發(fā)布時(shí)間：2017-08-12 07:38

  本文關(guān)鍵詞：TLR4-MyD88通路在DFMG抗LPC誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞損傷中的作用

  更多相關(guān)文章： DFMG 溶血性磷脂酰膽堿 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 TLR4 MyD88

【摘要】：目的:探討一種新型活性化合物,7-二氟甲氧基-5,4’-二甲氧基金雀異黃素(7-difluoromethoxy-5,4’-dimethoxygenistein,DFMG),是否通過(guò)抑制TLR4-MyD88信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路拮抗溶血性磷脂酰膽堿(lysophosphatidylcholine,LPC)誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC-12)氧化應(yīng)激損傷。方法:體外培養(yǎng)HUVEC-12細(xì)胞,TLR4-cDNA質(zhì)粒和TLR4-shRNA質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染細(xì)胞24h得到TLR4過(guò)表達(dá)HUVEC-12細(xì)胞和TLR4沉默HUVEC-12細(xì)胞。用RT-qPCR和Western blotting鑒定是否分別成功過(guò)表達(dá)和沉默TLR4。用30μmol/L的LPC處理以上兩種細(xì)胞24 h,然后加入3.0μmol/L的DFMG孵育24h。應(yīng)用ELISA分析DFMG對(duì)LPC誘導(dǎo)損傷的HUVEC-12細(xì)胞TLR4-MyD88通路途徑中IL-6、TNF-α的影響,采用Western blotting檢測(cè)DFMG對(duì)于LPC誘導(dǎo)損傷的HUVEC-12細(xì)胞TLR4-MyD88通路途徑中TLR4、My D88的影響。結(jié)果:①TLR4-cDNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后,相對(duì)于空白對(duì)照組,熒光定量PCR結(jié)果顯示TLR4過(guò)表達(dá)組細(xì)胞的TLR4基因表達(dá)增加(P0.01),Western blotting結(jié)果顯示TLR4過(guò)表達(dá)HUVEC-12細(xì)胞的TLR4蛋白表達(dá)增加。tlr4-shrna質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后,相對(duì)于空白對(duì)照組,熒光定量pcr結(jié)果顯示tlr4沉默huvec-12細(xì)胞的tlr4基因表達(dá)明顯降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。westernblotting結(jié)果顯示tlr4沉默huvec-12細(xì)胞的tlr4蛋白表達(dá)明顯降低。驗(yàn)證tlr4-cdna質(zhì)粒和tlr4-shrna質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染后獲得tlr4過(guò)表達(dá)huvec-12細(xì)胞和tlr4沉默huvec-12細(xì)胞。②elisa結(jié)果顯示:lpc損傷組、tlr4過(guò)表達(dá)組和tlr4過(guò)表達(dá)+lpc損傷組的il-6、tnf-α分泌量相對(duì)空白對(duì)照組均明顯上升(p0.05),其中tlr4過(guò)表達(dá)+lpc損傷組增高最為顯著(p0.05)。tlr4沉默組和tlr4沉默+lpc損傷組的il-6、tnf-α分泌量較lpc損傷組均明顯下降(p0.05)。tlr4過(guò)表達(dá)+lpc損傷+dfmg組的il-6、tnf-α表達(dá)量與tlr4過(guò)表達(dá)+lpc損傷組比較顯著下降(p0.05)。tlr4沉默+lpc損傷+dfmg組的il-6、tnf-α表達(dá)量與tlr4沉默+lpc損傷組和lpc損傷組比較均明顯下降(p0.05)。dfmg組的il-6、tnf-α分泌量同空白對(duì)照組相當(dāng),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。③westernblotting結(jié)果顯示:lpc損傷組、tlr4過(guò)表達(dá)組和tlr4過(guò)表達(dá)+lpc損傷組的tlr4、myd88蛋白表達(dá)量相對(duì)空白對(duì)照組有所上升,其中tlr4過(guò)表達(dá)+lpc損傷組上升最為明顯。tlr4沉默組和tlr4沉默+lpc損傷組所表達(dá)的tlr4、myd88蛋白相對(duì)于lpc損傷組明顯下降。tlr4過(guò)表達(dá)+lpc損傷+dfmg組的tlr4、myd88蛋白表達(dá)量與tlr4過(guò)表達(dá)+lpc損傷組比較顯著下調(diào)。而tlr4沉默+lpc損傷+dfmg組比tlr4沉默+lpc損傷組和lpc損傷組的TLR4、MyD88蛋白量都明顯減少。DFMG組的TLR4、MyD88蛋白表達(dá)量與空白對(duì)照組差異不明顯。結(jié)論:①TLR4-MyD88信號(hào)通路介導(dǎo)LPC誘導(dǎo)的HUVEC-12細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷。②通過(guò)抑制TLR4-MyD88信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)拮抗LPC的誘導(dǎo)HUVEC-12細(xì)胞損傷是DFMG保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷作用的機(jī)制之一。
【關(guān)鍵詞】：DFMG 溶血性磷脂酰膽堿 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 TLR4 MyD88
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R543.5
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-13
• 引言13-15
• 第一章 TLR4基因過(guò)表達(dá)對(duì)DFMG抗LPC誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞損傷和TLR4-MyD88通路的影響15-33
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料15-17
• 1.1 細(xì)胞、質(zhì)粒和感受態(tài)細(xì)胞15
• 1.2 實(shí)驗(yàn)試劑15-16
• 1.3 實(shí)驗(yàn)儀器16-17
• 1.4 特殊試劑配制17
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法17-24
• 2.1 HUVEC-12細(xì)胞的培養(yǎng)17-18
• 2.2 TLR4 cDNA質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染18-19
• 2.3 實(shí)時(shí)定量PCR分析.19-22
• 2.4 Western blotting22-23
• 2.5 ELISA測(cè)定23-24
• 2.6 DFMG對(duì)LPC誘導(dǎo)的TLR4過(guò)表達(dá)HUVEC-12細(xì)胞TLR4和MyD88蛋白表達(dá)的影響24
• 2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析24
• 3. 結(jié)果24-33
• 3.1 TLR4 cDNA轉(zhuǎn)染對(duì)TLR4基因表達(dá)的影響24-27
• 3.2 DFMG對(duì)LPC誘導(dǎo)TLR4過(guò)表達(dá)HUVEC-12細(xì)胞TNF-α 和IL-6分泌的影響27-31
• 3.3 DFMG對(duì)LPC誘導(dǎo)TLR4過(guò)表達(dá)HUVEC-12細(xì)胞TLR4和My D88蛋白表達(dá)的影響31-33
• 第二章 TLR4基因沉默對(duì)DFMG抗LPC誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞損傷和TLR4-MyD88通路的影響33-43
• 4. 實(shí)驗(yàn)材料33
• 4.1 細(xì)胞、質(zhì)粒和感受態(tài)細(xì)胞33
• 4.2 實(shí)驗(yàn)試劑33
• 4.3 實(shí)驗(yàn)儀器33
• 4.4 特殊試劑配制33
• 5. 實(shí)驗(yàn)方法33-35
• 5.1 HUVEC-12細(xì)胞的培養(yǎng)33
• 5.2 TLR4 shRNA質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染33-34
• 5.3 實(shí)時(shí)定量PCR分析34
• 5.4 Western blotting ..34
• 5.5 ELISA測(cè)定34-35
• 5.6 DFMG對(duì)LPC誘導(dǎo)的TLR4過(guò)表達(dá)HUVEC-12細(xì)胞TLR4和MyD88蛋白表達(dá)的影響35
• 5.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析35
• 6. 結(jié)果35-43
• 6.1 TLR4 shRNA轉(zhuǎn)染對(duì)TLR4基因表達(dá)的影響35-38
• 6.2 DFMG對(duì)LPC誘導(dǎo)TLR4沉默HUVEC-12細(xì)胞TNF-α 和IL-6分泌的影響38-41
• 6.3 DFMG對(duì)LPC誘導(dǎo)TLR4沉默HUVEC-12細(xì)胞TLR4和MyD88蛋白表達(dá)的影響41-43
• 討論43-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 綜述51-60
• 參考文獻(xiàn)56-60
• 英文縮寫(xiě)詞表60-61
• 攻讀碩士學(xué)位期間的主要成果61-62
• 致謝62-63

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本文編號(hào)：660491