本文關(guān)鍵詞：缺血預(yù)處理對(duì)大鼠缺血再灌注心肌細(xì)胞損傷修復(fù)的影響及修復(fù)細(xì)胞來源的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的:缺血預(yù)處理(Ischemic Preconditioning,IPC)是一種對(duì)缺血再灌注心肌的內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制,主要通過抑制心肌細(xì)胞凋亡減少心肌梗死面積。但I(xiàn)PC是否能夠通過刺激細(xì)胞增殖,補(bǔ)充心肌細(xì)胞數(shù)量來修復(fù)受損心肌組織尚不明確。本研究通過建立大鼠缺血預(yù)處理模型,對(duì)細(xì)胞增殖指標(biāo)Ki67進(jìn)行檢測,觀察心肌細(xì)胞的增殖;通過檢測特異心肌早期轉(zhuǎn)錄因子Nkx2.5、GATA4以及干細(xì)胞標(biāo)記物c-Kit的表達(dá)水平,探究增殖細(xì)胞的來源。方法:1.動(dòng)物模型建立。雄性健康Vista大鼠,8周齡(220±25g),隨機(jī)分為3組:假手術(shù)組(Sham)、缺血再灌注組(I/R)、缺血預(yù)處理組(IPC)。于術(shù)后1天、3天、7天、14天處死大鼠并取材,分別對(duì)相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行檢測。2.心肌組織的形態(tài)學(xué)檢測。HE染色法觀察比較Sham、I/R和IPC組心肌組織的損傷程度。3.細(xì)胞增殖指標(biāo)Ki67的檢測。采用免疫熒光雙標(biāo)染色法和免疫組織化學(xué)SABC法檢測Ki67在處理組各時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)情況,并鏡下隨機(jī)選取十個(gè)視野對(duì)陽性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。4.心肌組織中新生心肌細(xì)胞來源的指標(biāo)分別用RT-PCR、western blot、免疫組織化學(xué)法檢測。(1)采用RT-PCR檢測特異心肌早期轉(zhuǎn)錄因子Nkx2.5、GATA4以及干細(xì)胞特異標(biāo)記物c-Kit的表達(dá);(2)運(yùn)用western blot檢測GATA4以及干細(xì)胞特異標(biāo)記物c-Kit的表達(dá);(3)組織水平利用免疫組織化學(xué)SABC法檢測GATA4、Nkx2.5的表達(dá),免疫熒光雙標(biāo)染色法檢測各時(shí)間點(diǎn)GATA4、Nkx2.5、c-Kit的表達(dá),統(tǒng)計(jì)陽性細(xì)胞數(shù)。結(jié)果:1.模型的建立。缺血成功判定:結(jié)扎過程ST段抬高;恢復(fù)血液的再灌,ST段恢復(fù)至正常。2.肌組織HE染色。對(duì)各組心肌組織行HE染色,于鏡下進(jìn)行觀察,Sham組心肌病理改變不明顯,肌纖維走行自然,排列整齊;I/R組心肌細(xì)胞明顯膨大,部分細(xì)胞胞膜及細(xì)胞核發(fā)生溶解,排列紊亂、炎性細(xì)胞浸潤顯著,而IPC組病理改變明顯減輕,肌纖維的排列相對(duì)整齊,細(xì)胞的腫脹減輕較明顯,炎性細(xì)胞在組織內(nèi)浸潤減少。3.心肌細(xì)胞增殖指標(biāo)Ki67檢測結(jié)果。(1)免疫組織化學(xué)SABC法檢測Ki67:Sham組的陽性細(xì)胞非常少,I/R組和IPC組的陽性細(xì)胞數(shù)在術(shù)后增多,但程度不同。與Sham組比較,術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)IPC組陽性細(xì)胞顯著增多具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。與I/R組比較,IPC組Ki67陽性細(xì)胞數(shù)在術(shù)后第三天和第七天具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。(2)Ki67免疫熒光雙標(biāo)染色法檢測檢測結(jié)果:IPC組與Sham組比較,在術(shù)后第一天,第三天和第七天陽性細(xì)胞數(shù)差異顯著(P0.05);術(shù)后第三天、第七天IPC組和I/R組比較也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.心肌組織中新生心肌細(xì)胞來源的檢測結(jié)果(1)m RNA水平檢測c-Kit、Nkx2.5、GATA4的表達(dá)結(jié)果:經(jīng)RT-PCR檢測,IPC組和I/R組,c-Kit、Nkx2.5和GATA-4的表達(dá)趨勢相近,確定IPC組c-Kit表達(dá)量峰值在第三天,I/R組出現(xiàn)在第七天,且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。(2)蛋白水平檢測c-Kit、GATA4的表達(dá)結(jié)果Sham組c-Kit、GATA4有微量的表達(dá)。IPC和I/R組表達(dá)量均有顯著增加。IPC與I/R組比較,二者表達(dá)水平于第一天,第三天和第七天比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(3)組織水平檢測Nkx2.5、GATA4的表達(dá)免疫組織化學(xué)SABC法檢測Nkx2.5、GATA4表達(dá):對(duì)照組Nkx2.5、GATA4幾乎沒有陽性結(jié)果,IPC組和I/R組陽性單位增加,其在術(shù)后顯著大于Sham組,IPC組在第一天,第三天和第七天與I/R組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。免疫熒光雙標(biāo)法檢測c-Kit、Nkx2.5、GATA4(c-Kit分別與Nkx2.5、GATA4組合):處理后各時(shí)間點(diǎn)Sham組兩指標(biāo)陽性單位均顯著少于IPC組和I/R組(P0.05)。組間比較,術(shù)后第一天,第三天和第七天陽性細(xì)胞數(shù)比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且IPC組的陽性細(xì)胞數(shù)在第三天達(dá)到峰值(P0.05)。結(jié)論:1.IPC可有效減少心肌梗死面積,減輕心肌梗死病理學(xué)改變。2.IPC可以增加細(xì)胞增殖特異性指標(biāo)Ki67的表達(dá),促進(jìn)心肌細(xì)胞再生。3.IPC及I/R使得Nkx2.5、GATA4、c-Kit陽性細(xì)胞數(shù)增加,但二者峰值出現(xiàn)時(shí)間不同,IPC組在第三天,I/R組在第七天,且IPC較I/R更能促進(jìn)相關(guān)指標(biāo)的陽性細(xì)胞數(shù)量增加。4.步判斷c-Kit陽性細(xì)胞可能作為新生心肌細(xì)胞的來源,分化為心肌細(xì)胞,參與受損心肌細(xì)胞的修復(fù)。
【關(guān)鍵詞】：缺血預(yù)處理 心肌細(xì)胞 增殖 來源 修復(fù)
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R54
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 常用縮寫詞中英文對(duì)照表12-13
• 前言13-16
• 第一部分 缺血預(yù)處理模型的建立16-24
• 1 材料與方法16-21
• 1.1 主要試劑與儀器16-18
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法18-21
• 2 結(jié)果21-22
• 2.1 模型的建立與鑒定21
• 2.2 不同處理的心肌組織病理學(xué)檢測21-22
• 3 討論22-23
• 4 結(jié)論23-24
• 第二部分 缺血預(yù)處理對(duì)心肌組織細(xì)胞增殖指標(biāo)Ki67 表達(dá)的影響及新生心肌細(xì)胞來源的實(shí)驗(yàn)研究24-48
• 1 材料與方法24-37
• 1.1 主要試劑與儀器24-29
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法29-36
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法36-37
• 2 結(jié)果37-43
• 2.1 免疫組織化學(xué)SABC法檢測Ki67 的表達(dá)37
• 2.2 免疫熒光雙標(biāo)染色法檢測Ki67 的表達(dá)37-38
• 2.3 mRNA水平c-Kit，Nkx2.5，GATA4 的表達(dá)38-39
• 2.4 蛋白水平c-Kit，，GATA4 的表達(dá)39-40
• 2.5 組織水平檢測c-Kit，Nkx2.5，GATA4 的表達(dá)40-43
• 3 討論43-47
• 4 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 綜述52-63
• 參考文獻(xiàn)59-63
• 致謝63-64
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果64-65
• 個(gè)人簡歷65

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 王力;湯楚中;朱智明;;心臟發(fā)育的信號(hào)調(diào)控與先天性心臟病的關(guān)系[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2013年11期

2 張e

本文編號(hào)：933099