發(fā)布時(shí)間：2017-07-18 14:08

  本文關(guān)鍵詞：Corin在糖尿病心肌病發(fā)病機(jī)制中的作用

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【摘要】：目的隨著糖尿病(diabetes mellitus,DM)發(fā)病率的逐年上升,糖尿病并發(fā)癥日益受到人們的重視。糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)是糖尿病患者主要心臟并發(fā)癥之一,也是糖尿病患者的首要死因。目前糖尿病心肌病發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚。有研究表明血管重構(gòu)是糖尿病心肌病的病理生理學(xué)基礎(chǔ),心臟酶Corin可以高度特異性的將心房利鈉肽前體(pro-atrial natriuretic peptide,pro-ANP)轉(zhuǎn)換為具有生物學(xué)活性的心房利鈉肽(atrial natriuretic peptide,ANP),而且我們前期研究發(fā)現(xiàn)Corin缺失與血管重構(gòu)密切相關(guān)。因此本文旨在通過體外高糖誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞株及糖尿病心肌病大鼠動(dòng)物模型,采用相關(guān)分子生物學(xué)及細(xì)胞生物學(xué)技術(shù),探討Corin在糖尿病心肌病發(fā)病機(jī)制中的作用,期待為糖尿病心肌病的防治提供新的視角和治療靶點(diǎn)。方法1.Real-time PCR檢測(cè)高糖誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞株Corin m RNA水平的表達(dá)。2.免疫熒光染色方法檢測(cè)高糖誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞株Corin表達(dá)水平。3.構(gòu)建Corin-siRNA H9c2心肌細(xì)胞,real-time PCR檢測(cè)Corin-siRNA的H9c2心肌細(xì)胞CORIN基因干擾效率。4.Western blot進(jìn)一步驗(yàn)證Corin-siRNA的H9c2心肌細(xì)胞CORIN基因干擾效率。5.普通光學(xué)顯微鏡下觀察Corin-siRNA H9c2心肌細(xì)胞的增殖情況。6.MTT比色法及臺(tái)盼藍(lán)染色方法檢測(cè)Corin-siRNA H9c2心肌細(xì)胞的活力。7.內(nèi)皮細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Corin-siRNA H9c2心肌細(xì)胞上清液對(duì)于EA.hy926內(nèi)皮細(xì)胞的影響。8.檢測(cè)1型糖尿病心肌病SD大鼠動(dòng)物模型隨機(jī)血糖、體重的改變;超聲心動(dòng)圖檢測(cè)1型糖尿病心肌病SD大鼠動(dòng)物模型心臟的構(gòu)型及功能變化,包括舒張末期左室內(nèi)徑(LVIDd)、舒張末期室間隔厚度(IVSd)、舒張末期左室后壁厚度(LVPWd)、收縮末期左室內(nèi)徑(LVIDs)、收縮末期室間隔厚度(IVSs)、收縮末期左室后壁厚度(LVPWs)、左室縮短分?jǐn)?shù)(left ventricular fractional shortening,%FS)、射血分?jǐn)?shù)(ejection fraction,EF)以及二尖瓣口舒張期流速E/A比值。9.免疫熒光染色檢測(cè)糖尿病心肌病大鼠心肌組織iso-lectin B4的表達(dá)情況。結(jié)果1.Real-time PCR結(jié)果表明,在高糖誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞株中,與NG組相比,Corin m RNA表達(dá)水平明顯下降(P0.01)。2.免疫熒光染色結(jié)果觀察到,在高糖環(huán)境下的H9c2心肌細(xì)胞株中,與NG、OC組相比,Corin表達(dá)水平顯著下降。3.Real-time PCR結(jié)果表明,導(dǎo)入H9c2心肌細(xì)胞中的Corin-siRNA序列1和序列2的CORIN基因干擾效率分別為55.86%、54.71%(P0.01)。4.Western blot結(jié)果表明,與NC-siRNA組相比,導(dǎo)入Corin-siRNA序列1和序列2的H9c2心肌細(xì)胞中,Corin在蛋白水平的表達(dá)明顯下降。5.普通光學(xué)顯微鏡下觀察,與NC-siRNA組相比,在Corin-siRNA H9c2心肌細(xì)胞的增殖明顯受到抑制。6.MTT比色法及臺(tái)盼藍(lán)染色法結(jié)果顯示,與NC-siRNA組相比,Corin-siRNA H9c2心肌細(xì)胞數(shù)和活力明顯下降(P0.01)。7.內(nèi)皮細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)表明,與NC-siRNA組相比,Corin-siRNA H9c2細(xì)胞抑制了EA.hy926內(nèi)皮細(xì)胞的損傷后修復(fù)。8.與對(duì)照組相比,糖尿病心肌病大鼠隨機(jī)血糖明顯升高(P0.01),體重明顯降低(P0.01)。超聲心動(dòng)圖監(jiān)測(cè)顯示與對(duì)照組相比,糖尿病心肌病大鼠LVIDs明顯升高(P0.01),IVSs、LVPWs均明顯降低(P0.01),%FS、EF明顯下降(P0.01),而IVSd減小(P0.05),LVIDd、LVPWd均明顯下降(P0.01),E/A值沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。9.免疫熒光染色結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,DCM組心肌組織iso-lectin B4的表達(dá)明顯下降(P0.01)。結(jié)論1.成功構(gòu)建Corin缺失的H9c2細(xì)胞模型;2.Corin具有心臟保護(hù)作用;3.Corin缺失對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞受損后修復(fù)功能有影響;4.Corin缺失在糖尿病心肌病血管重構(gòu)及內(nèi)皮損傷中具有重要作用;5.Corin在糖尿病心肌病發(fā)病機(jī)制中具有重要作用。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病心肌病 Corin 心房利鈉肽 內(nèi)皮功能受損 血管重構(gòu)
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.2;R542.2
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 縮略語/符號(hào)說明11-14
• 前言14-25
• 研究現(xiàn)狀、成果14-24
• 研究目的、方法24-25
• 對(duì)象和方法25-41
• 結(jié)果41-49
• 討論49-52
• 結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-61
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明61-62
• 附錄62-65
• 綜述 糖尿病心肌病發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展65-71
• 綜述參考文獻(xiàn)68-71
• 致謝71-72
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷72

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本文編號(hào)：558041