本文關(guān)鍵詞：線粒體Cx43在動脈粥樣硬化中的作用與機制

  更多相關(guān)文章： Atherosclerosis VSMCs Endothelial cells mitochondria Cx43 ERK1/2 PDGF-BB

【摘要】：目的:探討線粒體Cx43在動脈粥樣硬化中的作用與信號通路機制。方法:實驗建立兩個模型,①PDGF-BB刺激VSMCs增殖模型,分為3個小組:a.對照組,b.PDGF-BB組,c.PD98059+PDGF-BB組;②建立血管平滑肌細胞-內(nèi)皮細胞共培養(yǎng)模型(VSMCs-ECs Co-culture model),分為兩個小組:a.對照組,b.TNF-α組。采用MTT比色法檢測各組VSMCs活性;熒光探針檢測活性氧Reactive oxygen species(ROS);Western blot檢測各組血管平滑肌細胞線粒體Cx43蛋白表達。結(jié)果:1.VSMCs增殖模型結(jié)果顯示:①MTT實驗結(jié)果顯示:PDGF-BB組較control組吸光度值顯著增加(P0.05),PD98059+PDGF-BB組較control組吸光度值顯著減小(P0.05);PD98059+PDGF-BB組較PDGF-BB組吸光度值顯著降低(P0.01);②熒光探針檢測活性氧,熒光強弱與活性氧多少成正比。PDGF-BB組較control組,綠色熒光增強,提示活性氧增加。PD98059+PDGF-BB組綠色熒光較control組和PDGF-BB組減弱,提示活性氧減少;③Western blot結(jié)果:PDGF-BB組control組線粒體Cx43蛋白表達顯著升高(P0.01),PD98059+PDGF-BB組比control組線粒體Cx43蛋白表達顯著減少(P0.05),PD98059+PDGF-BB組比PDGF-BB組線粒體Cx43蛋白表達顯著減少(P0.01)。2.VSMCs-ECs共培養(yǎng)模型結(jié)果顯示:①MTT實驗結(jié)果顯示:TNF-α組較control組吸光度值顯著增加(P0.05);②熒光探針檢測活性氧:TNF-α組與control組相比,綠色熒光強度增強,提示活性氧增加;③Western blot結(jié)果:TNF-α組與control組相比,線粒體Cx43蛋白表達顯著升高(P0.01)。結(jié)論:1.PDGF-BB誘導(dǎo)VSMCs增殖及VSMCs-ECs共培養(yǎng)模型能明顯增強VSMCs增殖能力,增加ROS含量,上調(diào)線粒體Cx43表達。2.ERK1/2途徑參與了ROS含量增加及線粒體Cx43表達上調(diào)。3.研究結(jié)果為AS的防治提供了新的思路。
【關(guān)鍵詞】：Atherosclerosis VSMCs Endothelial cells mitochondria Cx43 ERK1/2 PDGF-BB
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R543.5
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮略詞表9-10
• 第1章 前言10-12
• 第2章 實驗材料與儀器12-16
• 2.1 實驗材料12-14
• 2.1.1 主要購置試劑12-13
• 2.1.2 主要配置溶液13-14
• 2.2 主要儀器設(shè)備14-16
• 第3章 實驗方法16-24
• 3.1 VSMCs細胞培養(yǎng)16-17
• 3.1.1 VSMCs傳代培養(yǎng)16
• 3.1.2 VSMCs細胞凍存16-17
• 3.1.3 VSMCs細胞復(fù)蘇17
• 3.2 VSMCs增殖模型17-18
• 3.2.1 VSMCs接種17
• 3.2.2 建立模型17-18
• 3.3 VSMCs與ECs共培養(yǎng)模型18
• 3.3.1 共培養(yǎng)模型建立18
• 3.3.2 實驗分組18
• 3.4 Western blot檢測線粒體Cx43 蛋白18-22
• 3.4.1 樣品蛋白制備18-19
• 3.4.2 樣品蛋白含量測定19
• 3.4.3 配膠19-20
• 3.4.4 灌膠和上樣20
• 3.4.5 垂直電泳20
• 3.4.6 轉(zhuǎn)膜20-21
• 3.4.7 樣品蛋白免疫反應(yīng)21
• 3.4.8 樣品蛋白化學發(fā)光及曝光21
• 3.4.9 膜再生21-22
• 3.4.10 內(nèi)參蛋白 β ATP Sythase免疫反應(yīng)22
• 3.4.11 圖像分析22
• 3.5 MTT比色法測定細胞活性22-23
• 3.5.1 VSMCs增殖模型22
• 3.5.2 共培養(yǎng)模型22-23
• 3.6 熒光探針活性氧檢測23
• 3.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計學處理23-24
• 第4章 結(jié)果24-28
• 4.1 VSMCs增殖模型24-26
• 4.2 VSMCs-ECs共培養(yǎng)模型26-28
• 第5章 討論28-31
• 5.1 VSMCs增殖與AS28
• 5.2 線粒體中的Cx4328-29
• 5.3 ERK1/2 通路與VSMCs增殖29-30
• 5.4 ROS與VSMCs增殖30
• 5.5 展望30-31
• 第6章 結(jié)論31-32
• 致謝32-33
• 參考文獻33-38
• 攻讀碩士學位期間取得的學術(shù)成果38-39
• 綜述39-45
• 參考文獻43-45

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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本文編號：867685