本文關(guān)鍵詞：低血糖對(duì)缺氧心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用和機(jī)制研究

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【摘要】：目的通過(guò)建立離體大鼠心肌細(xì)胞缺氧模型,觀察低血糖水平對(duì)缺氧心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志蛋白(GRP78/BIP)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激感受蛋白(PERK、ATF-6、IRE-1)及凋亡信號(hào)分子(CHOP、Caspase-12)表達(dá)的影響,確定低血糖對(duì)缺氧心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的可能機(jī)制、作用靶點(diǎn)和信號(hào)通路,為進(jìn)一步探索缺氧狀態(tài)下促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡的危險(xiǎn)因素及降低心肌細(xì)胞凋亡率提供新論點(diǎn)、新方向。方法以大鼠H9C2心肌細(xì)胞系D26-D29(第26-29代)作為實(shí)驗(yàn)細(xì)胞,通過(guò)調(diào)節(jié)葡萄糖培養(yǎng)基濃度模擬人體血糖濃度,并于缺氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)以建立心肌細(xì)胞缺氧模型,依據(jù)隨機(jī)原則將細(xì)胞分為4組,分別為:正常血糖不缺氧組(SN組):18mmol/L糖濃度培養(yǎng)基、正常培養(yǎng);正常血糖缺氧組(MN組):18mmol/L糖濃度培養(yǎng)基、缺氧培養(yǎng);低血糖不缺氧組(SL組):3mmol/L糖濃度培養(yǎng)基、正常培養(yǎng);低血糖缺氧組(ML組):3mmol/L糖濃度培養(yǎng)基、缺氧培養(yǎng)。通過(guò)采用Western Blot法和Real-time PCR法檢測(cè)各組H9C2大鼠心肌細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志蛋白(GRP78/BIP)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激感受蛋白(PERK、ATF-6、IRE-1)和凋亡信號(hào)分子(CHOP、Caspase-12)的表達(dá)情況,從而探討心肌細(xì)胞在缺氧狀態(tài)下內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在細(xì)胞凋亡中所呈現(xiàn)的變化規(guī)律,以及低血糖對(duì)缺氧心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制和途徑。結(jié)果1低血糖不缺氧組GRP78/BIP、PERK、ATF-6、IRE-1、CHOP及Caspase-12蛋白的表達(dá)高于正常血糖不缺氧組,差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);2正常血糖缺氧組GRP78/BIP、PERK、ATF-6、IRE-1、CHOP及Caspase-12蛋白的表達(dá)高于正常血糖不缺氧組,差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);3低血糖缺氧組GRP78/BIP、PERK、ATF-6、IRE-1、CHOP及Caspase-12蛋白的表達(dá)高于正常血糖缺氧組,差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);4在基因表達(dá)方面,低血糖缺氧組GRP78/BIP m RNA、PERK m RNA、ATF-6 m RNA、IRE-1m RNA、CHOP m RNA及Caspase-12m RNA的表達(dá)均高于正常血糖缺氧組,差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),這與該組上述6種目的蛋白的表達(dá)趨勢(shì)是一致的。結(jié)論本研究通過(guò)建立H9C2大鼠心肌細(xì)胞缺氧模型,證實(shí)了心肌細(xì)胞缺氧后存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及其誘導(dǎo)的相關(guān)凋亡通路;而低血糖加重了缺氧心肌細(xì)胞的凋亡,其可能機(jī)制是低血糖通過(guò)誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)介導(dǎo)的PERK、IRE-1、ATF-6 3條信號(hào)通路促進(jìn)了缺氧心肌細(xì)胞凋亡的發(fā)生與發(fā)展。
【關(guān)鍵詞】：缺氧 低血糖 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 H9C2細(xì)胞 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R542.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 引言12-15
• 第1章 實(shí)驗(yàn)研究15-54
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料15-19
• 1.1.1 研究對(duì)象15
• 1.1.2 主要試劑及儀器15-19
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法19-29
• 1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)19-20
• 1.2.2 種板20
• 1.2.3 同步化20
• 1.2.4 實(shí)驗(yàn)分組20-21
• 1.2.5 缺氧模型制備21-22
• 1.2.6 Western Blot檢測(cè)目的蛋白的表達(dá)水平22-25
• 1.2.7 Real-time PCR檢測(cè)目的基因m RNA轉(zhuǎn)錄水平25-29
• 1.2.8 Western Blot條帶分析29
• 1.2.9 統(tǒng)計(jì)方法29
• 1.3 結(jié)果29-44
• 1.3.1 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察29-30
• 1.3.2 Western Blot檢測(cè)各目的蛋白的表達(dá)變化30-36
• 1.3.3 Real-time PCR檢測(cè)目的基因m RNA轉(zhuǎn)錄水平36-44
• 1.4 討論44-50
• 1.4.1 H9C2大鼠心肌細(xì)胞缺氧模型評(píng)價(jià)44-45
• 1.4.2 缺氧后心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用和可能機(jī)制45-48
• 1.4.3 低血糖對(duì)缺氧心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用和可能機(jī)制48-50
• 1.5 本章小結(jié)50
• 參考文獻(xiàn)50-54
• 第2章 綜述54-62
• 2.1 ERS54-56
• 2.1.1 概述54
• 2.1.2 ERS激活的信號(hào)通路54-56
• 2.2 ERS與IHD56-57
• 2.3 血糖異常與ERS57-59
• 2.3.1 高血糖對(duì)ERS的調(diào)節(jié)作用57-58
• 2.3.2 低血糖對(duì)ERS的調(diào)節(jié)作用58-59
• 2.4 總結(jié)與展望59
• 參考文獻(xiàn)59-62
• 結(jié)論62-63
• 致謝63-64
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介64-65
• 作者簡(jiǎn)介65-66
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集66

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1 石彥榮,王述Y，

本文編號(hào)：901055