本文關(guān)鍵詞：血漿microRNAs預(yù)測氯吡格雷抗血小板療效及心血管不良事件的研究

  更多相關(guān)文章： 血漿miRNA 氯吡格雷 miR-142 抗血小板治療 冠心病

【摘要】：目的:血漿中存在穩(wěn)定的并可以反映血小板被激活情況的特異性microRNAs,具備作為冠心病等疾病的生物標記物潛能。我們前期研究也發(fā)現(xiàn),血漿miR-126可能是潛在的預(yù)測經(jīng)皮冠狀動脈介入治療PCI術(shù)后冠心病患者心臟主要不良事件的生物標記物。本課題旨在通過對氯吡格雷藥動學(xué)/藥效學(xué)實驗尋找與氯吡格雷藥物效應(yīng)有關(guān)的miRN As,用miRNAs對PCI術(shù)后冠心病患者服用氯吡格雷后在隨訪期內(nèi),發(fā)生主要不良心血管事件MACE的風險率和次要終點出血事件發(fā)生率進行預(yù)測評估,探討血漿循環(huán)miRNAs是否可以作為評估氯吡格雷抗血小板療效個體差異的生物標記物。方法:(1)篩選與氯吡格雷藥效有關(guān)的miRNAs:首先設(shè)計系列預(yù)實驗來建立、優(yōu)化血漿miRNA提取和定量檢測的方法;入選診斷為冠心病的患者153例,服用氯吡格雷首劑300 mg負荷劑量以及阿司匹林100 mg后,用VerifyNow抗血小板治療監(jiān)測系統(tǒng)檢測血小板集聚率ARU、PRU,根據(jù)檢測結(jié)果分組并組成血漿樣本池,提取血漿總RNA;運用illumina高通量測序檢測并篩選在組間差異表達的miRN As;然后基于特異性莖環(huán)引物qRT-PCR方法,驗證和篩選的這些miRNAs在樣本池間的表達;同時也通過qRT-PCR方法在每個單獨患者血漿樣本間檢測篩選到的miRNAs表達水平,用Spearman相關(guān)分析方法統(tǒng)計血漿循環(huán)miRNAs與氯吡格雷藥效學(xué)(血小板聚集率PRU)的相關(guān)性;(2)用所篩選miRNAs預(yù)測氯吡格雷藥動學(xué)效應(yīng):入選另一診斷為冠心病的人群31例,服用氯吡格雷首劑300 mg負荷劑量以及阿司匹林100 mg,進行氯吡格雷藥代動力學(xué)考察以及服藥前血漿miRNAs檢測,分析miRNAs表達水平與氯吡格雷活性代謝產(chǎn)物MP-H4藥代動力學(xué)PK參數(shù)(Cmax、AUC0-4h、Tmax)的相關(guān)性與預(yù)測性;(3)在前瞻性隊列驗證miRNAs與心血管不良事件的影響:入選診斷為冠心病,并且服用氯吡格雷聯(lián)合阿司匹林抗血小板治療的患者1230例,作為獨立的前瞻性研究隊列,進行為期三年的隨訪調(diào)查,同時采集患者入院后服藥前的血漿,檢測所篩選到的mirnas的表達水平,運用cox回歸或logistic回歸模型分析臨床基線特征資料和血漿mirnas表達水平分別與患者隨訪期內(nèi)發(fā)生主要終點mace事件和次要終點出血事件風險的關(guān)系,篩選能夠預(yù)測氯吡格雷抗血小板療效個體差異的中間指標。結(jié)果:(1)本實驗建立和優(yōu)化的對血漿mirnas定量分析的qrt-pcr方法有效可行。通過illumina建庫測序檢測篩選到17個在組間差異表達的mirnas。其中,在血漿樣本池間驗證得到與測序結(jié)果相一致的有6個mirnas(mir-126、mir-130a、mir-27a、mir-106a、mir-21、mir-142)。并且,這6個血漿mirnas中mir-126、mir-130a、mir-27a、mir-142在氯吡格雷抵抗人群中表達上調(diào)(p0.05)。在發(fā)生阿司匹林抵抗時,mir-126、mir-130a、mir-142、mir-21和mir-27a在氯吡格雷抗抵抗人群中表達顯著升高(p0.05)。(2)在氯吡格雷藥代動力學(xué)研究中,運用錯誤控制方法fdr對p值進行多重檢驗校正后發(fā)現(xiàn),患者服藥前血漿mir-142的表達水平與mp-h4cmax和auc0-4h顯著負性相關(guān)(p0.05)。(3)在前瞻性隊列研究中,較高的mir-142和mir-126的表達水平與該患者接受氯吡格雷抗血小板治療后mace事件高發(fā)生率顯著相關(guān)(p值分別為0.0006、0.0353)。多因素cox回歸分析顯示,血漿mir-142表達水平、合并疾病糖尿病、心衰以及使用鈣離子通道拮抗劑是患者在氯吡格雷用藥后隨訪期內(nèi)發(fā)生mace風險率的獨立影響因素(p值均0.05)。另外,血漿mir-21、mir-27a、mir-106a、mir-126、mir-130a和mir-142的表達水平,與患者服用氯吡格雷后在隨訪期內(nèi)發(fā)生或不發(fā)生出血事件無明顯關(guān)聯(lián)性。結(jié)論:血漿mir-126、mir-130a、mir-142、mir-21和mir-27a可能是反映氯吡格雷抗血小板藥物效應(yīng)的潛在中間指標。在pci術(shù)后服用氯吡格雷的冠心病患者中,血漿mir-142表達水平與糖尿病、心衰和合并使用鈣離子通道阻滯劑都是引起mace的獨立風險因素�；趯iR-142與氯吡格雷藥動/藥效學(xué)的相關(guān)研究證明,血漿miR-142可以作為評估其抗血小板藥物效應(yīng)個體差異以及預(yù)測臨床終點事件的生物標記物。
【關(guān)鍵詞】：血漿miRNA 氯吡格雷 miR-142 抗血小板治療 冠心病
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R541.4
【目錄】：

• 摘要7-10
• ABSTRACT10-13
• 序言13-16
• 第一章 血漿循環(huán)miRNAs定量技術(shù)的建立與優(yōu)化16-31
• 1.1 引言16
• 1.2 材料與方法16-22
• 1.2.1 儀器與設(shè)備16-17
• 1.2.2 藥品與試劑17-18
• 1.2.3 樣品采集與處理18
• 1.2.4 血漿總RNA提取純化18-20
• 1.2.5 RNA濃度及純度檢測20
• 1.2.6 miRN A莖環(huán)法逆轉(zhuǎn)錄為cDN A20-21
• 1.2.7 實時熒光定量PCR21-22
• 1.2.8 外參cel-miR-39 c DNA濃度梯度稀釋檢測22
• 1.3 結(jié)果22-29
• 1.3.1 血漿總RNA濃度檢測結(jié)果22-23
• 1.3.2 血漿miRN A和外參cel- miR-39的表達情況23-27
• 1.3.3 外參cel-miR-39 c DNA濃度梯度稀釋標準曲線27-29
• 1.4 討論29-30
• 1.5 結(jié)論30-31
• 第二章 血漿miRNAs與氯吡格雷藥效學(xué)（PD）的相關(guān)性研究31-51
• 2.1 引言31-32
• 2.2 研究對象32-33
• 2.2.1 病例入選32
• 2.2.2 病例臨床基線資料錄入32
• 2.2.3 病例分組與研究方案32-33
• 2.2.4 藥效定義33
• 2.3 材料與方法33-38
• 2.3.1 儀器與設(shè)備33-34
• 2.3.2 藥品與試劑34-35
• 2.3.3 樣品收集處理35
• 2.3.4 檢測氯吡格雷及活性代謝產(chǎn)物MP-H4血藥濃度的LC/MS/MS方法建立35
• 2.3.5 標準溶液配制35-36
• 2.3.6 液質(zhì)聯(lián)用檢測血漿樣品的前處理方法36
• 2.3.7 VerifyNow抗血小板治療監(jiān)測系統(tǒng)檢測阿司匹林、氯吡格雷抗血小板療效36-37
• 2.3.8 病例分組與血漿樣本池組建37
• 2.3.9 血漿樣本總RNA提取純化37-38
• 2.3.10 Illumina高通量測序38
• 2.3.11 冠心病患者血漿miRNAs表達水平檢測38
• 2.4 統(tǒng)計分析方法38
• 2.5 結(jié)果38-47
• 2.5.1 病例臨床基線資料及其對MP-H4血藥濃度和血小板聚集率PRU的影響38-39
• 2.5.2 氯吡格雷及活性代謝產(chǎn)物血藥濃度39-40
• 2.5.3 血小板聚集率PRU、ARU檢測結(jié)果40-41
• 2.5.4 血小板聚集率與活性代謝產(chǎn)物MP-H4血藥濃度的相關(guān)性41-42
• 2.5.6 病例分組結(jié)果42
• 2.5.7 血漿樣本池illumina測序及miRNA篩選結(jié)果42-43
• 2.5.8 qRT-PCR驗證血漿樣本混合池的測序結(jié)果43-44
• 2.5.9 血漿miRN As表達與血小板聚集率PRU相關(guān)性44-45
• 2.5.10 血漿miRN A表達在氯吡格雷敏感與抵抗人群中的差異45-47
• 2.6 討論47-50
• 2.7 結(jié)論50-51
• 第三章 血漿miRNAs對氯吡格雷藥代動力學(xué)（PK）預(yù)測性研究51-61
• 3.1 引言51
• 3.2 研究對象51-52
• 3.2.1 冠心病患者入選51-52
• 3.2.2 冠心病患者臨床基線資料錄入52
• 3.3 材料與方法52-55
• 3.3.1 儀器與設(shè)備52-53
• 3.3.2 藥品與試劑53-54
• 3.3.3 樣品收集處理54
• 3.3.4 檢測血漿中氯吡格雷及其代謝產(chǎn)物藥代動力學(xué)的LC/MS/MS方法54
• 3.3.5 標準溶液配制54
• 3.3.6 血漿樣品前處理54
• 3.3.7 冠心病患者血漿RNA提取純化54-55
• 3.3.8 冠心病患者血漿miRNAs表達檢測55
• 3.4 統(tǒng)計分析方法55
• 3.5 結(jié)果55-59
• 3.5.1 冠心病患者臨床基線資料及其對氯吡格雷和代謝產(chǎn)物MP-H4藥代動力學(xué)的影響55-58
• 3.5.2 血漿miRN As表達水平對氯吡格雷活性代謝產(chǎn)物MP-H4 PK參數(shù)（Cmax、AUC0-4h和Tmax）的相關(guān)分析58-59
• 3.6 討論59-60
• 3.7 結(jié)論60-61
• 第四章 血漿miRNAs對氯吡格雷用藥后心血管不良事件（MACE）和出血事件的前瞻性隊列預(yù)測研究61-72
• 4.1 引言61
• 4.2 研究對象61-63
• 4.2.1 病例入選61-62
• 4.2.2 病例臨床基線資料錄入62
• 4.2.3 隨訪方案及資料采集62-63
• 4.2.4 事件定義63
• 4.3 材料與方法63-65
• 4.3.1 儀器與設(shè)備63-64
• 4.3.2 藥品與試劑64
• 4.3.3 樣品收集處理64-65
• 4.3.4 血漿RNA提取純化65
• 4.3.5 血漿miRN As表達檢測65
• 4.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析65
• 4.5 結(jié)果65-70
• 4.5.1 研究病例臨床基線資料及其對主要終點MACE事件的影響65-66
• 4.5.2 血漿miRN As表達水平與MACE事件發(fā)生風險分析結(jié)果66-68
• 4.5.3 臨床基線特征和血漿miRNAs表達水平對次要終點出血事件的影響68-70
• 4.6 討論70-71
• 4.7 結(jié)論71-72
• 全文結(jié)論72-73
• 參考文獻73-79
• 攻讀碩士學(xué)位期間的成果79-80
• 致謝80-81
• 附錄81-83
• 縮略詞81-83

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