本文關鍵詞：載脂蛋白A1模擬肽對巨噬細胞泡沫化的抑制作用及機制

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【摘要】：目的:心血管疾病對人類健康造成很大危害,重要的病理機制是動脈粥樣硬化,在動脈粥樣硬化的形成中,巨噬細胞扮演重要角色,而氧化低密度脂蛋白則是泡沫細胞形成的一個主要因素。CD36、SR-A1等清道夫受體與泡沫細胞的形成關系密切,巨噬細胞在CD36、SR-A1的介導下能夠對氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)無上限的攝取,大量脂質積蓄在細胞內,從而形成泡沫細胞,進而誘發(fā)動脈粥樣硬化。氧化脂質的細胞毒效應很強,導致泡沫細胞凋亡、壞死,粥樣斑塊構成的脂質核心形成。載脂蛋白A1是高密度脂蛋白(HDL)的主要蛋白成分,其模擬肽L-4F和D-4F可以促使巨噬細胞中膽固醇外流,抑制血脂紊亂引起的小鼠AS,而D-4F是否能夠通過調控清道夫受體表達從而抑制巨噬細胞內脂質蓄積呢?目前尚未見報道。本工作在ox-LDL誘導的巨噬源性泡沫細胞模型和(內質網應激)ERS誘導劑TM誘導的ERS模型上,研究SR-A1的表達情況,觀察ERS抑制劑PBA是否能夠拮抗ox-LDL及TM對SR-A1的誘導作用,研究ERS與泡沫細胞形成的關系和作用機制,進一步解釋Apo A-I模擬肽D-4F與巨噬細胞SR-A1的相互作用關系。方法:選擇RAW264.7巨噬細胞進行體外培養(yǎng),給予ERS抑制劑PBA(20mmol/L)處理30 min,繼續(xù)用ox-LDL(50 mg/L)干預12 h或2μmol/L毒胡蘿卜素(thapsigagin,TG)或2 mg/L TM培養(yǎng)4 h。培養(yǎng)另外一組RAW264.7巨噬細胞,給予TM(0.5、1和2 mg/L)處理4 h或2 mg/L TM處理1、2和4 h。RAW264.7巨噬細胞用濃度為12.5、25和50 mg/L的D4F、50 mmol/L的紊亂模擬肽sD4F處理1 h或5 mmol/L PBA 30 min后,再用100 mg/L ox-LDL培養(yǎng)12 h。另外培養(yǎng)巨噬細胞,給予50 mg/L sD4F或D4F處理1 h后給予2 mg/L TM處理4 h。細胞活力檢測采用MTT法,細胞內總膽固醇含量檢測采用總膽固醇檢測試劑盒;SR-A1和GRP78蛋白表達檢測變化采用免疫印跡法;SR-A1和GRP78mRNA表達檢測采用實時熒光定量pcr技術;dil-ox-ldl攝取情況檢測采用多功能酶標儀。結果:ox-ldl組和正常對照組比較,巨噬細胞內tc含量增加顯著(p0.01),用pba干預后,ox-ldl誘導的巨噬細胞內膽固醇蓄積量降低,與ox-ldl組比較其含量降低32.0%(p0.05)。ox-ldl處理組和正常對照組比較,ox-ldl組細胞sr-a1、grp78蛋白水平上調顯明(p0.01),而pba對ox-ldl誘導的sr-a1上調抑制顯著,與ox-ldl組比較降低48.4%(p0.05),細胞內grp78蛋白表達雖然降低39.3%,但沒有統(tǒng)計學意義(p=0.057)。ox-ldl干預后sr-a1mrna水平顯明上調,是對照組1.81倍(p0.05);在ox-ldl誘導sr-a1轉錄水平方面pba干預無明顯影響,與ox-ldl處理組比較,兩組細胞內sr-a1的mrna表達程度無統(tǒng)計學差異(p0.05)。巨噬細胞用tm干預后sr-a1蛋白水平顯明上調,呈時間和濃度依賴性,最高峰為tm處理2h時(p0.05);tm的不同濃度(0.5、1和2mg/l)雖然能夠使sr-a1mrna水平呈上升的趨勢,但統(tǒng)計學無差異(p0.05)。tm能夠增加巨噬細胞攝取ox-ldl,tm(2mg/l)尤為顯著(p0.01)。pba+tm處理組與tm處理組比較,ox-ldl攝取量及sr-a1、grp78蛋白水平均降低明顯,分別是tm組的51.3%、53.9%、60.0%(p0.05)。在tg作用下巨噬細胞sr-a1、grp78蛋白水平顯著上調,而pba+tg組sr-a1、grp78蛋白水平均降低明顯,分別是tg處理組的47.5%、58.3%(p0.05)。巨噬細胞用ox-ldl損傷后,再給予d-4f,巨噬細胞損傷減弱,細胞內膽固醇積蓄量減少。ox-ldl使巨噬細胞sr-a1、grp78表達水平升高,模擬肽d-4f明顯抑制上述變化,并呈濃度依賴性。tm處理細胞后,細胞內sr-a1、grp78表達量升高,但是用d-4f干預后能下降其表達量,同時能夠減少巨噬細胞攝取ox-ldl。結論:ers在ox-ldl誘導sr-a1上調中發(fā)揮重要作用,巨噬細胞吸收ox-ldl生成泡沫細胞。清道夫受體a1在內質網應激過程中受ox-ldl刺激表達上調,而apo-ai模擬肽d-4f能夠對氧化低密度脂蛋白誘導的sr-a1上調有明顯拮抗作用。模擬肽d-4f能夠減少sr-a1表達,進一步減弱ox-ldl誘發(fā)的巨噬細胞損傷以及細胞內膽固醇積蓄,其機制可能和抑制ERS中GRP78介導的信號途徑相關。
【關鍵詞】：氧化低密度脂蛋白 高密度脂蛋白 內質網應激 巨噬源性泡沫細胞 清道夫受體A1
【學位授予單位】：承德醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R54
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 英文縮寫11-13
• 前言13
• 材料與方法13-25
• 結果25-28
• 附圖28-37
• 討論37-39
• 結論39-40
• 參考文獻40-42
• 綜述42-52
• 參考文獻48-52
• 致謝52-53
• 個人簡歷53-54

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本文編號：990570