本文關(guān)鍵詞：bFGF通過(guò)抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對(duì)心肌缺血再灌注保護(hù)作用的機(jī)制研究

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【摘要】：研究背景 缺血性心臟病，繼發(fā)于急性心肌梗死，是世界上最普遍的健康問(wèn)題之一，同樣也是目前發(fā)病率高和死亡率高的常見的難治性疾病。心臟短暫缺血后，長(zhǎng)期再灌注將伴隨著二次損傷，包括氧化應(yīng)激、炎癥、壞死和凋亡，其中心肌細(xì)胞的損失是干擾二次損傷修復(fù)的主要因素。已經(jīng)有相關(guān)的研究表明，再灌注同時(shí)給予堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）治療對(duì)心肌缺血再灌注損傷有緩解和保護(hù)作用。作為一種多功能營(yíng)養(yǎng)因子，bFGF在急性心肌缺血再灌注損傷模型中抑制氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡這一作用機(jī)制未為人知。在以前的研究中，我們已經(jīng)證實(shí)再灌注后立即給予bFGF能保護(hù)心臟免受缺血再灌注引起的損傷，且可明顯降低心肌梗死區(qū)域面積。然而，在再灌注后心肌損傷的早期階段，bFGF保護(hù)作用的分子機(jī)制尚不清楚。因此，本次研究旨在闡述bFGF治療在心肌缺血再灌注損傷恢復(fù)中的分子機(jī)制。 研究方法 體內(nèi)試驗(yàn)中，對(duì)成年雄性C57/B6小鼠（8周-12周齡）左外側(cè)開胸心包，左前降支結(jié)扎30min，用8-0尼龍線和聚乙烯管防止動(dòng)脈損傷，，然后松開活結(jié)，再灌注4h，即為小鼠急性心肌缺血再灌注模型。將存活的小鼠隨機(jī)分成三組：假手術(shù)組、心肌I/R模型組和bFGF治療組。通過(guò)心臟超聲心動(dòng)圖來(lái)觀察小鼠心臟功能恢復(fù)情況，TUNEL染色檢測(cè)凋亡細(xì)胞數(shù)，對(duì)心肌缺血區(qū)域組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白（GRP78、CHOP和ATF-6）含量的變化進(jìn)行免疫印跡和免疫熒光檢測(cè)。 體外試驗(yàn)中，用適當(dāng)濃度的叔丁基過(guò)氧化氫（TBHP）處理H9C2細(xì)胞造成體外氧化應(yīng)激損傷模型，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況，觀察bFGF對(duì)H9C2細(xì)胞的保護(hù)作用。為了進(jìn)一步闡明bFGF的保護(hù)作用機(jī)制，結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道，引入PI3K/Akt特異抑制劑（LY294002）、ERK1/2通路抑制劑（PD98059），Westernblot檢測(cè)心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激后p-AKT和p-ERK以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白的表達(dá)。 研究結(jié)果 1.在小鼠心臟左前降支結(jié)扎缺血30分鐘后，給予bFGF治療，正常飼養(yǎng)三天后，采用二維超聲心動(dòng)圖對(duì)小鼠心臟收縮功能進(jìn)行檢測(cè)，I/R組的左室舒張末內(nèi)徑和左室收縮末內(nèi)徑明顯高于正常組，而給予bFGF治療后，二者數(shù)值明顯緩解，左室射血分?jǐn)?shù)以及左室短軸縮短率顯著減小，但無(wú)法恢復(fù)至正常。 2.心肌組織TUNEL熒光染色中，與假手術(shù)組相比，缺血再灌注損傷4小時(shí)后凋亡的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著增加，給予bFGF治療后，凋亡細(xì)胞數(shù)明顯減少。此外，bFGF治療組中cleaved-caspase-3以及cleaved-caspase-12的蛋白表達(dá)量比I/R損傷組低。 3. bFGF的治療抑制了I/R組小鼠缺血心臟中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白的活化，與正常組相比，bFGF治療組顯著增加了I/R組小鼠心臟內(nèi)的p-Akt和p-ERK1/2蛋白表達(dá)。 4.體外實(shí)驗(yàn)中，TBHP誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡在bFGF的治療后下降。bFGF激活了H9C2細(xì)胞內(nèi)的PI3K/AKT和ERK1/2通路，抑制了H9C2細(xì)胞TBHP誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白表達(dá)。 研究結(jié)論 1. bFGF可以改善心肌缺血再灌注的心功能損傷。 2. bFGF減少心肌缺血再灌注的心肌細(xì)胞凋亡。 3. bFGF通過(guò)激活PI3K/Akt和ERK1/2信號(hào)通路抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激來(lái)發(fā)揮保護(hù)心肌缺血再灌注損傷的作用。 4.體外試驗(yàn)中同樣證實(shí)bFGF對(duì)心肌細(xì)胞的保護(hù)作用。bFGF通過(guò)阻斷PI3K/Akt和ERK1/2信號(hào)通路來(lái)抑制TBHP誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：堿性成纖維生長(zhǎng)因子（bFGF） 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 心肌缺血再灌注
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R541
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 英文縮略詞表9-12
• 第1章 緒論12-19
• 1.1 心肌缺血再灌注與堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）12-13
• 1.2 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER）應(yīng)激與心肌缺血再灌注13-14
• 1.3 未折疊蛋白反應(yīng)14-15
• 1.4 三種未折疊蛋白反應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子15-17
• 1.5 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與 UPR 反應(yīng)17-18
• 1.6 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路18-19
• 第2章 材料及方法19-30
• 2.1 儀器和試劑19-23
• 2.1.1 主要儀器19
• 2.1.2 主要試劑19-20
• 2.1.3 主要抗體20
• 2.1.4 主要試劑的配置20-23
• 2.2 方法23-30
• 2.2.1 小鼠心肌 I/R 模型和分組23
• 2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)23
• 2.2.3 H9C2 細(xì)胞加藥處理23-24
• 2.2.4 MTT 法細(xì)胞測(cè)活24
• 2.2.5 細(xì)胞蛋白提取24
• 2.2.6 超聲心動(dòng)圖24-25
• 2.2.7 TUNEL 熒光染色25
• 2.2.8 FACSCalibur 流式細(xì)胞儀檢測(cè)25-26
• 2.2.9 免疫熒光染色26-27
• 2.2.10 免疫印跡27-29
• 2.2.11 統(tǒng)計(jì)分析29-30
• 第3章 結(jié)果30-43
• 3.1 bFGF 可以緩解心肌缺血再灌注的心功能損傷30
• 3.2 bFGF 減少心肌缺血再灌注的心肌細(xì)胞凋亡30-31
• 3.3 bFGF 緩解小鼠心肌缺血再灌注的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激損傷31-34
• 3.4 bFGF 對(duì)小鼠心肌缺血再灌注后 PI3K/Akt 及 ERK1/2 的上調(diào)作用34-35
• 3.5 bFGF 抑制 TBHP 導(dǎo)致的 H9C2 細(xì)胞氧化損傷的凋亡35-37
• 3.6 bFGF 減少 H9C2 細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的凋亡37-38
• 3.7 bFGF 激活 H9C2 細(xì)胞中的 PI3K/Akt 和 ERK1/2 途徑38-39
• 3.8 bFGF 通過(guò) PI3K/AKT、ERK1/2 通路調(diào)控 H9C2 細(xì)胞 ERS 蛋白的表達(dá)39-41
• 3.9 抑制PI3K/Akt 及ERK1/2通路后bFGF對(duì)H9C2細(xì)胞的保護(hù)作用的影響41-43
• 第4章 討論43-46
• 第5章 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-53
• 作者簡(jiǎn)介53
• 在讀期間發(fā)表論文53-54
• 致謝54

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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本文編號(hào)：683973