本文關(guān)鍵詞：血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子對(duì)肌漿網(wǎng)鈣泵活性的影響及其對(duì)心肌梗死的保護(hù)作用

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【摘要】：研究背景及目的VEGF-A是VEGF家族成員中最具有特征性的,其在組織和細(xì)胞中的含量最多,且功能最強(qiáng)。VEGF-A分為5種亞型,其中VEGF165是最為代表性、最為重要的同分異構(gòu)體。VEGF165主要調(diào)控其受體VEGFR2的表達(dá),從而改善心肌纖維的重構(gòu),AMI后VEGF通過(guò)結(jié)合VEGFR2來(lái)發(fā)揮其主要生物學(xué)作用。VEGF-A已被證實(shí)具有抗凋亡的作用,能維持新生血管及新生心肌細(xì)胞的穩(wěn)定性。VEGF與VEGFR2結(jié)合后激活磷脂酶C(phospholipase C,PLC),進(jìn)而導(dǎo)致三磷酸肌醇(inositol 1,4,5-triphosphate,IP3)的形成,IP3引發(fā)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度升高。心肌細(xì)胞SERCA可將Ca2+泵回肌質(zhì)網(wǎng)內(nèi),調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+的濃度,調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞的舒縮性。SERCA的活性受胞質(zhì)內(nèi)游離Ca2+濃度調(diào)節(jié),Ca2+濃度增加,SERCA的活性隨之增加。其與貯存蛋白結(jié)合并儲(chǔ)存,是一種自身調(diào)節(jié)機(jī)制。因此,我們猜測(cè)VEGF與SERCA之間存在某種必然的聯(lián)系,其作用橋梁很可能同Ca2+相關(guān)。為驗(yàn)證這一猜想,我們研究了VEGF對(duì)SERCA活性的影響及其作用機(jī)制。研究方法首先培養(yǎng)293細(xì)胞,將重組腺病毒轉(zhuǎn)染該細(xì)胞后擴(kuò)增純化,用綠色熒光蛋白標(biāo)記法測(cè)定腺病毒滴度。將6周齡ICR小鼠隨機(jī)分為sham組,Ad-VEGF組,Ad-GFP組,SU5416組,然后對(duì)后三組采取結(jié)扎心臟冠狀動(dòng)脈前降支法制備小鼠心肌梗死模型并分別心肌注射Ad-VEGF,Ad-GFP,SU5416(VEGFR2阻斷劑),sham組除為結(jié)扎前降支外,余處理與另外三組相同:1.通過(guò)心電圖檢測(cè)模型構(gòu)建是否成功。2.分別于術(shù)后7天、14天檢測(cè)小鼠超聲心動(dòng)圖以了解各組小鼠的心功能是否有區(qū)別。3.麻醉取心臟后,取其右后肢脛骨裸骨后測(cè)其長(zhǎng)度。4.ELISA法檢測(cè)血清Tn-I水平。5.比色法測(cè)SERCA活性。6.利用蛋白免疫印記法(Western blot)檢測(cè)VEGF,PLN,P-T17PLN,P-S16PLN,SERCA,HAX-1在各組心肌組織中的表達(dá)。7.HE染色檢測(cè)心肌纖維化情況。8.馬松三色染色(Masson)測(cè)心梗面積。9.Tunnel法測(cè)心臟組織凋亡。結(jié)果1.心梗術(shù)后小鼠各導(dǎo)聯(lián)ST段(ST segment)弓背向上抬高。2.小鼠心梗后心功能降低,VEGF能夠提高心梗后心功能,阻斷VEGF受體后心功能降低。3.心梗術(shù)后,心肌受損,注射了Ad-VEGF的小鼠能在短期內(nèi)使梗死邊緣區(qū)心肌更好的再生,有助于提升心功能,降低心衰發(fā)生率,改善預(yù)后。4.Tn-I檢測(cè)驗(yàn)證了心梗造模的成功,并且VEGF可以降低Tn-I水平,使其更早的降至正常,而阻斷VEGF受體后,Tn-I水平升高。5.VEGF提高心梗后肌漿網(wǎng)鈣泵活性,阻斷VEGF受體后,活性降低。6.由蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,心梗后心肌梗死邊緣區(qū)VEGF表達(dá)增加,轉(zhuǎn)染VEGF的小鼠,VEGF表達(dá)量增加更明顯,比其他心梗組多1倍,Ad-VEGF轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞成功。VEGF降低PLN與SERCA2a蛋白表達(dá)量的比值,升高P-T17PLN與PLN的比值,升高P-S16PLN與PLN的比值。VEGF與HAX-1蛋白的表達(dá)量增加有相關(guān)性。7.心臟病理切片HE染色說(shuō)明VEGF組心梗面積(myocardium infarct size MIS)小于其他心梗組。8.心臟病理切片Masson染色結(jié)果證實(shí)了VEGF降低心肌纖維化程度,抑制心肌重塑的作用。9.Tunnel(terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling)法測(cè)心肌細(xì)胞凋亡,分析統(tǒng)計(jì)后發(fā)現(xiàn)VEGF組凋亡減少,與前人研究結(jié)果一致。結(jié)論VEGF可以增強(qiáng)心肌肌漿網(wǎng)鈣泵活性,提高心梗后心功能,減少心肌重塑和凋亡,對(duì)心梗有保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF) 心肌梗死 SERCA2a PLN 心肌重塑
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R542.22
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 中英文縮略詞表11-13
• 引言13-14
• 材料與方法14-38
• 結(jié)果38-58
• 討論58-64
• 結(jié)論64-65
• 參考文獻(xiàn)65-68
• 綜述 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子對(duì)急性心肌梗死保護(hù)作用的研究進(jìn)展68-77
• 參考文獻(xiàn)74-77
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷及在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文77-78
• 致謝78-79

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1 張華;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子對(duì)肌漿網(wǎng)鈣泵活性的影響及其對(duì)心肌梗死的保護(hù)作用[D];鄭州大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：781288