本文關(guān)鍵詞：攜IL-8單克隆抗體聲學(xué)造影對(duì)兔心肌缺血再灌注的靶向性研究

  更多相關(guān)文章： 心肌缺血再灌注 IL-8單克隆抗體 靶向造影劑 心肌聲學(xué)造影

【摘要】：[目的]建立兔心肌缺血再灌注模型通過(guò)攜白介素8(IL-8)單克隆抗體聲學(xué)造影劑行心肌聲學(xué)造影來(lái)進(jìn)行靶向性的研究。[方法]1.兔心肌缺血再灌注模型制備及判定：65只日本大耳兔隨機(jī)分為兩組：心肌缺血再灌注組(I/R組)和假手術(shù)組(Sham組),I/R組為開(kāi)胸利用自制阻斷裝置阻斷左冠狀動(dòng)脈前降支血流,并于缺血90 min解除阻斷,再灌注開(kāi)始；假手術(shù)組為開(kāi)胸后不阻斷左冠狀動(dòng)脈前降支血流,其余與I/R組一致。術(shù)中持續(xù)心電監(jiān)測(cè),兩組兔分別于術(shù)前、缺血90 min,再灌注60 min、120 min、180 min及1w經(jīng)兔耳中動(dòng)脈抽取3m1血樣,測(cè)定肌鈣蛋白I(cTnI)、肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)、肌紅蛋白(MB)濃度。于缺血90 min時(shí)處死兔后取出心臟,行HE染色及特殊MASSON染色觀察心肌病理學(xué)改變,利用免疫組化染色實(shí)驗(yàn)對(duì)心肌缺血再灌注組織IL-8的監(jiān)測(cè)及表達(dá)。2.靶向聲學(xué)造影劑的制備及鑒定：采用共價(jià)偶聯(lián)法通過(guò)SPDP交聯(lián)劑將IL-8單克隆抗體偶聯(lián)于SonoVue微泡表面,顯微鏡下觀察微泡大小、形態(tài)及分散度并通過(guò)玻片凝集實(shí)驗(yàn)及熒光染色實(shí)驗(yàn)證明偶聯(lián)是否成功。3.心肌聲學(xué)造影檢查：兩組兔分別于術(shù)前,缺血90 min,再灌注60 min、120min、180 min及1w行常規(guī)心臟超聲檢查后,再分別用即時(shí)配制的SonoVue造影劑、攜IL-8單克隆抗體的靶向造影劑、對(duì)照組SonoVue造影劑行心肌聲學(xué)造影檢查,取得動(dòng)態(tài)圖像后脫機(jī)應(yīng)用QLAB軟件進(jìn)行分析。4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件,兔各項(xiàng)生理指標(biāo)服從正態(tài)分布,以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,同一樣,本進(jìn)行兩次不同處理用配對(duì)t檢驗(yàn),兩不同樣本進(jìn)行相同處理用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),多組樣本均數(shù)比較用單因素方差分析。P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。[結(jié)果]1.兔心肌缺血再灌注模型建立：術(shù)前觀察兩組兔二維超聲、心電圖均無(wú)異常。心電圖：I/R組兔缺血90 min ST段抬高,再灌注開(kāi)始ST段回落；Sham組兔心率稍增快,ST段未見(jiàn)變化；I/R組兔二維超聲觀察室壁運(yùn)動(dòng)幅度較Sham組減低,Sham組未見(jiàn)明顯變化；血清學(xué)檢測(cè)顯示I/R組兔血清心肌損傷標(biāo)志物明顯高于Sham組(P0.05),于再灌注180 min后達(dá)高峰,1w逐漸下降至正常范圍；Sham組兔術(shù)前及術(shù)后血清心肌損傷標(biāo)志物中未見(jiàn)明顯變化；病理結(jié)果顯示：I/R組兔左前降支所供血區(qū)域的可見(jiàn)心肌缺血,Sham組兔未見(jiàn)明顯心肌缺血。免疫組化染色顯示I/R組心肌細(xì)胞表面幾乎著棕色；而Sham組心肌細(xì)胞表面未見(jiàn)明顯著色,由此可證明缺血區(qū)域產(chǎn)生炎癥反應(yīng),且損傷的心肌組織釋放大量IL-8。2.靶向聲學(xué)造影劑的鑒定：通過(guò)玻片凝集實(shí)驗(yàn)與免疫熒光實(shí)驗(yàn)可得出IL-8單克隆抗體已成功偶聯(lián)到SonoVue微泡外殼表面。3.心肌聲學(xué)造影檢查：即時(shí)配制的SonoVue造影劑行心肌聲學(xué)造影,造模節(jié)段前壁、前間隔的造影劑超聲均值、超聲峰值均明顯低于非梗死節(jié)段下壁、后間隔,術(shù)前同樣的節(jié)段及Sham組相應(yīng)的節(jié)段(均有P0.05)；實(shí)驗(yàn)組(攜IL-8單克隆抗體偶聯(lián)SonoVue聲學(xué)造影劑)行心肌聲學(xué)造影,造模節(jié)段前壁、前間隔的造影劑超聲均值、超聲峰值均高于對(duì)照組(SonoVue聲學(xué)造影劑)(均有P0.05)。以Flash后第一幀為起點(diǎn)：SonoVue造影劑行心肌聲學(xué)造影,造模節(jié)段前壁、前間隔的造影劑達(dá)峰時(shí)間均晚于非梗死節(jié)段下壁、后間隔,術(shù)前同樣的節(jié)段及Sham組相應(yīng)的節(jié)段(均有P0.05)；實(shí)驗(yàn)組行心肌聲學(xué)造影,造模節(jié)段前壁、前間隔的造影劑達(dá)峰時(shí)間均早于對(duì)照組同樣的節(jié)段(均有P0.05)。以開(kāi)始注射造影劑為起點(diǎn)：同一只實(shí)驗(yàn)兔,實(shí)驗(yàn)組行心肌聲學(xué)造影,造模節(jié)段前壁、前間隔心肌開(kāi)始顯影的時(shí)間均早于對(duì)照組同樣的節(jié)段(均有P0.05)。利用一次負(fù)指數(shù)方程[y(t)=A*(1-exp(-B*t))+C]參數(shù)可得出：SonoVue造影劑行心肌聲學(xué)造影,I/R組兩造模節(jié)段前壁、前間隔的心肌血容量(A值)、心肌血流速度(B值)及局部心肌血流灌注量(A*B值)均明顯低于非梗死節(jié)段下壁及后間隔(均有P0.05),前壁、前間隔的A值、B值、A*B值均明顯低于Sham組相應(yīng)的節(jié)段(均有P0.05)；而用攜IL-8單克隆抗體的靶向造影劑時(shí),實(shí)驗(yàn)組造模節(jié)段前壁、前間隔A值、A*B值均高于對(duì)照組相應(yīng)的節(jié)段(均有P0.05),而B(niǎo)值在兩組間未見(jiàn)顯著差異(均有P0.05)。[結(jié)論]1.實(shí)時(shí)心肌聲學(xué)造影(SonoVue造影劑)證實(shí)I/R組缺血及再灌注各時(shí)段造模節(jié)段心肌血容量、心肌血流速度及心肌血流灌注量均明顯低于非梗死節(jié)段、Sham組相應(yīng)的節(jié)段；造模節(jié)段造影劑視頻強(qiáng)度的超聲均值、超聲峰值、達(dá)峰時(shí)間均明顯低于非梗死節(jié)段、Sham組相應(yīng)的節(jié)段,造模節(jié)段造影劑達(dá)峰時(shí)間均明顯低于非梗死節(jié)段、Sham組相應(yīng)的節(jié)段,說(shuō)明MCE操作簡(jiǎn)便、易行,可以較敏感地顯示心肌各節(jié)段增強(qiáng)的過(guò)程,能提高心肌缺血再灌注診斷的敏感性,并通過(guò)心肌各節(jié)段的增強(qiáng)情況來(lái)評(píng)價(jià)心肌再灌注的情況。2.采用共價(jià)偶聯(lián)法通過(guò)SPDP交聯(lián)劑將IL-8單克隆抗體偶聯(lián)于SonoVue微泡表面的方法是可行的。各各組實(shí)驗(yàn)兔在經(jīng)過(guò)開(kāi)胸手術(shù)的創(chuàng)傷下,3h內(nèi)又接受5次左心聲學(xué)造影檢查,均未發(fā)現(xiàn)任何因造影劑引發(fā)的不良反應(yīng),這就說(shuō)明了利用攜IL-8單克隆抗體的靶向造影劑心肌聲學(xué)造影檢查是安全的、可行的。3.炎性因子IL-8在心肌缺血早期(缺血90 min)增高明顯,利用攜帶IL-8單克隆抗體的靶向造影劑行心肌造影,IL-8單克隆抗體(中和心肌缺血部位的炎性因子,減輕炎癥損傷。4.攜IL-8單克隆抗體的靶向造影劑心肌聲學(xué)造影發(fā)現(xiàn)：實(shí)驗(yàn)組造模節(jié)段造影劑視頻強(qiáng)度的超聲峰值、超聲均值高于對(duì)照組,對(duì)照組心肌開(kāi)始顯影的時(shí)間、達(dá)峰時(shí)間均早于對(duì)照組,這說(shuō)明靶向造影劑攜帶的IL-8單克隆抗體與缺血心肌釋放的炎性因子IL-8之間的反應(yīng)所致的靶向作用的存在。
【關(guān)鍵詞】：心肌缺血再灌注 IL-8單克隆抗體 靶向造影劑 心肌聲學(xué)造影
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R542.2
【目錄】：

• 中英文縮略詞對(duì)照表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-15
• 前言15-17
• 第一部分 兔心梗再灌注模型的建立及其評(píng)判的實(shí)驗(yàn)研究17-59
• 材料與方法17-24
• 結(jié)果24-53
• 討論53-57
• 小結(jié)57-59
• 第二部分 攜IL-8單克隆抗體的靶向性聲學(xué)造影劑對(duì)兔心肌缺血再灌注的研究59-88
• 材料與方法59-65
• 結(jié)果65-83
• 討論83-86
• 小結(jié)86-88
• 全文總結(jié)88-90
• 參考文獻(xiàn)90-96
• 綜述96-103
• 參考文獻(xiàn)100-103
• 攻讀學(xué)位期間獲得的學(xué)術(shù)成果103-104
• 致謝104-105

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本文編號(hào)：642759