本文關鍵詞：不同數量脂肪干細胞對不同劑量野百合堿誘發(fā)的大鼠肺動脈高壓的影響

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【摘要】：背景:我們課題組先前成功運用野百合堿(MCT)誘導建立肺動脈高壓(PAH)大鼠模型并發(fā)現脂肪干細胞(ADSCs)移植能夠顯著降低PAH大鼠的平均肺動脈壓(mPAP)、改善肺血管和右心室重構。但目前對于治療PAH所需的合適的ADSCs數量、干預時間與治療療程尚未完全清楚。目的:研究不同數量的ADSCs移植對不同劑量MCT誘導的PAH大鼠的治療作用,探索ADSCs移植治療的最佳細胞數目、干預時機及治療時間。方法:(1)以膠原酶消化法從SD大鼠腹股溝皮下脂肪組織分離培養(yǎng)出ADSCs;流式細胞儀鑒定其表型;成脂、成骨誘導分化鑒定其多向分化潛能;按以下方案經腹腔一次性注射相應劑量的MCT誘導建立PAH和經左頸外靜脈移植相應數量的ADSCs,在相應的時間點用右心導管法檢測mPAP和用稱重法測量右心室肥厚指數(RVHI)。(2)分四個部分:1.不同數量ADSCs干預PAH大鼠:36只SD大鼠隨機分為正常對照組(NC組)、PAH組和各個ADSCs組。PAH和ADSCs組予40mg/kg MCT,NC組予相應體積的生理鹽水;各個ADSCs組于MCT注射后7天移植ADSCs,數量分別為0.5×106個(A1組)、1.0×106個(A2組)、3.0×106個(A3組)和5.0×106個(A4組),NC和PAH組予等體積生理鹽水。各組n均為6,分別于MCT注射后4周檢測各項指標。2.不同數量ADSCs干預正常SD大鼠:25只SD大鼠隨機分為NC組和各個ADSCs組。各組大鼠予一次性腹腔注射相應體積的生理鹽水,7d后各個ADSCs組移植ADSCs,數量分別為:0.5×106個(N-A1組)、1.0×106個(N-A2組)、3.0×106個(N-A3)和5.0×106個(N-A4),NC組予等體積生理鹽水;各組n均為5,分別于頸外靜脈注射后3周檢測各項指標。3.1.0×106adscs干預不同劑量mct誘導的pah大鼠:70只sd大鼠隨機分為nc組、不同劑量mct誘導的pah組和adscs組。pah和adscs組分別予mct20mg/kg(p-20和a-20組)、30mg/kg(p-30和a-30組)和40mg/kg(p-40和a-40組)。adscs組在mct注射后7天移植1.0×106adscs,其余各組予等體積生理鹽水。mct注射后4周和8周檢測各項指標,各組每個時間點n均為5。4.1.0×106adscs不同移植時間、不同治療周期干預pah大鼠:48只sd大鼠隨機分為nc組(nc-4w和nc-5w組,n均為8)、pah組(p-4w和p-5w組,n均為8)和adscs組。pah和adscs組予40mg/kgmct,nc組予相應體積的生理鹽水。adscs組分別于mct注射后1天(a1d-4w組,n=8)、7天(a7d-4w組,n=8)和14天(a14d-4w和a14d-5w組,n均為8)移植1.0×106adscs。各組n均為6,nc-5w、p-5w和a14d-5w組于mct注射后5周檢測各項指標,其余各組于mct注射后4周檢測各項指標。結果:1.adscscd29和cd90陽性,cd34、cd45和cd31陰性;成脂和成骨誘導后胞漿內分別出現橘紅色脂滴和棕紅色鈣化顆粒。2.①與nc組相比,pah、a1、a3和a4組的mpap和rvhi均升高,a2組的rvhi升高而mpap無統(tǒng)計學意義;與pah組相比,a2組的mpap降低而rvhi差異無統(tǒng)計學意義;pah、a1、a3、a4四組間的mpap和rvhi差異均無統(tǒng)計學意義;與a1組相比,a2組的mpap和rvhi差異均無統(tǒng)計學意義;與a2組相比,a3、a4組的mpap升高而rvhi差異無統(tǒng)計學意義。②各組間mpap和rvhi差異均無統(tǒng)計學意義。③nc、p-20和a-20組之間在4周、8周時mpap和rvhi差異均無統(tǒng)計學意義;與nc組相比,p-30和a-30組的mpap和rvhi在4周時升高而8周時無統(tǒng)計學意義,p-30和a-30兩組之間相比在4周和8周時均無統(tǒng)計學意義;與nc組相比,p-40和a-40組的mpap和rvhi在4周時升高,8周時p-40和a-40組全部死亡;與p-40組相比,a-40組的mpap在4周時下降而rvhi無統(tǒng)計學意義。④與nc組相比,p-4w、a1d-4w組的mpap和rvhi均有不同程度的升高,a7d-4w和a14d-4w組的rvhi升高而mpap差異無統(tǒng)計學意義;與p-4w組相比,A7d-4w和A14d-4w組的mPAP降低而RVHI差異無統(tǒng)計學意義;與A1d-4w組相比,A7d-4w的mPAP降低而RVHI差異無統(tǒng)計學意義,A14d-4w組的mPAP和RVHI差異均無統(tǒng)計學意義;P-4w和A1d-4w組之間以及A7d-4w和A14d-4w組之間相比差異無統(tǒng)計學意義。與NC組相比,P-5w和A14d-5w組的mPAP和RVHI均有不同程度的升高;與P-5w組相比,A14d-5w組的mPAP和RVHI明顯降低。結論:1.一次性腹腔注射40mg/kg MCT4~5周可以誘導建立穩(wěn)定的PAH大鼠模型。單次小劑量MCT不能構建穩(wěn)定的PAH大鼠模型。2.一次性腹腔注射40mg/kg MCT 14天后移植1×106ADSCs治療2~3周能有效地降低PAH大鼠的mPAP。3.PAH時RVHI與mPAP間存在明顯的對數相關性。
【關鍵詞】：脂肪干細胞 肺動脈高壓 野百合堿
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R544.1
【目錄】：

• 縮略詞表6-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 引言14-16
• 實驗材料與方法16-25
• 1 實驗材料16-18
• 1.1 實驗動物16
• 1.2 實驗材料與儀器16-18
• 2 實驗方法18-25
• 2.1 ADSCs的分離、培養(yǎng)與鑒定18-21
• 2.1.1 ADSCs的分離和培養(yǎng)18-19
• 2.1.2 ADSCs 的傳代19
• 2.1.3 ADSCs 的鑒定19-20
• 2.1.4 ADSCs 的移植20-21
• 2.2 動物實驗分組及干預措施21-23
• 2.3 右心導管法測定平均肺動脈壓（mean pulmonary arterial pressure，mPAP）23-24
• 2.4 右心室肥厚指數（right ventricular hypertrophy index, RVHI）的測定24
• 2.5 統(tǒng)計學方法24-25
• 結果25-39
• 1 大鼠ADSCs的鑒定25-27
• 1.1 大鼠ADSCs形態(tài)學特征25-26
• 1.2 流式細胞儀測定ADSCs的表面標記26
• 1.3 ADSCs的多向誘導分化26-27
• 2 動物的一般狀態(tài)及存活情況27-28
• 3 ADSCs對MCT誘導的PAH大鼠mPAP和RVHI的影響28-37
• 3.1 不同劑量ADSCs干預MCT誘導的PAH大鼠28-30
• 3.2 不同劑量ADSCs干預正常SD大鼠30-32
• 3.3 1×10~6 ADSCs干預不同劑量MCT誘導的PAH大鼠32-34
• 3.4 1.0×10~6 ADSCs不同移植時間、不同治療周期干預PAH大鼠34-37
• 4 平均肺動脈壓與右室肥厚指數的相關性分析37-39
• 討論39-49
• 1 肺動脈高壓動物模型39-40
• 2 ADSCs對MCT誘導的PAH大鼠mPAP和RVHI的影響40-46
• 2.1 不同數量ADSCs干預MCT誘導的PAH大鼠40-42
• 2.2 不同劑量ADSCs干預正常SD大鼠42-43
• 2.3 1×10~6 ADSCs干預不同劑量MCT誘導的PAH大鼠43-45
• 2.4 1.0×10~6 ADSCs不同移植時間、不同治療周期干預MCT誘導的PAH大鼠45-46
• 3 mPAP與RVHI的相關性46-49
• 結論49-50
• 參考文獻50-55
• 綜述55-64
• 參考文獻60-64
• 致謝64

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前1條

1 馬凱;邢泉生;邢介龍;泮思林;;不同劑量野百合堿誘導大鼠肺動脈高壓模型的實驗研究(英文)[J];現代生物醫(yī)學進展;2013年21期

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本文編號：627533