本文關(guān)鍵詞：TRPM7通道在人房顫電重構(gòu)中的作用研究

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【摘要】：一、研究背景心房纖顫(atrial fibrillation, AF),簡(jiǎn)稱房顫,是臨床上最常見的一種心律失常,它嚴(yán)重危害人類健康。目前房顫治療在安全性、有效性方面受到嚴(yán)重制約,其最主要的原因是房顫的發(fā)生和維持機(jī)制尚未清楚。進(jìn)一步明確AF的發(fā)生機(jī)制,對(duì)于尋找更為安全有效的治療手段非常重要。電重構(gòu)、結(jié)構(gòu)重構(gòu)、自主神經(jīng)調(diào)節(jié)改變和鈣調(diào)控異常是目前在房顫研究領(lǐng)域發(fā)現(xiàn)的四個(gè)主要病理生理機(jī)制。其中心房電重構(gòu)是房顫發(fā)生和維持的關(guān)鍵因素之一,而細(xì)胞內(nèi)的鈣調(diào)控異常是目前房顫研究關(guān)注的焦點(diǎn),它不僅能引起晚期后除極(DADs)相關(guān)的自發(fā)心房異位電活動(dòng),還能激活心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子相關(guān)的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,影響胞內(nèi)很多關(guān)鍵鈣調(diào)控蛋白的活性,參與房顫的電重構(gòu)。近來(lái)年發(fā)現(xiàn),瞬時(shí)受體電位通道亞組7 (transient receptor potential melastatin related 7, TRPM7)為鈣離子通透的非選擇陽(yáng)離子通道,是心肌成纖維細(xì)胞上的主要鈣通道,能調(diào)控其胞內(nèi)鈣濃度并參與其分化增殖過(guò)程。最近研究表明,TRPM7在大鼠胚胎的心臟發(fā)育中也發(fā)揮著極其重要的作用,它的丟失將影響竇房結(jié)的復(fù)極化、自律性和心室的電傳導(dǎo)、復(fù)極化。而在人心肌細(xì)胞膜上已發(fā)現(xiàn)這個(gè)通道的功能性存在,但其與房顫的關(guān)系目前尚不完全明確。我們推測(cè),TRPM7對(duì)心肌細(xì)胞胞內(nèi)鈣的影響也和心臟成纖維細(xì)胞作用相類似,能影響心肌細(xì)胞內(nèi)鈣的調(diào)控,導(dǎo)致心肌電重構(gòu)。活性氧產(chǎn)物(reactive oxygen species, ROS)與房顫的發(fā)生密切相關(guān),過(guò)氧化氫(hydrogen peroxide, H2O2)作為一種常見的ROS產(chǎn)物,研究發(fā)現(xiàn)其致心律失常作用可能與其能影響心肌細(xì)胞膜上的鈉通道、L型鈣通道等離子通道有關(guān),這些改變使心肌非常容易誘發(fā)早期后除極(early afterdepolarisations, EADs)、晚期后除極(delayed afterdepolarisations, DADs)和觸發(fā)活動(dòng)活躍。目前在神經(jīng)細(xì)胞和心肌成纖維細(xì)胞上已發(fā)現(xiàn)TRPM7通道均能受H2O2影響而發(fā)生電生理功能改變,而人心肌細(xì)胞上TRPM7通道能否受H202影響目前尚未知。我們進(jìn)一步推測(cè),人心房肌細(xì)胞TRPM7通道能像心肌成纖維細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞一樣,會(huì)受H202影響而發(fā)生通道功能的改變,進(jìn)而參與心肌電重構(gòu)。二、研究目的1、評(píng)價(jià)人心房肌細(xì)胞TRPM7通道在AF電重構(gòu)中的作用。2、探討H202是否可通過(guò)影響人心房肌細(xì)胞TRPM7通道的電生理特性,參與AF的電重構(gòu)。三、研究方法應(yīng)用改良的兩步酶消化法來(lái)急性分離體外循環(huán)手術(shù)術(shù)中取得的人心房肌組織,獲得單個(gè)人心房肌組織細(xì)胞。用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)檢測(cè)人心房肌細(xì)胞膜上TRPM7通道電流。運(yùn)用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)人心房肌細(xì)胞TRPM7通道蛋白的表達(dá)情況,并分別采用Western blot和RT-PCR技術(shù)分別測(cè)定SR組和AF組患者心房肌組織中的TRPM7通道的基因mRNA及蛋白表達(dá)水平。在順利記錄心房肌細(xì)胞TRPM7通道電流的基礎(chǔ)上,在浴液中加入500 μmol/L H2O2,進(jìn)一步用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)檢測(cè)H202對(duì)人心房肌細(xì)胞TRPM7通道的電生理特性的影響。四、結(jié)果(一)人心房肌細(xì)胞TRPM7通道電流密度的變化與SR組相比,AF組患者心房肌細(xì)胞TRPM7通道外向電流密度在鉗制電壓為+40mV到+80 mV時(shí)增大,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。而其內(nèi)向電流密度在鉗制電壓為-120 mV到-50 mV時(shí)也比SR組的電流密度明顯增大,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(二)人心房肌細(xì)胞TRPM7通道蛋白及基因的表達(dá)Western blot和RT-PCR檢測(cè)結(jié)果示兩組患者心房肌組織中均能檢測(cè)到TRMP7通道蛋白和基因mRNA的表達(dá)。同時(shí)運(yùn)用軟件統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)AF組心房肌組織中的TRMP7通道蛋白和基因mRNA的表達(dá)水平均明顯高于SR組(P0.05)。(三)H202對(duì)人心房肌細(xì)胞TRPM7通道電流的影響與加入前相比,加入H202后人心房肌細(xì)胞膜上的TRPM7通道電流密度在鉗制電壓為+30 mV到+80 mV的情況下,外向電流密度明顯減少,且差異非常顯著(P0.01)。而其內(nèi)向電流在鉗制電壓在-120 mV,-110 mV時(shí)也比加入H202前電流密度明顯減少(P0.05)。五、結(jié)論1、與SR組患者相比,AF組患者心房肌細(xì)胞的TRPM7通道電流密度的顯著增大,提示TRPM7通道可能參與了AF電重構(gòu)過(guò)程；2、AF組患者心房肌細(xì)胞較SR組患者TRPM7通道基因和蛋白表達(dá)水平明顯上調(diào),從而為TRPM7作為AF電重構(gòu)的分子生物學(xué)基礎(chǔ)提供了一定的證據(jù)；3、H2O2可以通過(guò)影響人心房肌細(xì)胞TRPM7通道的功能,參與其引起的心房電重構(gòu)過(guò)程。
【關(guān)鍵詞】：TRPM7通道 心房纖顫 氧化應(yīng)激 膜片鉗技術(shù) 過(guò)氧化氫 RT-PCR
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R541.75
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-11
• 縮略詞表11-12
• 前言12-14
• 材料和方法14-37
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-47
• 分析和討論47-51
• 全文總結(jié)51-52
• 參考文獻(xiàn)52-56
• 綜述56-67
• 參考文獻(xiàn)63-67
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文和參加科研工作情況67-69
• 致謝69-70

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：737777