本文關(guān)鍵詞：接頭蛋白Gab1通過PI3K-AKT信號通路調(diào)節(jié)bFGF誘導(dǎo)的血管生成，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的探討生長因子受體結(jié)合蛋白2相關(guān)的接頭蛋白1(Gab1)在堿性成纖維細(xì)胞生長因子(b FGF)誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞形成新生血管過程中的作用及分子機制,為周圍動脈閉塞性疾病的基因治療提供實驗依據(jù)。方法利用小干擾RNA-慢病毒載體技術(shù)轉(zhuǎn)染人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞融合株(Eahy926)細(xì)胞,特異干擾Eahy926細(xì)胞Gab1基因,并通過實時熒光定量PCR和蛋白電泳的方法驗證所構(gòu)建的LV-Gab1-si RNA載體能否成功干擾Eahy926細(xì)胞Gab1蛋白的表達(dá)。Western blot檢測p AKT、AKT的表達(dá)量確定b FGF作用于Eahy926細(xì)胞的最佳刺激濃度和時間�；|(zhì)膠小管形成實驗直觀觀察接頭蛋白Gab1對b FGF誘導(dǎo)Eahy926細(xì)胞形成血管狀結(jié)構(gòu)的影響,進(jìn)一步通過蛋白電泳檢測細(xì)胞增殖與分化下游信號通路蛋白p Gab1、AKT、p AKT等蛋白的表達(dá)情況,研究其信號通路轉(zhuǎn)導(dǎo)機制。結(jié)果①Western blot結(jié)果顯示在b FGF終濃度為30ng/ml時Eahy926細(xì)胞p AKT蛋白條帶最清楚,與其他濃度組相比,AKT活化百分?jǐn)?shù)最高。②Western blot結(jié)果顯示在b FGF終濃度為30ng/ml、刺激時間為30min時Eahy926細(xì)胞p AKT蛋白條帶最清楚,與其他刺激時間組相比,AKT活化百分?jǐn)?shù)最高。③在倒置熒光顯微鏡下對比熒光視野和明視野表明在MOI值為100時,Eahy926細(xì)胞高表達(dá)綠色熒光蛋白。④實時熒光定量PCR結(jié)果顯示Gab1 si RNA組Eahy926細(xì)胞Gab1 m RNAs表達(dá)明顯減少。⑤基質(zhì)膠小管形成實驗結(jié)果表明Gab1 si RNA組Eahy926細(xì)胞小管形成長度明顯較短,且所形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)簡單且多不完整。⑥Western blot檢測下游信號通路蛋白分子結(jié)果示:Gab1si RNA組p AKT條帶明顯較模糊,AKT活化百分?jǐn)?shù)明顯降低。結(jié)論①體外b FGF刺激Eahy926細(xì)胞形成血管的最佳濃度和時間分別為30ng/ml、30min。②構(gòu)建的特異性LV-Gab1-si RNA載體在MOI值為100時能夠有效地轉(zhuǎn)染Eahy926細(xì)胞,敲除Gab1基因,干擾接頭蛋白Gab1的表達(dá)。③接頭蛋白Gab1參與b FGF誘導(dǎo)Eahy926細(xì)胞在基質(zhì)膠中形成新生血管。④接頭蛋白Gab1調(diào)節(jié)b FGF誘導(dǎo)的血管形成通過增加P85、p AKT蛋白的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：血管生成 生長因子受體結(jié)合蛋白2相關(guān)的接頭蛋白1 堿性成纖維細(xì)胞生長因子 小干擾RNA 周圍動脈硬化閉塞性疾病
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R543.5
【目錄】：

• 主要英文縮略詞表3-4
• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 前言8-10
• 材料與方法10-25
• 結(jié)果25-31
• 討論31-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-40
• 綜述40-50
• 參考文獻(xiàn)47-50
• 致謝50-51
• 碩士期間論文發(fā)表情況51

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1 李文獻(xiàn);接頭蛋白Gab1通過PI3K-AKT信號通路調(diào)節(jié)bFGF誘導(dǎo)的血管生成[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：接頭蛋白Gab1通過PI3K-AKT信號通路調(diào)節(jié)bFGF誘導(dǎo)的血管生成，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：505383