響,與ox-ldl處理組比較,兩組細(xì)胞內(nèi)sr-a1的mrna表達(dá)程度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。巨噬細(xì)胞用tm干預(yù)后sr-a1蛋白水平顯明上調(diào),呈時(shí)間和濃度依賴(lài)性,最高峰為tm處理2h時(shí)(p0.05);tm的不同濃度(0.5、1和2mg/l)雖然能夠使sr-a1mrna水平呈上升的趨勢(shì),但統(tǒng)計(jì)學(xué)無(wú)差異(p0.05)。tm能夠增加巨噬細(xì)胞攝取ox-ldl,tm(2mg/l)尤為顯著(p0.01)。pba+tm處理組與tm處理組比較,ox-ldl攝取量及sr-a1、grp78蛋白水平均降低明顯,分別是tm組的51.3%、53.9%、60.0%(p0.05)。在tg作用下巨噬細(xì)胞sr-a1、grp78蛋白水平顯著上調(diào),而pba+tg組sr-a1、grp78蛋白水平均降低明顯,分別是tg處理組的47.5%、58.3%(p0.05)。巨噬細(xì)胞用ox-ldl損傷后,再給予d-4f,巨噬細(xì)胞損傷減弱,細(xì)胞內(nèi)膽固醇積蓄量減少。ox-ldl使巨噬細(xì)胞sr-a1、grp78表達(dá)水平升高,模擬肽d-4f明顯抑制上述變化,并呈濃度依賴(lài)性。tm處理細(xì)胞后,細(xì)胞內(nèi)sr-a1、grp78表達(dá)量升高,但是用d-4f干預(yù)后能下降其表達(dá)量,同時(shí)能夠減少巨噬細(xì)胞攝取ox-ldl。結(jié)論:ers在ox-ldl誘導(dǎo)sr-a1上調(diào)中發(fā)揮重要作用,巨噬細(xì)胞吸收ox-ldl生成泡沫細(xì)胞。清道夫受體a1在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激過(guò)程中受ox-ldl刺激表達(dá)上調(diào),而apo-ai模擬肽d-4f能夠?qū)ρ趸兔芏戎鞍渍T導(dǎo)的sr-a1上調(diào)有明顯拮抗作用。模擬肽d-4f能夠減少sr-a1表達(dá),進(jìn)一步減弱ox-ldl誘發(fā)的巨噬細(xì)胞損傷以及細(xì)胞內(nèi)膽固醇積蓄,其機(jī)制可能和抑制ERS中GRP78介導(dǎo)的信號(hào)途徑相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：氧化低密度脂蛋白 高密度脂蛋白 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 巨噬源性泡沫細(xì)胞 清道夫受體A1
【學(xué)位授予單位】：承德醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R54
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 英文縮寫(xiě)11-13
• 前言13
• 材料與方法13-25
• 結(jié)果25-28
• 附圖28-37
• 討論37-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-42
• 綜述42-52
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 致謝52-53
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷53-54

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本文編號(hào)：990570