本文關(guān)鍵詞：血漿microRNAs預(yù)測(cè)氯吡格雷抗血小板療效及心血管不良事件的研究

  更多相關(guān)文章： 血漿miRNA 氯吡格雷 miR-142 抗血小板治療 冠心病

【摘要】：目的:血漿中存在穩(wěn)定的并可以反映血小板被激活情況的特異性microRNAs,具備作為冠心病等疾病的生物標(biāo)記物潛能。我們前期研究也發(fā)現(xiàn),血漿miR-126可能是潛在的預(yù)測(cè)經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療PCI術(shù)后冠心病患者心臟主要不良事件的生物標(biāo)記物。本課題旨在通過(guò)對(duì)氯吡格雷藥動(dòng)學(xué)/藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)尋找與氯吡格雷藥物效應(yīng)有關(guān)的miRN As,用miRNAs對(duì)PCI術(shù)后冠心病患者服用氯吡格雷后在隨訪期內(nèi),發(fā)生主要不良心血管事件MACE的風(fēng)險(xiǎn)率和次要終點(diǎn)出血事件發(fā)生率進(jìn)行預(yù)測(cè)評(píng)估,探討血漿循環(huán)miRNAs是否可以作為評(píng)估氯吡格雷抗血小板療效個(gè)體差異的生物標(biāo)記物。方法:(1)篩選與氯吡格雷藥效有關(guān)的miRNAs:首先設(shè)計(jì)系列預(yù)實(shí)驗(yàn)來(lái)建立、優(yōu)化血漿miRNA提取和定量檢測(cè)的方法;入選診斷為冠心病的患者153例,服用氯吡格雷首劑300 mg負(fù)荷劑量以及阿司匹林100 mg后,用VerifyNow抗血小板治療監(jiān)測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)血小板集聚率ARU、PRU,根據(jù)檢測(cè)結(jié)果分組并組成血漿樣本池,提取血漿總RNA;運(yùn)用illumina高通量測(cè)序檢測(cè)并篩選在組間差異表達(dá)的miRN As;然后基于特異性莖環(huán)引物qRT-PCR方法,驗(yàn)證和篩選的這些miRNAs在樣本池間的表達(dá);同時(shí)也通過(guò)qRT-PCR方法在每個(gè)單獨(dú)患者血漿樣本間檢測(cè)篩選到的miRNAs表達(dá)水平,用Spearman相關(guān)分析方法統(tǒng)計(jì)血漿循環(huán)miRNAs與氯吡格雷藥效學(xué)(血小板聚集率PRU)的相關(guān)性;(2)用所篩選miRNAs預(yù)測(cè)氯吡格雷藥動(dòng)學(xué)效應(yīng):入選另一診斷為冠心病的人群31例,服用氯吡格雷首劑300 mg負(fù)荷劑量以及阿司匹林100 mg,進(jìn)行氯吡格雷藥代動(dòng)力學(xué)考察以及服藥前血漿miRNAs檢測(cè),分析miRNAs表達(dá)水平與氯吡格雷活性代謝產(chǎn)物MP-H4藥代動(dòng)力學(xué)PK參數(shù)(Cmax、AUC0-4h、Tmax)的相關(guān)性與預(yù)測(cè)性;(3)在前瞻性隊(duì)列驗(yàn)證miRNAs與心血管不良事件的影響:入選診斷為冠心病,并且服用氯吡格雷聯(lián)合阿司匹林抗血小板治療的患者1230例,作為獨(dú)立的前瞻性研究隊(duì)列,進(jìn)行為期三年的隨訪調(diào)查,同時(shí)采集患者入院后服藥前的血漿,檢測(cè)所篩選到的mirnas的表達(dá)水平,運(yùn)用cox回歸或logistic回歸模型分析臨床基線特征資料和血漿mirnas表達(dá)水平分別與患者隨訪期內(nèi)發(fā)生主要終點(diǎn)mace事件和次要終點(diǎn)出血事件風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系,篩選能夠預(yù)測(cè)氯吡格雷抗血小板療效個(gè)體差異的中間指標(biāo)。結(jié)果:(1)本實(shí)驗(yàn)建立和優(yōu)化的對(duì)血漿mirnas定量分析的qrt-pcr方法有效可行。通過(guò)illumina建庫(kù)測(cè)序檢測(cè)篩選到17個(gè)在組間差異表達(dá)的mirnas。其中,在血漿樣本池間驗(yàn)證得到與測(cè)序結(jié)果相一致的有6個(gè)mirnas(mir-126、mir-130a、mir-27a、mir-106a、mir-21、mir-142)。并且,這6個(gè)血漿mirnas中mir-126、mir-130a、mir-27a、mir-142在氯吡格雷抵抗人群中表達(dá)上調(diào)(p0.05)。在發(fā)生阿司匹林抵抗時(shí),mir-126、mir-130a、mir-142、mir-21和mir-27a在氯吡格雷抗抵抗人群中表達(dá)顯著升高(p0.05)。(2)在氯吡格雷藥代動(dòng)力學(xué)研究中,運(yùn)用錯(cuò)誤控制方法fdr對(duì)p值進(jìn)行多重檢驗(yàn)校正后發(fā)現(xiàn),患者服藥前血漿mir-142的表達(dá)水平與mp-h4cmax和auc0-4h顯著負(fù)性相關(guān)(p0.05)。(3)在前瞻性隊(duì)列研究中,較高的mir-142和mir-126的表達(dá)水平與該患者接受氯吡格雷抗血小板治療后mace事件高發(fā)生率顯著相關(guān)(p值分別為0.0006、0.0353)。多因素cox回歸分析顯示,血漿mir-142表達(dá)水平、合并疾病糖尿病、心衰以及使用鈣離子通道拮抗劑是患者在氯吡格雷用藥后隨訪期內(nèi)發(fā)生mace風(fēng)險(xiǎn)率的獨(dú)立影響因素(p值均0.05)。另外,血漿mir-21、mir-27a、mir-106a、mir-126、mir-130a和mir-142的表達(dá)水平,與患者服用氯吡格雷后在隨訪期內(nèi)發(fā)生或不發(fā)生出血事件無(wú)明顯關(guān)聯(lián)性。結(jié)論:血漿mir-126、mir-130a、mir-142、mir-21和mir-27a可能是反映氯吡格雷抗血小板藥物效應(yīng)的潛在中間指標(biāo)。在pci術(shù)后服用氯吡格雷的冠心病患者中,血漿mir-142表達(dá)水平與糖尿病、心衰和合并使用鈣離子通道阻滯劑都是引起mace的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素�；趯�(duì)miR-142與氯吡格雷藥動(dòng)/藥效學(xué)的相關(guān)研究證明,血漿miR-142可以作為評(píng)估其抗血小板藥物效應(yīng)個(gè)體差異以及預(yù)測(cè)臨床終點(diǎn)事件的生物標(biāo)記物。
【關(guān)鍵詞】：血漿miRNA 氯吡格雷 miR-142 抗血小板治療 冠心病
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R541.4
【目錄】：

• 摘要7-10
• ABSTRACT10-13
• 序言13-16
• 第一章 血漿循環(huán)miRNAs定量技術(shù)的建立與優(yōu)化16-31
• 1.1 引言16
• 1.2 材料與方法16-22
• 1.2.1 儀器與設(shè)備16-17
• 1.2.2 藥品與試劑17-18
• 1.2.3 樣品采集與處理18
• 1.2.4 血漿總RNA提取純化18-20
• 1.2.5 RNA濃度及純度檢測(cè)20
• 1.2.6 miRN A莖環(huán)法逆轉(zhuǎn)錄為cDN A20-21
• 1.2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR21-22
• 1.2.8 外參cel-miR-39 c DNA濃度梯度稀釋檢測(cè)22
• 1.3 結(jié)果22-29
• 1.3.1 血漿總RNA濃度檢測(cè)結(jié)果22-23
• 1.3.2 血漿miRN A和外參cel- miR-39的表達(dá)情況23-27
• 1.3.3 外參cel-miR-39 c DNA濃度梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線27-29
• 1.4 討論29-30
• 1.5 結(jié)論30-31
• 第二章 血漿miRNAs與氯吡格雷藥效學(xué)（PD）的相關(guān)性研究31-51
• 2.1 引言31-32
• 2.2 研究對(duì)象32-33
• 2.2.1 病例入選32
• 2.2.2 病例臨床基線資料錄入32
• 2.2.3 病例分組與研究方案32-33
• 2.2.4 藥效定義33
• 2.3 材料與方法33-38
• 2.3.1 儀器與設(shè)備33-34
• 2.3.2 藥品與試劑34-35
• 2.3.3 樣品收集處理35
• 2.3.4 檢測(cè)氯吡格雷及活性代謝產(chǎn)物MP-H4血藥濃度的LC/MS/MS方法建立35
• 2.3.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制35-36
• 2.3.6 液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)血漿樣品的前處理方法36
• 2.3.7 VerifyNow抗血小板治療監(jiān)測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)阿司匹林、氯吡格雷抗血小板療效36-37
• 2.3.8 病例分組與血漿樣本池組建37
• 2.3.9 血漿樣本總RNA提取純化37-38
• 2.3.10 Illumina高通量測(cè)序38
• 2.3.11 冠心病患者血漿miRNAs表達(dá)水平檢測(cè)38
• 2.4 統(tǒng)計(jì)分析方法38
• 2.5 結(jié)果38-47
• 2.5.1 病例臨床基線資料及其對(duì)MP-H4血藥濃度和血小板聚集率PRU的影響38-39
• 2.5.2 氯吡格雷及活性代謝產(chǎn)物血藥濃度39-40
• 2.5.3 血小板聚集率PRU、ARU檢測(cè)結(jié)果40-41
• 2.5.4 血小板聚集率與活性代謝產(chǎn)物MP-H4血藥濃度的相關(guān)性41-42
• 2.5.6 病例分組結(jié)果42
• 2.5.7 血漿樣本池illumina測(cè)序及miRNA篩選結(jié)果42-43
• 2.5.8 qRT-PCR驗(yàn)證血漿樣本混合池的測(cè)序結(jié)果43-44
• 2.5.9 血漿miRN As表達(dá)與血小板聚集率PRU相關(guān)性44-45
• 2.5.10 血漿miRN A表達(dá)在氯吡格雷敏感與抵抗人群中的差異45-47
• 2.6 討論47-50
• 2.7 結(jié)論50-51
• 第三章 血漿miRNAs對(duì)氯吡格雷藥代動(dòng)力學(xué)（PK）預(yù)測(cè)性研究51-61
• 3.1 引言51
• 3.2 研究對(duì)象51-52
• 3.2.1 冠心病患者入選51-52
• 3.2.2 冠心病患者臨床基線資料錄入52
• 3.3 材料與方法52-55
• 3.3.1 儀器與設(shè)備52-53
• 3.3.2 藥品與試劑53-54
• 3.3.3 樣品收集處理54
• 3.3.4 檢測(cè)血漿中氯吡格雷及其代謝產(chǎn)物藥代動(dòng)力學(xué)的LC/MS/MS方法54
• 3.3.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制54
• 3.3.6 血漿樣品前處理54
• 3.3.7 冠心病患者血漿RNA提取純化54-55
• 3.3.8 冠心病患者血漿miRNAs表達(dá)檢測(cè)55
• 3.4 統(tǒng)計(jì)分析方法55
• 3.5 結(jié)果55-59
• 3.5.1 冠心病患者臨床基線資料及其對(duì)氯吡格雷和代謝產(chǎn)物MP-H4藥代動(dòng)力學(xué)的影響55-58
• 3.5.2 血漿miRN As表達(dá)水平對(duì)氯吡格雷活性代謝產(chǎn)物MP-H4 PK參數(shù)（Cmax、AUC0-4h和Tmax）的相關(guān)分析58-59
• 3.6 討論59-60
• 3.7 結(jié)論60-61
• 第四章 血漿miRNAs對(duì)氯吡格雷用藥后心血管不良事件（MACE）和出血事件的前瞻性隊(duì)列預(yù)測(cè)研究61-72
• 4.1 引言61
• 4.2 研究對(duì)象61-63
• 4.2.1 病例入選61-62
• 4.2.2 病例臨床基線資料錄入62
• 4.2.3 隨訪方案及資料采集62-63
• 4.2.4 事件定義63
• 4.3 材料與方法63-65
• 4.3.1 儀器與設(shè)備63-64
• 4.3.2 藥品與試劑64
• 4.3.3 樣品收集處理64-65
• 4.3.4 血漿RNA提取純化65
• 4.3.5 血漿miRN As表達(dá)檢測(cè)65
• 4.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析65
• 4.5 結(jié)果65-70
• 4.5.1 研究病例臨床基線資料及其對(duì)主要終點(diǎn)MACE事件的影響65-66
• 4.5.2 血漿miRN As表達(dá)水平與MACE事件發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)分析結(jié)果66-68
• 4.5.3 臨床基線特征和血漿miRNAs表達(dá)水平對(duì)次要終點(diǎn)出血事件的影響68-70
• 4.6 討論70-71
• 4.7 結(jié)論71-72
• 全文結(jié)論72-73
• 參考文獻(xiàn)73-79
• 攻讀碩士學(xué)位期間的成果79-80
• 致謝80-81
• 附錄81-83
• 縮略詞81-83

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張昌明;張婉芬;劉春蓓;曾科;劉志紅;;循環(huán)microRNAs與局灶節(jié)段性腎小球硬化患者疾病活動(dòng)的關(guān)系[J];腎臟病與透析腎移植雜志;2013年04期

2 魏麗萍;許振坤;姚朱華;;MicroRNAs在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病中的作用及研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2011年16期

3 任景怡;許寧;韓冠平;陳紅;;microRNAs參與動(dòng)脈粥樣硬化疾病的發(fā)生[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2011年06期

4 丁婧;孟雁;;microRNAs與糖尿病[J];中國(guó)糖尿病雜志;2010年07期

5 徐莎;劉厚奇;;MicroRNAs與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2013年04期

6 張婉芬;張昌明;劉春蓓;秦衛(wèi)松;鄭春霞;曾科;劉志紅;;尿液microRNAs作為局灶節(jié)段性腎小球硬化疾病活動(dòng)生物標(biāo)志物的研究[J];腎臟病與透析腎移植雜志;2013年04期

7 譚勝;朱濤;;MicroRNAs在消化系相關(guān)腫瘤中的研究[J];胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志;2009年03期

8 何相宜;袁耀宗;;胰腺癌與糖尿病、胃腸道微生態(tài)和microRNAs關(guān)系的研究現(xiàn)狀[J];胃腸病學(xué);2014年04期

9 曹美群;陳德珩;張春虎;吳正治;;抑郁模型大鼠海馬內(nèi)特異性microRNAs的篩選以及柴胡疏肝散的干預(yù)作用[J];中國(guó)中藥雜志;2013年10期

10 高金保;劉霞;;非酒精性脂肪性肝病患者血清中循環(huán)microRNAs表達(dá)水平及意義[J];中國(guó)肝臟病雜志(電子版);2014年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王蕓;陶筱川;呂應(yīng)堂;;水稻MicroRNAs在水稻發(fā)育過(guò)程中的功能研究[A];湖北省植物生理學(xué)會(huì)第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2007年

2 周寧;陳寶元;曹潔;湯華;劉民;鄧園;王彥;;microRNAs在阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征患者血清中的表達(dá)及意義[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)年會(huì)——2013第十四次全國(guó)呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

3 韋暉;王成;范鈺;許琪;張辰宇;沈巖;;偏執(zhí)型精神分裂癥血漿microRNAs表達(dá)譜的篩查[A];第七屆全國(guó)醫(yī)學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)和第四屆全國(guó)臨床應(yīng)用生物化學(xué)與分子生物學(xué)聯(lián)合學(xué)術(shù)研討會(huì)暨醫(yī)學(xué)生化分會(huì)會(huì)員代表大會(huì)論文集[C];2011年

4 單志新;余細(xì)勇;林秋雄;符永恒;鄧春玉;楊敏;林曙光;;microRNAs、炎癥因子及其受體基因在自發(fā)性高血壓大鼠中的表達(dá)[A];第九屆全國(guó)心血管藥理學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

5 郭士偉;劉藹民;;小RNA(MicroRNAs)的發(fā)現(xiàn)、結(jié)構(gòu)和功能[A];2006年中國(guó)植物逆境生理生態(tài)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2006年

6 鄭宗基;劉曉萌;張雷;趙倩偉;李晨鐘;薛耀明;;β3腎上腺素受體激動(dòng)劑對(duì)C57BL/6J小鼠脂肪組織棕色化相關(guān)基因和microRNAs的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二次全國(guó)內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

7 李海怡;高璐;左洪亮;鐘國(guó)華;;昆蟲(chóng)microRNAs功能研究進(jìn)展[A];公共植保與綠色防控[C];2010年

8 劉紅;韓璐璐;謝爽;婁瑩;蔣娟娟;田蕾;許莉;李一石;;連續(xù)口服厄貝沙坦對(duì)健康中國(guó)志愿者血漿MicroRNAs表達(dá)的影響[A];中國(guó)心臟大會(huì)（CHC）2011暨北京國(guó)際心血管病論壇論文集[C];2011年

9 方巧云;楊森;張學(xué)軍;;MicroRNAs及其在皮膚病上的應(yīng)用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第14次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

10 韓璐璐;劉紅;康健;邊文彥;龐會(huì)敏;李一石;;凍存血漿中MicroRNAs穩(wěn)定性評(píng)價(jià)[A];中國(guó)心臟大會(huì)（CHC）2011暨北京國(guó)際心血管病論壇論文集[C];2011年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 詹蕓;MicroRNAs在乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中的功能與機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

2 譚明;血小板源外泌小體中microRNAs作為預(yù)測(cè)動(dòng)脈粥樣硬化血栓形成的機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

3 戴欣;microRNAs在胰腺癌相關(guān)性糖尿病中的表達(dá)及相關(guān)機(jī)制研究[D];上海交通大學(xué);2013年

4 周可樹(shù);MicroRNAs在慢性淋巴增殖性疾病中的表達(dá)及其在慢性淋巴細(xì)胞白血病預(yù)后中的意義研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

5 劉雯靜;胰腺癌特異性microRNAs的篩選及機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

6 于雙妮;胰腺癌差異表達(dá)microRNAs的鑒定及功能研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2008年

7 熊薇;微泡microRNAs在肝癌診斷及發(fā)病機(jī)制中的作用研究[D];華中科技大學(xué);2012年

8 陳娜;STAT3介導(dǎo)microRNAs調(diào)控的IL-9過(guò)表達(dá)在慢性淋巴細(xì)胞性白血病免疫調(diào)節(jié)機(jī)制中的研究[D];山東大學(xué);2014年

9 高剛;氡致肺癌及肺損傷相關(guān)microRNAs的研究[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2010年

10 張彩彩;硫化氫通過(guò)microRNAs調(diào)控血管新生的機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王倩;基于雙鏈特異性核酸酶介導(dǎo)的MicroRNAs檢測(cè)新方法的研究[D];華東理工大學(xué);2016年

2 唐千捷;血漿microRNAs預(yù)測(cè)氯吡格雷抗血小板療效及心血管不良事件的研究[D];廣東藥科大學(xué);2016年

3 楊翠云;基于信號(hào)放大的高靈敏腺苷與MicroRNAs電化學(xué)生物傳感器的制備及研究[D];西南大學(xué);2016年

4 杜彥麗;microRNAs對(duì)黃牛和水牛朊病毒基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)控研究[D];云南大學(xué);2016年

5 楊丹鳳;以microRNAs為靶標(biāo)結(jié)核病新型檢測(cè)方法的建立[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

6 王曉鈺;基于microRNAs對(duì)上皮連接蛋白的調(diào)控探討升麻素抗過(guò)敏性炎癥復(fù)發(fā)的機(jī)制[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

7 張繼磊;炎癥相關(guān)因子和microRNAs在胃MALT淋巴瘤中發(fā)病機(jī)制的探討[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2012年

8 羅婷;microRNAs與慢性阻塞性肺疾病的研究進(jìn)展[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

9 羅曉燕;桃microRNAs鑒定及內(nèi)參基因的篩選[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

10 肖玲;胚胎干細(xì)胞RNAs與microRNAs相互作用網(wǎng)絡(luò)研究[D];華中師范大學(xué);2012年

，

本文編號(hào)：621340