本文關鍵詞：低血糖對缺氧心肌細胞內質網應激介導細胞凋亡的作用和機制研究

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【摘要】：目的通過建立離體大鼠心肌細胞缺氧模型,觀察低血糖水平對缺氧心肌細胞內質網應激標志蛋白(GRP78/BIP)、內質網應激感受蛋白(PERK、ATF-6、IRE-1)及凋亡信號分子(CHOP、Caspase-12)表達的影響,確定低血糖對缺氧心肌細胞內質網應激介導的細胞凋亡的可能機制、作用靶點和信號通路,為進一步探索缺氧狀態(tài)下促進心肌細胞凋亡的危險因素及降低心肌細胞凋亡率提供新論點、新方向。方法以大鼠H9C2心肌細胞系D26-D29(第26-29代)作為實驗細胞,通過調節(jié)葡萄糖培養(yǎng)基濃度模擬人體血糖濃度,并于缺氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)以建立心肌細胞缺氧模型,依據(jù)隨機原則將細胞分為4組,分別為:正常血糖不缺氧組(SN組):18mmol/L糖濃度培養(yǎng)基、正常培養(yǎng);正常血糖缺氧組(MN組):18mmol/L糖濃度培養(yǎng)基、缺氧培養(yǎng);低血糖不缺氧組(SL組):3mmol/L糖濃度培養(yǎng)基、正常培養(yǎng);低血糖缺氧組(ML組):3mmol/L糖濃度培養(yǎng)基、缺氧培養(yǎng)。通過采用Western Blot法和Real-time PCR法檢測各組H9C2大鼠心肌細胞中內質網應激標志蛋白(GRP78/BIP)、內質網應激感受蛋白(PERK、ATF-6、IRE-1)和凋亡信號分子(CHOP、Caspase-12)的表達情況,從而探討心肌細胞在缺氧狀態(tài)下內質網應激在細胞凋亡中所呈現(xiàn)的變化規(guī)律,以及低血糖對缺氧心肌細胞內質網應激介導的心肌細胞凋亡的作用機制和途徑。結果1低血糖不缺氧組GRP78/BIP、PERK、ATF-6、IRE-1、CHOP及Caspase-12蛋白的表達高于正常血糖不缺氧組,差別具有統(tǒng)計學意義(P0.05);2正常血糖缺氧組GRP78/BIP、PERK、ATF-6、IRE-1、CHOP及Caspase-12蛋白的表達高于正常血糖不缺氧組,差別具有統(tǒng)計學意義(P0.05);3低血糖缺氧組GRP78/BIP、PERK、ATF-6、IRE-1、CHOP及Caspase-12蛋白的表達高于正常血糖缺氧組,差別具有統(tǒng)計學意義(P0.05);4在基因表達方面,低血糖缺氧組GRP78/BIP m RNA、PERK m RNA、ATF-6 m RNA、IRE-1m RNA、CHOP m RNA及Caspase-12m RNA的表達均高于正常血糖缺氧組,差別具有統(tǒng)計學意義(P0.05),這與該組上述6種目的蛋白的表達趨勢是一致的。結論本研究通過建立H9C2大鼠心肌細胞缺氧模型,證實了心肌細胞缺氧后存在內質網應激及其誘導的相關凋亡通路;而低血糖加重了缺氧心肌細胞的凋亡,其可能機制是低血糖通過誘導內質網應激反應介導的PERK、IRE-1、ATF-6 3條信號通路促進了缺氧心肌細胞凋亡的發(fā)生與發(fā)展。
【關鍵詞】：缺氧 低血糖 內質網應激 H9C2細胞 細胞凋亡
【學位授予單位】：華北理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R542.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 引言12-15
• 第1章 實驗研究15-54
• 1.1 實驗材料15-19
• 1.1.1 研究對象15
• 1.1.2 主要試劑及儀器15-19
• 1.2 實驗方法19-29
• 1.2.1 細胞培養(yǎng)19-20
• 1.2.2 種板20
• 1.2.3 同步化20
• 1.2.4 實驗分組20-21
• 1.2.5 缺氧模型制備21-22
• 1.2.6 Western Blot檢測目的蛋白的表達水平22-25
• 1.2.7 Real-time PCR檢測目的基因m RNA轉錄水平25-29
• 1.2.8 Western Blot條帶分析29
• 1.2.9 統(tǒng)計方法29
• 1.3 結果29-44
• 1.3.1 細胞形態(tài)學觀察29-30
• 1.3.2 Western Blot檢測各目的蛋白的表達變化30-36
• 1.3.3 Real-time PCR檢測目的基因m RNA轉錄水平36-44
• 1.4 討論44-50
• 1.4.1 H9C2大鼠心肌細胞缺氧模型評價44-45
• 1.4.2 缺氧后心肌細胞內質網應激介導細胞凋亡的作用和可能機制45-48
• 1.4.3 低血糖對缺氧心肌細胞內質網應激介導細胞凋亡的作用和可能機制48-50
• 1.5 本章小結50
• 參考文獻50-54
• 第2章 綜述54-62
• 2.1 ERS54-56
• 2.1.1 概述54
• 2.1.2 ERS激活的信號通路54-56
• 2.2 ERS與IHD56-57
• 2.3 血糖異常與ERS57-59
• 2.3.1 高血糖對ERS的調節(jié)作用57-58
• 2.3.2 低血糖對ERS的調節(jié)作用58-59
• 2.4 總結與展望59
• 參考文獻59-62
• 結論62-63
• 致謝63-64
• 導師簡介64-65
• 作者簡介65-66
• 學位論文數(shù)據(jù)集66

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1 石彥榮,王述Y，

本文編號：901055