本文關鍵詞：miR-21靶向調控Jagged-1在心肌纖維化中的作用

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【摘要】：目的:基于Notch信號通路篩選出可能調控心肌纖維化的miRNA,從中選出調控作用最顯著的miRNA(本研究篩選出miR-21/miRNA-21)。并進一步研究miR-21通過靶向調控Notch信號通路的配體蛋白Jag1(Jagged-1)在心肌纖維化中的作用。方法:1、分離大鼠心肌成纖維細胞(Cardiac fibroblast,CFB),原代培養(yǎng),傳代培養(yǎng)至細胞最佳狀態(tài)。實驗分為三組:未加TGF-β1(Transforming growth factor-β1)組、10ng/ml TGF-β1組、10ng/ml TGF-β1+10μM DAPT組。經(jīng)RNA抽提、反轉錄與q PCR,篩選調控心肌纖維化新型miRNA(假定為miRNA-X)。2、在TGF-β1刺激前,轉染miRNA-X的抑制劑,通過WB(Western Blot)檢測TGF-β1刺激下的Vimentin和α-SMA(α-smooth muscle actin)的表達情況,明確在TGF-β1刺激下,miRNA-X對心肌成纖維細胞向肌成纖維細胞轉化(Cardiac fibroblast-myofibroblast transformation,CMT)的影響作用。3、轉染miRNA-X的抑制劑,陰性對照為無義的抑制劑,利用CCK8(cell counting kit)試劑盒檢測miRNA-X對心肌成纖維細胞增殖能力的影響,進一步篩選出調控心肌纖維化效果最顯著的miRNA。4、構建psi CHECK-2-Jag1 3’-UTR WT(Wild-Type)/Muta(Mutation),將pre-miR-21、對照質粒分別與psi CHECK-2-Jag1 3’-UTR WT、psi CHECK-2-Jag13’-UTR Muta共轉染293T細胞,裂解細胞,檢測熒光素酶的熒光強度,分析miR-21與Jag1的3’-UTR的相互關系。5、構建腺病毒Ad-GFP(Adenovirus-Green Fluorescent Protein)以及Ad-miR-21-sponge(Adenovirus-miR-21-sponge),分離大鼠心肌成纖維細胞,原代培養(yǎng),傳代至細胞生長穩(wěn)定,分為兩組,分別轉染Ad-GFP以及Ad-miR-21-sponge,36h后以TGF-β1處理,提取蛋白,WB檢測Vimentin、DDR2、a-SMA、Tensin的表達情況。利用CCK8試劑盒檢測miR-21對心肌成纖維細胞增殖能力的影響,Transwell侵襲實驗檢測心肌成纖維細胞的遷移能力。WB檢測Jag1蛋白表達。結果:TGF-β1刺激CFB細胞中,miR-21、miR-23b、miR-140表達量影響比較明顯,其中miR-21可與Jag1的3’-UTR結合。阻斷miR-21,可顯著抑制心肌成纖維細胞的增殖能力,并可抑制其遷移能力,逆轉TGF-β1刺激下心肌成纖維細胞向肌成纖維細胞轉化。結論:miR-21通過靶向調控Notch信號通路的配體蛋白Jag1,抑制心肌成纖維細胞的增殖、遷移及心肌成纖維細胞向肌成纖維細胞轉化,發(fā)揮抗心肌纖維化作用。
【關鍵詞】：Notch信號 miR-21 Jagged-1 心肌纖維化
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R54
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮略詞表9-10
• 第1章 引言10-13
• 第2章 材料與方法13-28
• 2.1 材料13-15
• 2.1.1 細胞及菌株13
• 2.1.2 腺病毒載體系統(tǒng)13
• 2.1.3 主要試劑13-14
• 2.1.4 主要儀器14-15
• 2.2 實驗方法15-28
• 2.2.1 原代大鼠心肌成纖維細胞的分離15-16
• 2.2.2 RNA抽提、反轉錄與q PCR16-17
• 2.2.3 引物設計17-18
• 2.2.4 CCK8檢測細胞活性18
• 2.2.5 病毒載體構建18-21
• 2.2.6 Luciferase驗證實驗21-22
• 2.2.7 Transwell侵襲實驗22
• 2.2.8 Western Blot22-27
• 2.2.9 統(tǒng)計學分析27-28
• 第3章 結果28-34
• 3.1 篩選調控心肌纖維化新型miRNA28
• 3.2 差異miRNA對于CMT的影響28-29
• 3.3 差異miRNA對心肌成纖維細胞增殖能力的影響29-30
• 3.4 miR-21 靶點Jag1外源性Luciferase驗證實驗30-31
• 3.5 miR-21 對于Jag1表達量的影響31
• 3.6 miR-21 對于CMT的影響31-32
• 3.7 miR-21 對心肌成纖維細胞增殖能力的影響32-33
• 3.8 miR-21 對于CFB細胞遷移能力的影響33-34
• 第4章 討論34-37
• 第5章 結論與展望37-38
• 5.1 結論37
• 5.2 展望37-38
• 致謝38-39
• 參考文獻39-43
• 綜述 miRNA與心肌纖維化的研究進展43-48
• 參考文獻46-48

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1 朱大林,彭仁秀,王晉明;心肌纖維化與腎素血管緊張素醛固酮系統(tǒng)[J];現(xiàn)代診斷與治療;2001年01期

2 潘麗萍;心肌纖維化的機制及干預治療[J];臨床醫(yī)學;2005年10期

3 張雙偉;;中醫(yī)藥防治心肌纖維化研究進展[J];遼寧中醫(yī)雜志;2006年09期

4 張海嘯;史載祥;;轉化生長因子-β信號傳導通路與心肌纖維化[J];中日友好醫(yī)院學報;2007年02期

5 趙樹梅;沈潞華;;過氧化物酶體增殖物激活受體通路與心肌纖維化[J];臨床心血管病雜志;2007年09期

6 張鍇;張振剛;袁曉晨;;過氧化物酶體增殖物激活受體與心肌纖維化的研究進展[J];中國分子心臟病學雜志;2008年02期

7 殷子杰;竇麗萍;崔小強;;中醫(yī)藥抗心肌纖維化研究趨勢的分析與探討[J];心腦血管病防治;2009年02期

8 韋紅;沈雁;;心肌纖維化的中醫(yī)藥研究進展[J];中醫(yī)藥信息;2009年05期

9 李楠;龐煒;李麗娟;朱毅;;可溶性表氧化物水解酶在心肌纖維化中的作用[J];中國病理生理雜志;2010年10期

10 束長城;魏萬林;;中醫(yī)藥逆轉心肌纖維化的研究進展[J];中國循證心血管醫(yī)學雜志;2011年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 殷子杰;程志清;;中藥抗心肌纖維化研究趨勢[A];浙江省中西醫(yī)結合學會保健與康復醫(yī)學專業(yè)委員會第六次學術年會暨國家級繼續(xù)教育學習班資料匯編[C];2008年

2 吳美芳;呂仕超;張軍平;;心肌纖維化中醫(yī)診療思路探析[A];第四屆“黃河心血管病防治論壇”資料匯編[C];2013年

3 黃力;李琳;;中藥降壓脈凈對心肌組織轉化生長因子-β1的影響及干預心肌纖維化的作用[A];第十次中國中西醫(yī)結合微循環(huán)學術會議論文集[C];2010年

4 蔡輝;;中醫(yī)藥治療心肌纖維化進展[A];中國中西醫(yī)結合學會第五屆基礎理論研究專業(yè)委員會學術研討會論文集[C];2006年

5 李楠;龐煒;李麗娟;朱毅;;可溶性表氧化物水解酶在心肌纖維化中的作用[A];中國病理生理學會第九屆全國代表大會及學術會議論文摘要[C];2010年

6 李彥川;劉育英;陳媛媛;衛(wèi)曉紅;胡白和;常昕;孫凱;黃娉;王傳社;韓晶巖;;芪參益氣滴丸后給藥對心肌肥厚大鼠心肌纖維化的阻斷作用[A];第十次中國中西醫(yī)結合微循環(huán)學術會議論文集[C];2010年

7 謝燁卿;陳瑞珍;陳灝珠;;病毒誘導的內皮間質纖維化在心肌炎心肌纖維化中的作用及機制[A];中華醫(yī)學會第十五次全國心血管病學大會論文匯編[C];2013年

8 劉詩英;王夢洪;;結締組織生長因子與心肌纖維化[A];江西省第四次中西醫(yī)結合心血管學術交流會論文集[C];2008年

9 江雪;張樹龍;;高血壓心肌損傷過程中自然殺傷T細胞的變化及其在心肌纖維化中的作用[A];中華醫(yī)學會第十五次全國心血管病學大會論文匯編[C];2013年

10 李萌;呂仕超;吳美芳;張軍平;;不同原因誘導的心肌纖維化動物模型的建立[A];中華醫(yī)學會第十五次全國心血管病學大會論文匯編[C];2013年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 記者 聶松義 通訊員 張勇;缺血性心肌纖維化研究有進展[N];健康報;2012年

2 徐亞靜;川芎嗪抗心肌纖維化機理研究取得進展[N];中國醫(yī)藥報;2012年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 龐雪芬;姜黃素在血管緊張素Ⅱ致大鼠心肌纖維化中的作用及機制研究[D];山西醫(yī)科大學;2016年

2 白楓;阻斷1型血管緊張素Ⅱ受體通過改變ACE2/eNOS活性及CD44-透明質酸相互作用參與調定血壓和心肌纖維化[D];山西醫(yī)科大學;2016年

3 呂婷婷;β_1-腎上腺素受體自身抗體致心肌纖維化的作用及機制研究[D];首都醫(yī)科大學;2016年

4 Prince Amoah Barnie;HMGB1參與EAM心肌纖維化的機制及對固有免疫細胞功能的影響[D];江蘇大學;2015年

5 張海嘯;大蒜素對左室重構和心肌纖維化的影響及機理研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2007年

6 孫紅霞;依那普利抗心肌纖維化作用及分子機制研究[D];吉林大學;2008年

7 唐曉鴻;Galectin-3在自發(fā)性高血壓大鼠心肌纖維化中的作用及機制[D];中南大學;2009年

8 謝燁卿;心臟微血管內皮細胞在病毒性心臟病心肌纖維化中的作用及其機制[D];復旦大學;2012年

9 張召才;病毒性心臟病心肌纖維化的發(fā)生機制及其藥物干預研究[D];復旦大學;2004年

10 嚴雯;重組腺相關病毒載體介導的人核心蛋白聚糖基因逆轉自發(fā)性高血壓大鼠心肌纖維化的研究[D];華中科技大學;2009年

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1 呂冰;參芍口服液對糖尿病大鼠心肌纖維化及炎性損傷的影響及機制的研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

2 王晶晶;尖葉假龍膽對心肌纖維化的影響及其作用機制[D];河北醫(yī)科大學;2015年

3 支敏;HDAC8在異丙腎上腺素誘導大鼠心肌纖維化中的作用[D];安徽醫(yī)科大學;2015年

4 范海;PDGFR-β/PI3K/AKT信號通路在PDGF-BB誘導大鼠心肌成纖維細胞所致心肌纖維化中的作用[D];安徽醫(yī)科大學;2015年

5 楊光;血府逐瘀湯逆轉自發(fā)性高血壓大鼠心肌纖維化的作用機制研究[D];南方醫(yī)科大學;2015年

6 羅健;硫化氫可通過下調內質網(wǎng)應激改善糖尿病大鼠的心肌纖維化[D];南華大學;2015年

7 翟建麗;四逆湯對腹主動脈縮窄心肌纖維化大鼠AngⅡ、TGF-β_1和CTGF的影響[D];遼寧醫(yī)學院;2015年

8 孫丹云;匯利心康對心肌纖維化的影響及其與miR-199關系的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

9 王潔文;原發(fā)性高血壓患者血漿Hcy水平與心肌纖維化相關性研究[D];青海大學;2016年

10 劉宇帆;錨蛋白-B表達與房顫時心肌纖維化的相關性研究[D];首都醫(yī)科大學;2016年

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本文編號：638049