本文關(guān)鍵詞：二甲基亞砜對(duì)P19細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化的影響及分化后NADPH氧化酶表達(dá)的變化

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【摘要】：目的①體外探討不同濃度的二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)對(duì)誘導(dǎo)P19細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化的影響;②研究P19細(xì)胞體外向心肌細(xì)胞分化后細(xì)胞內(nèi)NADPH氧化酶水平的改變。方法①原代生長(zhǎng)的P19細(xì)胞予以α-MEM完全培養(yǎng)液(含90%α-MEM、10%FBS、青霉素100u/ml、鏈霉素100ug/ml)培養(yǎng)。選取合適的該細(xì)胞株,予以適當(dāng)濃度的胰酶處理后,以約1×106個(gè)/ml的細(xì)胞密度轉(zhuǎn)移到10 cm大小的懸浮生長(zhǎng)培養(yǎng)皿,加入不同濃度誘導(dǎo)培養(yǎng)液10 ml(分別含0.4%,0.9%及1.4%DMSO的完全培養(yǎng)液),懸浮培養(yǎng)。第3天以7 ml的上述誘導(dǎo)培養(yǎng)液進(jìn)行不完全換液。第4天待培養(yǎng)皿內(nèi)有大量細(xì)胞聚集體形成時(shí),取6 cm大小組織培養(yǎng)皿,吸取適量該細(xì)胞聚集體轉(zhuǎn)入其中使其貼壁生長(zhǎng),后以完全培養(yǎng)液每?jī)商鞊Q液一次,培養(yǎng)至13天,在顯微鏡下觀察不同生長(zhǎng)時(shí)期的細(xì)胞形態(tài)。收集各組不同誘導(dǎo)時(shí)間的細(xì)胞,行Western Blot檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)肌鈣蛋白I(c Tn I)的表達(dá)情況,以確定其向心肌細(xì)胞的分化;對(duì)各組相同分化時(shí)間的P19細(xì)胞行Western Blot比較c Tn I蛋白的表達(dá),以比較分化的程度;②行Western Blot檢測(cè)P19細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化前后細(xì)胞內(nèi)NADPH氧化酶的兩個(gè)亞基p22-phox以及gp91-phox水平的變化;③應(yīng)用SPSS 11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,c Tn I蛋白水平及分化前后細(xì)胞內(nèi)p22-phox及gp91-phox蛋白水平的比較采用t檢驗(yàn),Western blot結(jié)果目的條帶應(yīng)用軟件Image J進(jìn)行灰度值計(jì)算,檢驗(yàn)水準(zhǔn)取P=0.05。結(jié)果①P19細(xì)胞經(jīng)0.4%DMSO誘導(dǎo)分化,于第9天開始檢測(cè)到cTnI表達(dá)陽(yáng)性,第11天c Tn I表達(dá)高于第9天,同時(shí)第13天也高于第11天;經(jīng)0.9%DMSO誘導(dǎo)分化,于第7天開始檢測(cè)到c Tn I表達(dá)陽(yáng)性,第9天c Tn I表達(dá)高于第7天,同時(shí)第11天高于第9天,第13天也高于第11天,上述差異均具統(tǒng)計(jì)意義(P0.05);1.4%DMSO處理的P19細(xì)胞于誘導(dǎo)第三天大量凋亡,未能誘導(dǎo)成功。②分別經(jīng)0.4%DMSO和0.9%DMSO誘導(dǎo)的P19細(xì)胞,分化相同時(shí)間后者較前者c Tn I表達(dá)高,差異具統(tǒng)計(jì)意義(P0.05)。③P19細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化后細(xì)胞內(nèi)p22-phox及gp91-phox蛋白水平較分化前高,差異具統(tǒng)計(jì)意義(P0.05)。結(jié)論DMSO在一定條件下可誘導(dǎo)P19細(xì)胞在體外向心肌細(xì)胞分化;DMSO的誘導(dǎo)作用在一定范圍內(nèi)與其濃度成正相關(guān),然而濃度過高可以導(dǎo)致細(xì)胞凋亡;P19細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化后NADPH氧化酶亞基p22-phox及gp91-phox表達(dá)上調(diào),提示NADPH氧化酶水平增高,氧化應(yīng)激水平增加。
【關(guān)鍵詞】：P19細(xì)胞 NADPH 氧化酶 氧化應(yīng)激 心肌病 心肌細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R54
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 第一部分DMSO對(duì)體外誘導(dǎo)P19細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化的影響10-30
• 1.引言10-11
• 2.材料與方法11-21
• 3.結(jié)果21-27
• 4.討論27-28
• 5.結(jié)論28
• 6.參考文獻(xiàn)28-30
• 第二部分 體外誘導(dǎo)P19細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化后p22-phox及gp91-phox表達(dá)的變化30-47
• 1.引言30-33
• 2.材料與方法33-39
• 3.結(jié)果39-41
• 4.討論41-43
• 5.結(jié)論43
• 6.參考文獻(xiàn)43-47
• 附錄47-49
• 致謝49-50
• 綜述50-60
• 參考文獻(xiàn)57-60

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：959865