本文關(guān)鍵詞：GRK4變異體A142V對ETBR的調(diào)控在原發(fā)性高血壓發(fā)生中的作用研究

  更多相關(guān)文章： G蛋白偶聯(lián)受體激酶4 內(nèi)皮素B型受體 高血壓 腎臟

【摘要】：研究背景:目前,高血壓發(fā)病率呈逐年上升的趨勢,并已成為冠心病,腦卒中,心肌梗死,心衰及腎功衰等疾病的重要危險(xiǎn)因素之一。高血壓發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,包括多種因素,如中樞神經(jīng)系統(tǒng)、血管系統(tǒng)、腎臟及心臟等,其中腎臟介導(dǎo)水鈉排泄功能障礙是高血壓發(fā)病的重要環(huán)節(jié)。機(jī)體水鈉調(diào)節(jié)主要受多巴胺、血管緊張素、抗利尿激素、內(nèi)皮素、醛固酮等眾多神經(jīng)體液因子的影響。近年來,內(nèi)皮素系統(tǒng)在水鈉平衡中的作用受到了人們的重視。腎臟內(nèi)皮素分泌于腎小管,其主要的作用部位為腎近曲小管(Renal proximal tubule,RPT)。內(nèi)皮素受體主要分為內(nèi)皮素A型受體(Endthelin receptor A,ETAR)及內(nèi)皮素B型受體(Endthelin receptor A,ETBR),在腎小管系統(tǒng)中,ETBR主要分布于近端小管上皮細(xì)胞和內(nèi)髓收集管道,而ETAR分布于遠(yuǎn)端小管和皮質(zhì)收集管道。兩種受體分布不同,發(fā)揮的作用也各不相同。大量研究表明,內(nèi)皮素的利尿排鈉作用主要經(jīng)由ETBR完成。研究發(fā)現(xiàn),ETBR既可通過直接抑制Na+-K+-ATP酶活性參與調(diào)節(jié)水鈉排泄,還可通過與其他受體相互作用間接影響水鈉平衡。我們前期研究發(fā)現(xiàn),在自發(fā)性高血壓大鼠(Spontaneously hypertensive rat,SHR),ETBR介導(dǎo)的尿鈉排泄功能降低,但機(jī)制不清。由于ETBR屬于G蛋白偶聯(lián)受體(G protein coupled recetor,GPCR),其功能主要受到G蛋白偶聯(lián)受體激酶(G protein coupled recetor kinase,GRK)及蛋白磷酸酶2A(Protein phosphatase 2A,PP2A)的調(diào)節(jié)。我們的既往研究表明,在高血壓狀態(tài)下,PP2A活性未見異常,因此,GRK的作用顯得尤為重要。GRK家族主要有7個成員,其中GRK4的功能與血壓調(diào)節(jié)密切相關(guān),并受到人們的重視。GRK4單核苷酸多態(tài)性(Single nucleotide polymorphism,SNP)與原發(fā)性高血壓的發(fā)病具有密切的關(guān)系,在人群研究中發(fā)現(xiàn),GRK4的3種變異體,分別為GRK4 A142V、A486V及R65L,均與原發(fā)性高血壓密切相關(guān)。GRK4變異體的存在會使GRK4活性增高。GRK4 A142V轉(zhuǎn)基因小鼠在正常飲食條件時即出現(xiàn)血壓升高,而人GRK4 A486V轉(zhuǎn)基因小鼠則只有在高鹽飲食條件下才會出現(xiàn)血壓升高,且我們既往對GRK4 A142V轉(zhuǎn)基因小鼠的血壓進(jìn)行觀察,結(jié)果發(fā)現(xiàn)該小鼠與對照小鼠相比,血壓明顯升高并伴有尿鈉排泄功能障礙,GRK4 A142V可以影響腎臟近曲小管多巴胺d1r的磷酸化水平,進(jìn)而使其利尿鈉排泄作用受損,而引起血壓升高。并且grk4變異體a142v可通過增加血管at1受體的表達(dá),增加angii誘導(dǎo)的血管收縮,從而增高血壓,提示grk4a12v與原發(fā)性高血壓密切相關(guān)。然而以上這些仍不能完全解釋其血壓升高的原因,etbr功能受損是否與腎臟grk4活性升高有關(guān),目前尚無報(bào)道�；谝陨衔覀兲岢黾僭O(shè),etbr的功能受到grk4的調(diào)節(jié),grk4變異體a142v的存在會導(dǎo)致grk4對etb的調(diào)節(jié)發(fā)生異常,使etbr介導(dǎo)的利尿鈉排泄作用受損,水鈉潴留,從而參與高血壓的發(fā)病機(jī)制。因此,本課題將研究高血壓狀態(tài)下etbr介導(dǎo)的利尿排鈉功能,以及grk4a142v在etbr功能受損中的作用。研究方法1觀察自發(fā)性高血壓大鼠(shr)及wistar-kyoto大鼠(wky)基礎(chǔ)狀態(tài)下血壓;通過腎上腺動脈插管灌注etbr激動劑bq3020觀察etbr介導(dǎo)的利尿排鈉作用;western-blot及qt-pcr分析grk4及etbr的蛋白及mrna表達(dá)。2觀察wky及shr細(xì)胞基礎(chǔ)狀態(tài)及給予etbr激動劑bq3020刺激后na+-k+-atp酶活性;觀察grk4sirna干擾以及etbr激動劑bq3020刺激后shrrpt細(xì)胞na+-k+-atp酶活性變化。3觀察grk4a142v及grk4wt轉(zhuǎn)基因小鼠基礎(chǔ)血壓,基礎(chǔ)狀態(tài)下尿量及尿鈉排泄功能;以及頸靜脈插管全身灌注etbr激動劑bq3020后etbr介導(dǎo)的利尿排鈉功能。4觀察grk4a142v及grk4wt質(zhì)粒轉(zhuǎn)染小鼠基礎(chǔ)狀態(tài)下及給予etbr激動劑bq3020刺激后na+-k+-atp酶活性變化。5通過激光共聚焦觀察grk4及etbr共定位情況,免疫共沉淀檢測grk4及etbr共連接。研究結(jié)果:1.shr大鼠血壓高于wky大鼠,灌注etbr激動劑bq3020在wky大鼠具有明顯的利尿鈉排泄的作用,在shr大鼠這種作用受損,伴有g(shù)rk4表達(dá)增高,兩者etbr表達(dá)不變,但shr大鼠磷酸化的etbr增高,etbr在wkyrpt細(xì)胞降低na+-k+-atp酶活性的作用,但這種作用在shrrpt細(xì)胞受損,干擾grk4后,這種作用可恢復(fù),提示高血壓狀態(tài)下etrr功能受損可能與grk4活性增強(qiáng)有關(guān)。2.grk4a142v轉(zhuǎn)基因小鼠血壓高于grk4wt轉(zhuǎn)基因小鼠,兩者的24小時尿量及尿鈉排泄率無差異,etbr介導(dǎo)的利尿鈉排泄作用在grk4a142v轉(zhuǎn)基因小鼠受損。GRK4 A142V質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞與GRK4 WT質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞基礎(chǔ)狀態(tài)Na+-K+-ATP酶活性無差異,但ETBR所介導(dǎo)的Na+-K+-ATP酶活性降低作用在前者受損。3.GRK4通過與ETBR共連接調(diào)節(jié)ETBR的功能。結(jié)論:GRK4變異體A142V可以顯著增加GRK4的活性,并進(jìn)一步導(dǎo)致腎臟ETBR磷酸化使其介導(dǎo)的利尿排鈉作用受損,引起水鈉潴留及血壓升高。
【關(guān)鍵詞】：G蛋白偶聯(lián)受體激酶4 內(nèi)皮素B型受體 高血壓 腎臟
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R544.1
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• 英文摘要6-9
• 中文摘要9-12
• 第一章 前言12-14
• 第二章GRK4 在SHR大鼠ETBR功能受損中的作用14-34
• 2.1 材料與方法14-26
• 2.2 結(jié)果26-31
• 2.3 討論31-33
• 2.4 結(jié)論33-34
• 第三章GRK4 變異體A142V在ETBR功能受損中的作用34-49
• 3.1 材料與方法34-42
• 3.2 結(jié)果42-47
• 3.3 討論47-48
• 3.4 結(jié)論48-49
• 第四章GRK4 對ETBR功能調(diào)節(jié)的機(jī)制49-54
• 4.1 材料與方法49-51
• 4.2 結(jié)果51-52
• 4.3 討論52-53
• 4.4 結(jié)論53-54
• 全文結(jié)論54-55
• 參考文獻(xiàn)55-58
• 文獻(xiàn)綜述 內(nèi)皮素B型受體與高血壓病58-67
• 參考文獻(xiàn)63-67
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表文章情況67-68
• 致謝68

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本文編號：683439