本文關(guān)鍵詞：黃芪甲苷聯(lián)合5-氮胞苷誘導(dǎo)hUCB-MSCs分化為心肌樣細(xì)胞并抑制其凋亡

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【摘要】：目的:5-氮胞苷(5-aza)是一種間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)分化的有效誘導(dǎo)劑,但存在較大的毒副作用。黃芪甲苷(AST)為黃芪制劑中的主要活性成分,也能誘導(dǎo)MSCs分化。本研究的目的旨在闡明AST聯(lián)合5-aza對人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞(h UCB-MSCs)分化為心肌樣細(xì)胞的影響,并探討其對心肌細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用。方法:1.采用密度梯度離心法結(jié)合貼壁培養(yǎng)法體外分離和培養(yǎng)h UCB-MSCs,流式細(xì)胞術(shù)鑒定h UCB-MSCs免疫表型抗原CD34、CD44和CD29。2.取第3代h UCB-MSCs,分別予培養(yǎng)基(空白對照組)、5μmol/L 5-aza(低劑量5-aza組)、10μmol/L 5-aza(高劑量5-aza組)及200 mg/L AST+5μmol/L 5-aza(AST+5-aza組)處理4周,顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變;采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測心肌肌鈣蛋白T(c Tn T)、Desmin表達(dá);通過熒光實(shí)時(shí)定量PCR、western blot分別檢測心房利鈉肽(ANP)m RNA、蛋白表達(dá);行酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定細(xì)胞內(nèi)環(huán)磷酸腺苷(c AMP)含量。3.在h UC-MSCs誘導(dǎo)分化4周后,予高糖(33 mmol/L)/葡萄糖氧化酶(2m U/m L)處理12 h以誘導(dǎo)心肌樣細(xì)胞凋亡,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率,western blot檢測Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)。結(jié)果:1.h UCB-MSCs表面抗原CD34陰性,CD44、CD29陽性。2.誘導(dǎo)后細(xì)胞形態(tài)發(fā)生顯著變化;空白對照組未見c Tn T、Desmin表達(dá),高劑量5-aza組、AST+5-aza組c Tn T、Desmin表達(dá)水平較低劑量5-aza組升高(P0.01),但AST+5-aza組與高劑量5-aza組之間無區(qū)別(P0.05);高劑量5-aza組、AST+5-aza組ANP表達(dá)水平、細(xì)胞內(nèi)c AMP含量顯著高于低劑量5-aza組(P0.01),但AST+5-aza組上述指標(biāo)與高劑量5-aza組相比,差異無顯著性(P0.05),而且各藥物誘導(dǎo)組ANP表達(dá)水平、細(xì)胞內(nèi)c AMP含量均高于空白對照組(P0.01)。3.與空白對照組比較,低、高劑量5-aza組Bcl-2蛋白表達(dá)水平降低(P0.05或0.01),細(xì)胞凋亡率、Bax蛋白表達(dá)水平升高(P0.05或0.01),AST+5-aza組Bcl-2蛋白表達(dá)水平增加(P0.05),細(xì)胞凋亡率、Bax蛋白表達(dá)水平減少(P0.05)。結(jié)論:1.h UCB-MSCs在體外能被AST聯(lián)合5-aza誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞,其效果與10μmol/L 5-aza相當(dāng)。2.AST聯(lián)合5-aza通過增加Bcl-2/Bax比值抑制心肌樣細(xì)胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：黃芪甲苷 5-氮胞苷 人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞 心肌樣細(xì)胞 凋亡
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R54
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 主要縮略英文索引10-11
• 引言11-13
• 材料與方法13-18
• 結(jié)果18-30
• 討論30-34
• 結(jié)論34-36
• 參考文獻(xiàn)36-40
• 綜述40-52
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 在攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文52-54
• 致謝54

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