本文關鍵詞：攜IL-8單克隆抗體聲學造影對兔心肌缺血再灌注的靶向性研究

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【摘要】：[目的]建立兔心肌缺血再灌注模型通過攜白介素8(IL-8)單克隆抗體聲學造影劑行心肌聲學造影來進行靶向性的研究。[方法]1.兔心肌缺血再灌注模型制備及判定：65只日本大耳兔隨機分為兩組：心肌缺血再灌注組(I/R組)和假手術組(Sham組),I/R組為開胸利用自制阻斷裝置阻斷左冠狀動脈前降支血流,并于缺血90 min解除阻斷,再灌注開始；假手術組為開胸后不阻斷左冠狀動脈前降支血流,其余與I/R組一致。術中持續(xù)心電監(jiān)測,兩組兔分別于術前、缺血90 min,再灌注60 min、120 min、180 min及1w經兔耳中動脈抽取3m1血樣,測定肌鈣蛋白I(cTnI)、肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)、肌紅蛋白(MB)濃度。于缺血90 min時處死兔后取出心臟,行HE染色及特殊MASSON染色觀察心肌病理學改變,利用免疫組化染色實驗對心肌缺血再灌注組織IL-8的監(jiān)測及表達。2.靶向聲學造影劑的制備及鑒定：采用共價偶聯(lián)法通過SPDP交聯(lián)劑將IL-8單克隆抗體偶聯(lián)于SonoVue微泡表面,顯微鏡下觀察微泡大小、形態(tài)及分散度并通過玻片凝集實驗及熒光染色實驗證明偶聯(lián)是否成功。3.心肌聲學造影檢查：兩組兔分別于術前,缺血90 min,再灌注60 min、120min、180 min及1w行常規(guī)心臟超聲檢查后,再分別用即時配制的SonoVue造影劑、攜IL-8單克隆抗體的靶向造影劑、對照組SonoVue造影劑行心肌聲學造影檢查,取得動態(tài)圖像后脫機應用QLAB軟件進行分析。4.統(tǒng)計學方法：應用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件,兔各項生理指標服從正態(tài)分布,以均值±標準差(x±s)表示,同一樣,本進行兩次不同處理用配對t檢驗,兩不同樣本進行相同處理用兩獨立樣本t檢驗,多組樣本均數(shù)比較用單因素方差分析。P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。[結果]1.兔心肌缺血再灌注模型建立：術前觀察兩組兔二維超聲、心電圖均無異常。心電圖：I/R組兔缺血90 min ST段抬高,再灌注開始ST段回落；Sham組兔心率稍增快,ST段未見變化；I/R組兔二維超聲觀察室壁運動幅度較Sham組減低,Sham組未見明顯變化；血清學檢測顯示I/R組兔血清心肌損傷標志物明顯高于Sham組(P0.05),于再灌注180 min后達高峰,1w逐漸下降至正常范圍；Sham組兔術前及術后血清心肌損傷標志物中未見明顯變化；病理結果顯示：I/R組兔左前降支所供血區(qū)域的可見心肌缺血,Sham組兔未見明顯心肌缺血。免疫組化染色顯示I/R組心肌細胞表面幾乎著棕色；而Sham組心肌細胞表面未見明顯著色,由此可證明缺血區(qū)域產生炎癥反應,且損傷的心肌組織釋放大量IL-8。2.靶向聲學造影劑的鑒定：通過玻片凝集實驗與免疫熒光實驗可得出IL-8單克隆抗體已成功偶聯(lián)到SonoVue微泡外殼表面。3.心肌聲學造影檢查：即時配制的SonoVue造影劑行心肌聲學造影,造模節(jié)段前壁、前間隔的造影劑超聲均值、超聲峰值均明顯低于非梗死節(jié)段下壁、后間隔,術前同樣的節(jié)段及Sham組相應的節(jié)段(均有P0.05)；實驗組(攜IL-8單克隆抗體偶聯(lián)SonoVue聲學造影劑)行心肌聲學造影,造模節(jié)段前壁、前間隔的造影劑超聲均值、超聲峰值均高于對照組(SonoVue聲學造影劑)(均有P0.05)。以Flash后第一幀為起點：SonoVue造影劑行心肌聲學造影,造模節(jié)段前壁、前間隔的造影劑達峰時間均晚于非梗死節(jié)段下壁、后間隔,術前同樣的節(jié)段及Sham組相應的節(jié)段(均有P0.05)；實驗組行心肌聲學造影,造模節(jié)段前壁、前間隔的造影劑達峰時間均早于對照組同樣的節(jié)段(均有P0.05)。以開始注射造影劑為起點：同一只實驗兔,實驗組行心肌聲學造影,造模節(jié)段前壁、前間隔心肌開始顯影的時間均早于對照組同樣的節(jié)段(均有P0.05)。利用一次負指數(shù)方程[y(t)=A*(1-exp(-B*t))+C]參數(shù)可得出：SonoVue造影劑行心肌聲學造影,I/R組兩造模節(jié)段前壁、前間隔的心肌血容量(A值)、心肌血流速度(B值)及局部心肌血流灌注量(A*B值)均明顯低于非梗死節(jié)段下壁及后間隔(均有P0.05),前壁、前間隔的A值、B值、A*B值均明顯低于Sham組相應的節(jié)段(均有P0.05)；而用攜IL-8單克隆抗體的靶向造影劑時,實驗組造模節(jié)段前壁、前間隔A值、A*B值均高于對照組相應的節(jié)段(均有P0.05),而B值在兩組間未見顯著差異(均有P0.05)。[結論]1.實時心肌聲學造影(SonoVue造影劑)證實I/R組缺血及再灌注各時段造模節(jié)段心肌血容量、心肌血流速度及心肌血流灌注量均明顯低于非梗死節(jié)段、Sham組相應的節(jié)段；造模節(jié)段造影劑視頻強度的超聲均值、超聲峰值、達峰時間均明顯低于非梗死節(jié)段、Sham組相應的節(jié)段,造模節(jié)段造影劑達峰時間均明顯低于非梗死節(jié)段、Sham組相應的節(jié)段,說明MCE操作簡便、易行,可以較敏感地顯示心肌各節(jié)段增強的過程,能提高心肌缺血再灌注診斷的敏感性,并通過心肌各節(jié)段的增強情況來評價心肌再灌注的情況。2.采用共價偶聯(lián)法通過SPDP交聯(lián)劑將IL-8單克隆抗體偶聯(lián)于SonoVue微泡表面的方法是可行的。各各組實驗兔在經過開胸手術的創(chuàng)傷下,3h內又接受5次左心聲學造影檢查,均未發(fā)現(xiàn)任何因造影劑引發(fā)的不良反應,這就說明了利用攜IL-8單克隆抗體的靶向造影劑心肌聲學造影檢查是安全的、可行的。3.炎性因子IL-8在心肌缺血早期(缺血90 min)增高明顯,利用攜帶IL-8單克隆抗體的靶向造影劑行心肌造影,IL-8單克隆抗體(中和心肌缺血部位的炎性因子,減輕炎癥損傷。4.攜IL-8單克隆抗體的靶向造影劑心肌聲學造影發(fā)現(xiàn)：實驗組造模節(jié)段造影劑視頻強度的超聲峰值、超聲均值高于對照組,對照組心肌開始顯影的時間、達峰時間均早于對照組,這說明靶向造影劑攜帶的IL-8單克隆抗體與缺血心肌釋放的炎性因子IL-8之間的反應所致的靶向作用的存在。
【關鍵詞】：心肌缺血再灌注 IL-8單克隆抗體 靶向造影劑 心肌聲學造影
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R542.2
【目錄】：

• 中英文縮略詞對照表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-15
• 前言15-17
• 第一部分 兔心梗再灌注模型的建立及其評判的實驗研究17-59
• 材料與方法17-24
• 結果24-53
• 討論53-57
• 小結57-59
• 第二部分 攜IL-8單克隆抗體的靶向性聲學造影劑對兔心肌缺血再灌注的研究59-88
• 材料與方法59-65
• 結果65-83
• 討論83-86
• 小結86-88
• 全文總結88-90
• 參考文獻90-96
• 綜述96-103
• 參考文獻100-103
• 攻讀學位期間獲得的學術成果103-104
• 致謝104-105

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