本文關(guān)鍵詞：Exendin-4減輕脂肪來源間充質(zhì)干細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的機(jī)制研究

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【摘要】：目的：心肌梗死是危害人類健康的頭號(hào)殺手。由于冠狀動(dòng)脈的持續(xù)阻塞,導(dǎo)致心肌出現(xiàn)缺血性壞死,隨后形成疤痕修復(fù),并緩慢進(jìn)展為心功能不全。常用的治療手段如介入治療、外科動(dòng)脈搭橋術(shù)等可以通過開通受阻血管、恢復(fù)血流,從而顯著降低心肌缺血的程度和范圍。但是這些方法都無法從根本上挽救已經(jīng)壞死的心肌。近20年來,干細(xì)胞移植技術(shù)通過再生心肌及旁分泌功能,修復(fù)心梗后壞死損傷的組織細(xì)胞,成為改善患者心功能和臨床預(yù)后的治療方法之一。在各種種子細(xì)胞中,脂肪來源間充質(zhì)干細(xì)胞(ADMSCs)已被很多臨床和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)可以優(yōu)化心梗后的治療,國(guó)外正在進(jìn)行兩個(gè)有關(guān)ADMSCs臺(tái)療的臨床Ⅰ期試驗(yàn)。然而,人們發(fā)現(xiàn)限制ADMSCs在臨床上進(jìn)一步應(yīng)用的主要難題在于心梗后移植的細(xì)胞在一周內(nèi)大量死亡,從而導(dǎo)致了移植效率低下。其主要機(jī)制是由于移植后的細(xì)胞不耐受心梗后的氧化應(yīng)激微環(huán)境,進(jìn)而出現(xiàn)細(xì)胞凋亡壞死。因此,探討氧化應(yīng)激致細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵信號(hào)通路并以此為靶點(diǎn)來提高細(xì)胞抗氧化應(yīng)激損傷的能力是目前的研究熱點(diǎn)。Exendin-4是GLP-1類似物,擁有減輕炎癥反應(yīng)、抗氧化應(yīng)激等多種細(xì)胞保護(hù)效應(yīng),本研究旨在闡明氧化應(yīng)激介導(dǎo)ADMSCs凋亡的關(guān)鍵信號(hào)通路;通過Exendin-4干預(yù)來降低ADMSCs氧化應(yīng)激損傷,提高ADMSCs的存活能力。方法：從大鼠腹股溝處的脂肪組織提取ADMSCs,流式細(xì)胞學(xué)及多向分化潛能檢測(cè)鑒定ADMSCs;觀察不同濃度Exendin-4對(duì)ADMSCs體外增殖能力的影響及細(xì)胞表面GLP.1R受體表達(dá)的影響;建立過氧化氫誘導(dǎo)氧化應(yīng)激凋亡模型,明確caspase9介導(dǎo)的線粒體凋亡通路在細(xì)胞凋亡中的作用：使用Exendin-4干預(yù)過氧化氫誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷凋亡過程,利用通路阻斷劑和干擾RNA技術(shù),闡明PI3K/Akt-Sfrp2在Exendin-4抗凋亡過程中的機(jī)制。結(jié)果：1.分離培養(yǎng)的ADMSCs表面抗原為CD31-、CD34-、CD45-、CD29+、 CD90+。2.ADMSCs能夠在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中向骨及脂肪細(xì)胞分化。3.Exendin-4能夠以劑量依賴方式提高體外培養(yǎng)時(shí)ADMSCs的數(shù)目。4.過氧化氫處理提高ADMSCs凋亡細(xì)胞的數(shù)量,胞內(nèi)ROS、MDA的水平提高而GSH和SOD的含量下降,同時(shí)線粒體膜電位表現(xiàn)為低電勢(shì),細(xì)胞色素C滲漏至胞質(zhì)胞核中;凋亡蛋白(Bax、caspase9和caspase3)表達(dá)上調(diào),保護(hù)性蛋白(Bcl-2、c-IAP1和c-IAP2)表達(dá)下降。5. Exendin-4預(yù)處理后降低過氧化氫條件下凋亡細(xì)胞數(shù)目,同時(shí)上調(diào)GSH和SOD而抑制胞內(nèi)ROS和MDA含量;維持線粒體正常高電位,抑制細(xì)胞色素C的滲漏;下調(diào)凋亡蛋白并提高保護(hù)性蛋白的表達(dá)。6.Exendin-4可以借由PI3K/Akt信號(hào)途徑激活Sfip2,使用LY294002阻斷PI3K/Akt通路或是使用siRNA敲低Sfrp2的表達(dá)可以抑制Exendin-4對(duì)ADMSCs線粒體膜電位、凋亡相關(guān)蛋白的調(diào)控作用,逆轉(zhuǎn)Exendin-4的抗凋亡作用。結(jié)論：1.Exendin-4能夠以劑量依賴方式促進(jìn)ADMSCs在體外的增殖。2.氧化應(yīng)激通過caspase9相關(guān)的線粒體死亡通路介導(dǎo)ADMSCs的凋亡。3.Exendin-4能夠通過提高ADMSCs內(nèi)源性抗氧化能力進(jìn)而降低氧化應(yīng)激條件下過多的ROS,并通過PI3K/Akt-Sfrp2信號(hào)通路提高保護(hù)性蛋白表達(dá)進(jìn)而封閉線粒體凋亡通路的激活,最終抑制氧化應(yīng)激所致的ADMSCs凋亡。
【關(guān)鍵詞】：氧化應(yīng)激 脂肪來源間充質(zhì)干細(xì)胞 艾塞那肽 線粒體凋亡通路 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R542.22
【目錄】：

• 縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-13
• 第一部分 Exendin-4對(duì)ADMSCs生物學(xué)特性的影響13-26
• 1 材料14-16
• 2 方法16-18
• 3 結(jié)果18-23
• 4 討論23-25
• 5 結(jié)論25-26
• 第二部分 Exendin-4減輕MSCs氧化應(yīng)激損傷機(jī)制研究26-48
• 1 材料27-30
• 2 方法30-34
• 3 結(jié)果34-45
• 4 討論45-48
• 5 結(jié)論48
• 參考文獻(xiàn)48-64
• 文獻(xiàn)綜述64-74
• 參考文獻(xiàn)68-74
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況74-75
• 致謝75

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