本文關(guān)鍵詞：高基質(zhì)金屬蛋白酶-9大鼠心室重構(gòu)模型的建立及評(píng)價(jià)

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【摘要】：研究背景心室重構(gòu)(ventricular remodeling)是指心室由于心肌損傷或者負(fù)荷增加,導(dǎo)致的心肌結(jié)構(gòu)、功能及表型的變化所產(chǎn)生的形狀、大小、組織結(jié)構(gòu)和室壁厚度等一系列變化,心室重構(gòu)包括細(xì)胞重構(gòu)(即心肌細(xì)胞本身結(jié)構(gòu)、代謝及功能異常改變)和細(xì)胞外基質(zhì)(extracellarmatrix,ECM)重構(gòu)(主要是膠原合成和降解之間動(dòng)態(tài)平衡的破壞,促使膠原沉積或降解)。心室重構(gòu)主要表現(xiàn)為心肌細(xì)胞肥大、成纖維細(xì)胞增殖、心肌細(xì)胞內(nèi)成分改變和ECM基質(zhì)膠原的堆積引起的心肌纖維化。基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix metalloproteinases,MMPs)是一組可以特異地降解細(xì)胞外基質(zhì)成分的Zn2+依賴的酶家族,心肌中的MMPs能夠分解心臟中的基質(zhì)成分,是心室重構(gòu)中基質(zhì)降解的重要推動(dòng)力量[2]。MMP-9是MMPs的一種,又稱為明膠酶B,在心室肌中含量豐富,過去研究發(fā)現(xiàn),多種心室重構(gòu)疾病狀態(tài)伴有心肌MMP-9水平的增高,例如,心肌梗死、擴(kuò)張型心肌病、心肌炎等疾病狀態(tài)下常常伴有心肌中MMP-9水平的增高;通過調(diào)節(jié)MMP-9水平或進(jìn)行疾病的治療降低MMP-9可使心室重構(gòu)發(fā)生改變。因此,高M(jìn)MP-9與心室重構(gòu)可能有密切的關(guān)系,但是心肌中MMP-9水平的增高如何影響心室重構(gòu),具體機(jī)制尚不清楚。良好的高M(jìn)MP-9心室重構(gòu)動(dòng)物模型對(duì)該類疾病心室重構(gòu)的機(jī)制和防治研究具有重要的意義。然而,迄今為止,大多數(shù)高M(jìn)MP-9模型是某種疾病的心室重構(gòu)模型,其高M(jìn)MP-9狀態(tài)是一種伴隨狀態(tài)還是病因尚不確定。為了更好地研究MMP-9在心室重構(gòu)中的作用,一個(gè)明確的由高M(jìn)MP-9導(dǎo)致的心室重構(gòu)模型十分必要。鑒于我們前期研究發(fā)現(xiàn)給予外源性MMP-9可以引起大鼠心室重構(gòu),本研究擬在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討輸入外源性MMP-9來構(gòu)建高M(jìn)MP-9心室重構(gòu)大鼠模型的方法,為高M(jìn)MP-9心室重構(gòu)的研究提供一種方便、價(jià)廉的工具。目的探討輸入外源性MMP-9構(gòu)建高M(jìn)MP-9心室重構(gòu)大鼠模型的方法,為高M(jìn)MP-9心室重構(gòu)的研究提供一種方便、價(jià)廉的工具。方法將48只SPF級(jí)健康8周齡雄性wistar大鼠(體重160~200g),按體重分層隨機(jī)分4組,每組各12只。對(duì)照組(生理鹽水2ml);模型組:MMP-9低劑量組(重組大鼠MMP-9,0.7ng/體重(g),2ml);MMP-9中劑量組(重組大鼠MMP-9,1.4ng/體重(g),2ml);MMP-9高劑量組(重組大鼠MMP-9,2.1ng/體重(g),2ml),腹腔注射,每周2次,連續(xù)注射至第4周末,隨機(jī)抽取每組中的6只大鼠,結(jié)束實(shí)驗(yàn),作為第一階段組(n=24);各組剩余的6只大鼠繼續(xù)注射至第8周末,結(jié)束實(shí)驗(yàn),作為第二階段組(n=24)。1.實(shí)驗(yàn)前1天、第一階段組的實(shí)驗(yàn)第28天以及第二階段組的第56天予無創(chuàng)尾動(dòng)脈血壓計(jì)進(jìn)行血壓測(cè)量。兩階段組分別在測(cè)量血壓后予心臟彩超檢查大鼠的左室大體結(jié)構(gòu)【左室舒張末期內(nèi)徑(LVIDd)、舒張末期容積(LVEDV)、收縮末期內(nèi)徑(LVIDs)、收縮末期容積(LVESV)。】和左室功能【短軸縮短率(LVFS)、心排血量(CO)、每搏輸出量(SV)、左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)、二尖瓣血流E峰、A峰的比值(E/A)、心率(HR)】。2.用ELISA法檢測(cè)血清MMP-9水平;分離左室稱重并計(jì)算左室重量指數(shù)(LVWI=左室重量mg/體重g);左室心肌組織切片行HE(蘇木素-伊紅)染色觀察光鏡下心肌細(xì)胞及間質(zhì)的變化;VG(苦味酸-酸性品紅)染色觀察心肌間質(zhì)膠原分布。圖像分析法測(cè)定心肌膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF);免疫印跡法(western blotting)檢測(cè)心肌中MMP-9水平;RT-PCR法檢測(cè)心肌中MMP-9m RNA的表達(dá)。結(jié)果1.大鼠一般情況及存活率模型組與對(duì)照組大鼠比較,精神狀態(tài)、進(jìn)食量、活動(dòng)量、體重增長(zhǎng)程度均無明顯異常。模型組及對(duì)照組大鼠在實(shí)驗(yàn)觀察時(shí)間均存活,存活率為100%。2.各組大鼠的基線水平各組大鼠的初始平均體重水平未見明顯差異,實(shí)驗(yàn)前1天測(cè)量的各組大鼠的血壓基線水平均無明顯差異。3.心肌組織MMP-9蛋白水平的改變第一階段:與對(duì)照組相比,高劑量組心肌MMP-9水平顯著增高(p0.05);低、中劑量組心肌MMP-9水平均有增高趨勢(shì)(p0.05)。模型組內(nèi)比較,高劑量組心肌MMP-9水平明顯高于低劑量組(p0.05)。第二階段:與對(duì)照組相比,中、高劑量組心肌MMP-9水平均顯著增高(P0.05),低劑量組心肌MMP-9水平有增高趨勢(shì)(p0.05)。模型組內(nèi)比較,高劑量組心肌MMP-9水平明顯高于低劑量組(p0.05)。4.血清中MMP-9蛋白水平的改變第一階段:與對(duì)照組相比,中、高劑量組血清MMP-9水平均顯著增高(p0.05),低劑量組血清MMP-9水平有增高趨勢(shì)(p0.05)。模型組內(nèi)比較,高劑量組血清MMP-9水平明顯高于低劑量組(p0.05)。第二階段:與對(duì)照組相比,低、中、高劑量組血清MMP-9水平均顯著增高(p0.05)。模型組內(nèi)比較,高劑量組血清MMP-9水平明顯高于低劑量組(p0.05)。5.心肌組織MMP-9m RNA的表達(dá)第一階段:與對(duì)照組相比,除低劑量組外,中、高劑量組心肌MMP-9m RNA表達(dá)均顯著增高(p0.05),模型組內(nèi)比較,差異不明顯(p0.05)。第二階段:與對(duì)照組相比,低、中、高劑量組心肌MMP-9m RNA表達(dá)水平均無明顯變化(p0.05),模型組內(nèi)比較,差異不明顯(p0.05)。6.心室重構(gòu)的改變6.1左室重量指數(shù)的改變第一階段:與對(duì)照組相比,高劑量組LVWI顯著增高(p0.05)。低、中劑量組LVWI均增高趨勢(shì)(p0.05)。模型組內(nèi)比較,高劑量組LVWI明顯高于低劑量組(p0.05)。第二階段:與對(duì)照組相比,高劑量組LVWI顯著增高(p0.05)。低、中劑量組LVWI均增高趨勢(shì)(p0.05)。模型組內(nèi)比較,高劑量組LVWI明顯高于低劑量組(p0.05)。6.2心臟大體結(jié)構(gòu)與功能的改變第一階段:心臟超聲發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組相比,低、中、高劑量組心臟結(jié)構(gòu)和功能指標(biāo)均未達(dá)到顯著差異(p0.05)。第二階段:心臟超聲發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組相比,中、高劑量組LVEDV和LVIDd顯著增大(p0.05),低劑量組LVEDV和LVIDd有增大趨勢(shì)(p0.05)。模型組內(nèi)比較,高劑量組LVEDV和LVIDd均顯著大于低劑量組(p0.05);各組結(jié)構(gòu)和功能指標(biāo)的其他指標(biāo)未見明顯差異。6.3心肌組織病理形態(tài)學(xué)的改變1)形態(tài)學(xué)改變(HE染色):第一階段:與對(duì)照組相比,中、高劑量組大鼠心肌細(xì)胞明顯肥大、排列紊亂,部分心肌纖維斷裂,胞漿溶解壞死。低劑量組心肌細(xì)胞與對(duì)照組相比,無明顯改變。第二階段:與對(duì)照組相比,模型組大鼠均可見心肌纖維斷裂、缺損、肌溶解,心肌細(xì)胞消失。2)心肌間質(zhì)膠原變化(VG染色):第一階段:與對(duì)照組相比,高劑量組心肌間質(zhì)CVF顯著降低(p0.05),低、中劑量組CVF均有降低趨勢(shì)(p0.05)。模型組內(nèi)比較,差異不明顯(p0.05)。第二階段:與對(duì)照組相比,中、高劑量組心肌間質(zhì)CVF均顯著降低(p0.05),低劑量組CVF有降低趨勢(shì)(p0.05)。模型組內(nèi)比較,高劑量組較低劑量組CVF顯著下降(p0.05)。7.血壓的改變第一階段:與對(duì)照組相比,高劑量組收縮壓及舒張壓水平均顯著增高(p0.05),低、中劑量組收縮壓及舒張壓水平均有上升趨勢(shì)(p0.05)。第二階段:與對(duì)照組相比,除低劑量組外,中、高劑量組收縮壓及舒張壓水平均顯著增高(p0.05)。模型組內(nèi)比較,高劑量組較低劑量組收縮壓及舒張壓水平顯著增高(p0.05)。8.制作高M(jìn)MP-9心室重構(gòu)模型的成功率以對(duì)照組的水平作為標(biāo)準(zhǔn),心肌組織MMP-9蛋白水平≥均數(shù)+2倍標(biāo)準(zhǔn)差、LVEDV≥均數(shù)+2倍標(biāo)準(zhǔn)差、CVF≤均數(shù)-2倍標(biāo)準(zhǔn)差作為標(biāo)準(zhǔn)。第二階段高劑量模型組構(gòu)建高M(jìn)MP-9心室重構(gòu)模型的成功率最高,達(dá)到83%。結(jié)論通過注射外源性MMP-9可以成功制作高M(jìn)MP-9大鼠心室重構(gòu)模型,制作模型的較佳方案推薦為:劑量2.1ng/g(體重),每周2次,周期8周。
【關(guān)鍵詞】：基質(zhì)金屬蛋白酶-9 心室重構(gòu) 動(dòng)物模型 大鼠
【學(xué)位授予單位】：廣東藥學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R54
【目錄】：

• 中文摘要4-9
• ABSTRACT9-15
• 引言15-17
• 材料與方法17-28
• 1. 材料17-19
• 2. 方法19-27
• 3. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析27-28
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-44
• 1. 大鼠一般情況及存活率28
• 2. 各組大鼠的基線水平28
• 3. 左室心肌組織MMP-9蛋白水平的變化28-30
• 4. 血清中MMP-9蛋白水平的變化30
• 5. 心肌組織MMP-9MRNA的表達(dá)30-31
• 6.心室重構(gòu)的改變31-38
• 6.1 左室重量指數(shù)的改變31-32
• 6.2.心臟大體結(jié)構(gòu)與功能的改變32-35
• 6.3 心肌組織病理形態(tài)學(xué)的改變35-38
• 7.血壓的變化38-42
• 8. 制作高M(jìn)MP-9心室重構(gòu)模型的成功率評(píng)價(jià)42-44
• 討論44-48
• 1.關(guān)于注射外源性MMP-9能否成功制作大鼠高M(jìn)MP-9心室重構(gòu)模型44
• 2.本研究模型組心室重構(gòu)是否由于輸入外源性MMP-9導(dǎo)致體內(nèi)MMP-9增高所致？44
• 3.輸入MMP-9造成心室重構(gòu)的機(jī)制是什么？44-46
• 4.關(guān)于本研究制作高M(jìn)MP-9心室重構(gòu)模型的方法學(xué)評(píng)價(jià)46
• 5.展望46-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-52
• 綜述52-59
• 參考文獻(xiàn)56-59
• 攻讀學(xué)位期間主要研究成果59-60
• 中英文縮略語(yǔ)對(duì)照60-61
• 致謝61

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

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本文編號(hào)：865785