發(fā)布時間：2017-10-02 13:25

  本文關鍵詞：二甲基亞砜對P19細胞向心肌細胞分化的影響及分化后NADPH氧化酶表達的變化

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【摘要】：目的①體外探討不同濃度的二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)對誘導P19細胞向心肌細胞分化的影響;②研究P19細胞體外向心肌細胞分化后細胞內NADPH氧化酶水平的改變。方法①原代生長的P19細胞予以α-MEM完全培養(yǎng)液(含90%α-MEM、10%FBS、青霉素100u/ml、鏈霉素100ug/ml)培養(yǎng)。選取合適的該細胞株,予以適當濃度的胰酶處理后,以約1×106個/ml的細胞密度轉移到10 cm大小的懸浮生長培養(yǎng)皿,加入不同濃度誘導培養(yǎng)液10 ml(分別含0.4%,0.9%及1.4%DMSO的完全培養(yǎng)液),懸浮培養(yǎng)。第3天以7 ml的上述誘導培養(yǎng)液進行不完全換液。第4天待培養(yǎng)皿內有大量細胞聚集體形成時,取6 cm大小組織培養(yǎng)皿,吸取適量該細胞聚集體轉入其中使其貼壁生長,后以完全培養(yǎng)液每兩天換液一次,培養(yǎng)至13天,在顯微鏡下觀察不同生長時期的細胞形態(tài)。收集各組不同誘導時間的細胞,行Western Blot檢測細胞內肌鈣蛋白I(c Tn I)的表達情況,以確定其向心肌細胞的分化;對各組相同分化時間的P19細胞行Western Blot比較c Tn I蛋白的表達,以比較分化的程度;②行Western Blot檢測P19細胞向心肌細胞分化前后細胞內NADPH氧化酶的兩個亞基p22-phox以及gp91-phox水平的變化;③應用SPSS 11.0軟件進行統(tǒng)計分析,c Tn I蛋白水平及分化前后細胞內p22-phox及gp91-phox蛋白水平的比較采用t檢驗,Western blot結果目的條帶應用軟件Image J進行灰度值計算,檢驗水準取P=0.05。結果①P19細胞經0.4%DMSO誘導分化,于第9天開始檢測到cTnI表達陽性,第11天c Tn I表達高于第9天,同時第13天也高于第11天;經0.9%DMSO誘導分化,于第7天開始檢測到c Tn I表達陽性,第9天c Tn I表達高于第7天,同時第11天高于第9天,第13天也高于第11天,上述差異均具統(tǒng)計意義(P0.05);1.4%DMSO處理的P19細胞于誘導第三天大量凋亡,未能誘導成功。②分別經0.4%DMSO和0.9%DMSO誘導的P19細胞,分化相同時間后者較前者c Tn I表達高,差異具統(tǒng)計意義(P0.05)。③P19細胞向心肌細胞分化后細胞內p22-phox及gp91-phox蛋白水平較分化前高,差異具統(tǒng)計意義(P0.05)。結論DMSO在一定條件下可誘導P19細胞在體外向心肌細胞分化;DMSO的誘導作用在一定范圍內與其濃度成正相關,然而濃度過高可以導致細胞凋亡;P19細胞向心肌細胞分化后NADPH氧化酶亞基p22-phox及gp91-phox表達上調,提示NADPH氧化酶水平增高,氧化應激水平增加。
【關鍵詞】：P19細胞 NADPH 氧化酶 氧化應激 心肌病 心肌細胞
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R54
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 第一部分DMSO對體外誘導P19細胞向心肌細胞分化的影響10-30
• 1.引言10-11
• 2.材料與方法11-21
• 3.結果21-27
• 4.討論27-28
• 5.結論28
• 6.參考文獻28-30
• 第二部分 體外誘導P19細胞向心肌細胞分化后p22-phox及gp91-phox表達的變化30-47
• 1.引言30-33
• 2.材料與方法33-39
• 3.結果39-41
• 4.討論41-43
• 5.結論43
• 6.參考文獻43-47
• 附錄47-49
• 致謝49-50
• 綜述50-60
• 參考文獻57-60

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前7條

1 王俊峰;何圓圓;黨書毅;周明;段班燕;;厄貝沙坦對擴張型心肌病患者氧化應激及炎癥的影響[J];實用藥物與臨床;2013年11期

2 鐘久昌;余細勇;于匯民;郭俊明;樂燕萍;;血管緊張素轉換酶2基因轉染對人血管內皮細胞中氧化應激水平的影響[J];中華高血壓雜志;2008年06期

3 程燕;孫堯;張浩良;關戰(zhàn)軍;;氧化應激在酒精性心肌病大鼠中的作用[J];中國醫(yī)科大學學報;2009年08期

4 馮麗萍;李娟娟;劉同強;馮曦;湯京華;龔蘇飛;蔡秋萍;;氯沙坦逆轉維持性血液透析患者左心室肥厚與炎癥和氧化應激的關系[J];中國血液凈化;2012年08期

5 王全偉;凡文博;王智昊;吳揚;;氧化應激與心血管疾病關系的研究進展[J];中國老年學雜志;2014年01期

6 王雯婕;陳劍;王園園;劉小勇;張曉玲;曲藝欣;秦曉艷;;氧化應激與眼表疾病關系的研究進展[J];眼科新進展;2014年06期

7 張連英;黃廣勇;傅珂;何英杰;;氧化應激在圍生期心肌病發(fā)病中的作用[J];中國婦幼保健;2014年35期

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本文編號：959865