發(fā)布時間：2017-08-06 00:05

  本文關(guān)鍵詞：慢性炎癥刺激對小鼠主動脈內(nèi)皮脂肪酶表達(dá)影響的研究

  更多相關(guān)文章： 脂多糖 內(nèi)皮脂肪酶 阿托伐他汀 NF-κB p38MAPK

【摘要】：1研究背景和目的心腦血管疾病已成為威脅人類健康的頭號殺手,動脈粥樣硬化則是其重要的致病因素之一。目前認(rèn)為,動脈粥樣硬化發(fā)生和發(fā)展的主要原因是脂質(zhì)代謝紊亂和炎癥反應(yīng),雖然它們各自都是動脈粥樣硬化獨立的危險因素,但越來越多的研究表明,二者在動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過程中是相互影響和相互促進(jìn)的。內(nèi)皮脂肪酶是近年來新發(fā)現(xiàn)的甘油三酯脂酶家族的成員,在脂代謝過程中發(fā)揮著重要作用。內(nèi)皮脂肪酶主要具有磷脂酶活性,是高密度脂蛋白代謝的關(guān)鍵酶,其主要由內(nèi)皮細(xì)胞分泌產(chǎn)生,肝細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞等也可有少量分泌。高密度脂蛋白是動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展過程中的保護(hù)性因素,因而抑制EL的活性或減少EL的表達(dá),可能在一定程度上抑制動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。EL的表達(dá)調(diào)控受多種因素影響,炎癥、血壓及血管剪切力等都可影響EL的表達(dá)；此外,ANGPTL3是由肝臟分泌產(chǎn)生的一種細(xì)胞因子,在脂質(zhì)代謝中發(fā)揮重要作用。相關(guān)研究表明其可能是內(nèi)源性的EL抑制劑。由于炎癥是動脈粥樣硬化重要的致病因素之一。因此,進(jìn)一步明確炎癥調(diào)控內(nèi)皮脂肪酶在體內(nèi)表達(dá)的機制,則可能為我們在脂質(zhì)代謝紊亂和炎癥反應(yīng)之間構(gòu)建一個新的橋梁,進(jìn)而為動脈粥樣硬化的研究和干預(yù)提供新的思路。脂多糖(LPS)是重要的炎癥反應(yīng)的刺激物,它可以選擇性的作用于細(xì)胞表面的Toll樣受體4(TLR-4),從而激活細(xì)胞內(nèi)的炎癥反應(yīng)信號通路,例如NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等,研究已表明LPS可促進(jìn)動物及人類的動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展。NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和p38MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路都是炎癥反應(yīng)時細(xì)胞內(nèi)重要的信號傳導(dǎo)系統(tǒng)。研究表明,其可能是各種危險因素導(dǎo)致動脈粥樣硬化的機制之一。PDTC是一種金屬離子螫合劑,其可以競爭性抑制IκBα的釋放,進(jìn)而抑制NF-κB信號傳導(dǎo)通路的激活。SB203580可以選擇性的抑制p38MAPK的激活,而對于JNK/SAPK和p44/42MAPK(即Erkl／2)無顯著作用。本課題以野生型C57BL／6小鼠和ApoE-/-小鼠為研究對象,通過腹腔注射脂多糖作為慢性炎癥刺激,觀察在體內(nèi)炎癥環(huán)境下脂多糖對小鼠主動脈內(nèi)皮脂肪酶(EL)、NF-κBp65、 p38MAPK及磷酸化的p38MAPK的表達(dá)影響,同時觀察他汀類藥物(阿托伐他汀鈣)對該效應(yīng)的抑制作用。此外通過腹腔注射NF-κB信號通路阻斷劑PDTC和p38MAPK信號通路阻斷劑SB203580進(jìn)一步驗證脂多糖是否通過NF-κ B和p38MAPK信號傳導(dǎo)途徑調(diào)節(jié)小鼠主動脈內(nèi)EL的表達(dá)。2研究方法2.1動物模型的建立選取8周齡野生型雄性C57BL／6小鼠共40只,8周齡雄性ApoE-/-、鼠共8只,適應(yīng)性普食喂養(yǎng)一周后,改為高脂飲食(15%黃油,0.25%膽固醇)喂養(yǎng)。實驗分組共分為六組,每組8只,包括：①LPS(C57BL/6)組：腹腔注射LPS(2mg/kg),每周三次,持續(xù)12周；②LPS(ApoE-/-)組：同樣給予腹腔注射LPS(2mg/kg),每周三次,持續(xù)12周；③阿托伐他汀鈣組：腹腔注射LPS(2mg/kg),同時給予阿托伐他汀鈣懸液灌胃(20mg/kg/d),持續(xù)12周：④正常對照組：腹腔注射生理鹽水(2mg/kg),每周三次,持續(xù)12周；⑤PDTC組：腹腔注射LPS(2mg/kg),同時給予PDTC(20mg/kg/d)腹腔注射,持續(xù)12周；⑥SB203580組：腹腔注射LPS(2mg/kg),同時給予SB203580(5ug/kg/d)腹腔注射,持續(xù)12周。在藥物干預(yù)的12周末,對各組小鼠進(jìn)行安樂死。2.2血脂測定前4組(LPS(C57BL/6)組，，LPS(ApoE-/-)組,阿托伐他汀鈣組,正常對照組)小鼠處死前,空腹經(jīng)心臟采血,收集血清,檢測甘油三酯(TG),總膽固醇(TC),低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C),高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C).2.3血清[NF-a、IL-1β和ANGPTL3測定通過酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA),用試劑盒對采集的前4組小鼠(同上)的血清進(jìn)行TNF-a、IL-1β和ANGPTL3的含量測定。2.4 HE染色和免疫組化ApoE-/-組小鼠和正常對照組小鼠在藥物干預(yù)12周后取材。取主動脈弓部至降主動脈長約1-1.5cm的組織,脫水后石蠟包埋,5um切片行HE染色。應(yīng)用免疫組化方法檢測ApoE-/-小鼠和正常對照組小鼠主動脈內(nèi)EL的表達(dá),Image-Pro Plus 5.0圖像分析軟件計算陽性面積占動脈粥樣硬化斑塊面積百分比。2.5Western Blot取前4組小鼠(同上)主動脈弓部至降主動脈長約1-1.5cm的組織,用加入了磷酸酶抑制劑的蛋白裂解液裂解組織提取總蛋白,然后用BCA法測定蛋白濃度。電泳轉(zhuǎn)膜,封閉,孵育一抗、二抗、發(fā)光,測量主動脈內(nèi)EL.NF-κ B p65.p38MAPK以及p-p38MAPK的相對含量。2.6統(tǒng)計學(xué)分析實驗數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(MEAN±SD)表示,兩兩比較采用非配對t檢驗,多個實驗組之間的比較采用單因素方差分析(ANOVA).統(tǒng)計學(xué)分析采用Graph Prism5統(tǒng)計軟件。P0.05,差異有統(tǒng)計學(xué)差異。3.結(jié)果3.1 LPS(C57BL/6)組和LPS(ApoE-/-)組小鼠血清中總膽固醇表達(dá)水平較正常對照組明顯升高,p0.05； LPS(C57BL/6)組和LPS(ApoE-/-)組小鼠血清中高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)表達(dá)水平較正常對照組明顯降低,p0.05。阿托伐他汀鈣組小鼠血清總膽固醇表達(dá)水平較LPS(C57BL/6)組明顯降低,而血清高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)表達(dá)水平,較LPS(C57BL/6)組小鼠明顯增加,均p0.05。3.2 LPS(C57BL/6)組和LPS(ApoE-/-)組小鼠血清中TNF-α和IL-1 β表達(dá)量較正常對照組均明顯增加,均p0.05。阿托伐他汀鈣組小鼠血清TNF-α和IL-1β表達(dá)量則較LPS(C57BL/6)組小鼠明顯降低,均p0.05。3.3 LPS(C57BL/6)組和LPS(ApoE-/-)組小鼠血清中ANGPTL3的表達(dá)量較正常對照組明顯降低,均p0.05。阿托伐他汀鈣組小鼠血清ANGPTL3表達(dá)量則較LPS(C57BL/6)組小鼠明顯增加,p0.05。3.4 LPS(C57BL/6)組和LPS(ApoE-/-)組小鼠EL的表達(dá)量較正常對照組明顯增加,均p0.05。阿托伐他汀鈣組主動脈EL的表達(dá)量與單純接受LPS刺激的C57BL/6小鼠相比明顯減少,p0.05。3.5 LPS(C57BL/6)組小鼠和LPS(ApoE-/-)組小鼠主動脈內(nèi)NF-κ B p65和p-p38MAPK蛋白表達(dá)量較正常對照組明顯增加,均p0.05；阿托伐他汀鈣組小鼠主動脈內(nèi)p-p38MAPK蛋白表達(dá)量與單純接受LPS刺激的C57BL/6小鼠相比明顯減少,均p0.05,而NF-κ B p65蛋白表達(dá)量變化則不顯著。3.6野生型C57BL/6小鼠在腹腔注射LPS的同時,腹腔注射PDTC,主動脈EL的表達(dá)量與單純接受LPS刺激的C57BL／6小鼠相比明顯減少,p0.05。3.7野生型C57BL/6、鼠在腹腔注射LPS的同時,腹腔注射SB203580,主動脈EL的表達(dá)量與單純接受LPS刺激的C57BL/6、鼠相比明顯減少,p0.05。3.8 HE染色結(jié)果顯示正常對照組小鼠主動脈弓部內(nèi)膜光滑,無明顯增厚,內(nèi)皮細(xì)胞排列整齊。ApoE-/-小鼠主動脈弓部內(nèi)膜和中膜則有明顯的動脈粥樣硬化表現(xiàn),可見多發(fā)的動脈粥樣硬化斑塊形成。免疫組化結(jié)果顯示,正常對照組小鼠主動脈內(nèi)幾乎沒有EL的表達(dá),而ApoE-/-小鼠主動脈內(nèi)膜,尤其是斑塊內(nèi),則可見明顯的EL的表達(dá)。4.結(jié)論1.LPS可以增加炎癥因子TNF-α和IL-1β的表達(dá),并可能通過這種慢性炎癥反應(yīng)促進(jìn)野生型C57BL／6小鼠和ApoE-/-小鼠主動脈內(nèi)皮脂肪酶的表達(dá)。2.LPS可能通過抑制ANGPTL3的表達(dá)促進(jìn)小鼠主動脈內(nèi)皮脂肪酶的表達(dá)。3.LPS促進(jìn)小鼠主動脈內(nèi)皮脂肪酶表達(dá)的效應(yīng)可能部分通過激活NF-ΚB和p38MAPK信號傳導(dǎo)途徑實現(xiàn)。4.阿托伐他汀可能通過抑制p38MAPK信號通路的活性抑制LPS誘導(dǎo)的小鼠主動脈內(nèi)皮脂肪酶表達(dá)增加的效應(yīng)。5.內(nèi)皮脂肪酶可能通過NF-κ B和p38MAPK信號通路促進(jìn)ApoE-/-小鼠主動脈內(nèi)動脈粥樣硬化斑塊的形成。
【關(guān)鍵詞】：脂多糖 內(nèi)皮脂肪酶 阿托伐他汀 NF-κB p38MAPK
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R743;R543.5
【目錄】：

• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-16
• 符號說明16-17
• 前言17-21
• 實驗材料21-25
• 實驗方法25-33
• 結(jié)果33-37
• 討論37-41
• 結(jié)論41-43
• 附表43-45
• 附圖45-51
• 參考文獻(xiàn)51-55
• 致謝55-56
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄56-57
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表57

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳瑛;藺莉;金華;;絕經(jīng)早期和絕經(jīng)晚期小鼠主動脈病理改變及雌激素受體表達(dá)的對比研究[J];中國全科醫(yī)學(xué);2010年30期

2 嚴(yán)宗毅;;主動脈零應(yīng)力狀態(tài)與種屬的關(guān)系:豬與鼠[J];國外醫(yī)學(xué).生物醫(yī)學(xué)工程分冊;1992年02期

3 張莉;吳賽珠;張帆;洪雷;賴文巖;;生理劑量的雄激素對去勢小鼠主動脈線粒體DNA缺失突變的影響[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2011年01期

4 唐志剛;;大白鼠主動脈脂代謝中的衰老作用[J];國外醫(yī)學(xué)(老年醫(yī)學(xué)分冊);1986年03期

5 張莉;吳賽珠;阮云軍;張帆;洪雷;劉公理;王琦;;雄激素缺乏對雄性小鼠主動脈增齡性變化的影響[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2011年02期

6 歷志;魏旭峰;顧春虎;康曉軍;王春梅;韓驊;易定華;;正常小鼠主動脈瓣膜的組織形態(tài)學(xué)研究[J];心臟雜志;2010年05期

7 趙書民,朱琳,李利軍;小鼠主動脈發(fā)生的觀察[J];解剖學(xué)報;1997年01期

8 周信;張小榮;張秋燕;崔翰明;;生半夏及其炮制品對小鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞炎性因子分泌的影響[J];中國實驗方劑學(xué)雜志;2013年10期

9 T.Izumi;速凍、深蝕刻復(fù)制顯示鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞小泡的胞漿表面膜的紋狀結(jié)構(gòu)[J];廣東解剖學(xué)通報;1989年02期

10 倪偉;劉濤;王浩宇;劉小艷;劉麗華;陳桂秀;白亦光;李健;;小鼠主動脈平滑肌細(xì)胞Robo4膜蛋白的提取[J];檢驗醫(yī)學(xué)與臨床;2013年22期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 仲英潔;張子為;徐郁;花曉敏;胡云;;阿托伐他汀對ApoE~(-/-)小鼠主動脈粥樣硬化和血管鈣化的影響及機制研究[A];中華醫(yī)學(xué)會糖尿病學(xué)分會第十六次全國學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

2 楊婭;王艷紅;李治安;謝謹(jǐn)捷;秦彥文;;正常小鼠主動脈的超聲生物顯微鏡顯像分析[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國超聲醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 齊巖梅;神經(jīng)生長因子對小鼠主動脈環(huán)血管新生及人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響[D];大連醫(yī)科大學(xué);2008年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 牛榮榮;外源性磷酸肌酸對動脈粥樣硬化斑塊形成和穩(wěn)定性的作用的研究[D];山東大學(xué);2015年

2 張炎;慢性炎癥刺激對小鼠主動脈內(nèi)皮脂肪酶表達(dá)影響的研究[D];山東大學(xué);2016年

3 張莉;去勢對小鼠主動脈衰老的影響及生理劑量睪酮的干預(yù)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年

4 劉永玲;外源性微直流電場對小鼠主動脈環(huán)血管新生的影響[D];云南師范大學(xué);2014年

本文編號：627495