本文關(guān)鍵詞：卵泡抑素樣蛋白1抵抗過量一氧化氮誘導(dǎo)的心肌細胞凋亡的機制研究

  更多相關(guān)文章： FSTL1 SNP Akt信號通路 Smad1/5/8信號通路

【摘要】：目的:已證實心功能不全與心肌細胞的凋亡密不可分,心肌細胞的凋亡又與過量一氧化氮(NO)蓄積有著很大的關(guān)系,硝普鈉(SNP)作為臨床上廣泛運用的血管擴張劑,同時它也是廣泛運用的NO供體,對心肌細胞有損傷作用。因此本實驗旨在研究卵泡抑素樣蛋白1(FSTL1)對SNP誘導(dǎo)的心肌細胞凋亡的保護作用。方法:選用大鼠成肌細胞系(H9C2)細胞培養(yǎng)傳代進行體外實驗。(1)通過SNP(2mM)刺激H9C2細胞24h建立SNP誘導(dǎo)的H9C2細胞凋亡模型;(2)通過q-PCR和Western Blot檢測SNP刺激H9C2前后FSTL1的表達是否有差異;(3)通過引入外源性的FSTL1(100ng/ml)預(yù)處理H9C2細胞30min比較SNP刺激后H9C2細胞凋亡是否減少;(4)通過轉(zhuǎn)染siFSTL1比較SNP刺激后H9C2細胞凋亡是否增加;(5)用總一氧化氮檢測試劑盒采用硝酸酶還原法將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,然后通過檢測亞硝酸鹽的含量,間接計算出總一氧化氮;(6)通過引入PI3K/Akt、Smad2/3抑制劑LY294002和SB5253334和Smad1/5/8信號通路激動劑BMP-4研究FSTL1保護H9C2的分子機制。結(jié)果:利用DAPI染色結(jié)果可以顯示H9C2細胞在SNP(2mM)刺激24h后與沒有經(jīng)過SNP刺激的H9C2細胞比較,H9C2細胞的凋亡數(shù)量顯著增加。以FSTL1(100ng/ml)預(yù)處理30min再以SNP刺激后H9C2細胞的凋亡顯著降低。通過轉(zhuǎn)染沉默掉內(nèi)源性的FSTL1后再以SNP刺激H9C2細胞,其凋亡數(shù)量比未沉默內(nèi)源性的FSTL1的凋亡數(shù)量顯著增加。q-PCR檢測結(jié)果顯示SNP刺激H9C2后其表達的FSTL1在基因水平減少,Western Blot檢測結(jié)果顯示SNP刺激H9C2后其表達的FSTL1在蛋白水平減少�？傄谎趸獧z測試劑盒檢測結(jié)果顯示在SNP刺激后培養(yǎng)基中NO的含量比對照組明顯增加,但是以FSTL1預(yù)處理30min后再以SNP刺激NO的含量比沒有FSTL1預(yù)處理組顯著降低。通過引入PI3K/Akt信號通路抑制劑LY294002干擾Akt信號通路后發(fā)現(xiàn)FSTL1保護H9C2細胞的作用明顯減弱,引入BMP4激動Smad1/5/8信號通路發(fā)現(xiàn)FSTL1保護H9C2細作用明顯減弱,而引入SB523334抑制Smad2/3信號通路后FSTL1保護H9C2細胞的作用前后無明顯變化。結(jié)論:FSTL1對SNP誘導(dǎo)的H9C2心肌細胞凋亡具有保護作用;FSTL1保護心肌細胞凋亡的作用至少是通過激活A(yù)kt信號通路和抑制Smad1/5/8信號通路實現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：FSTL1 SNP Akt信號通路 Smad1/5/8信號通路
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R54
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-11
• 材料和方法11-20
• 一、材料11-12
• 二、實驗方法12-20
• 結(jié)果20-32
• 一、H9C2心肌細胞的培養(yǎng)及鏡下的形態(tài)觀察20
• 二、SNP誘導(dǎo)的H9C2凋亡模型的建立20-21
• 三、SNP刺激后FSTL1的表達變化21-23
• 四、FSTL1對SNP誘導(dǎo)的H9C2細胞凋亡具有保護作用23-24
• 五、沉默內(nèi)源性FSTL1后SNP誘導(dǎo)的H9C2細胞凋亡數(shù)量增加24-26
• 六、NO濃度檢測26-27
• 七、LY294002抑制PI3K/AKT信號通路抑制FSTL1保護心肌細胞27-28
• 八、BMP-4 激動SMAD1/5/8 信號通路抑制FSTL1保護心肌細胞28-30
• 九、SB525334抑制SMAD2/3 信號通路FSTL1保護作用無明顯變化30-32
• 討論32-37
• 結(jié)論37-38
• 參考文獻38-42
• 綜述42-50
• 參考文獻47-50
• 中英文縮略詞對照50-51
• 攻讀碩士期間公開發(fā)表的論文51-52
• 致謝52-54

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本文編號：967622